Antecedentes
Las plaquetas son pequeños cuerpos granulados anucleares que se adhieren, agregarse y formar un tapón de plaquetas en sitios de lesión vascular para prevenir la pérdida de sangre. la concentración de plaquetas en la sangre es de aproximadamente 300.000 /ul, y que normalmente tienen una vida media de 4 días. Se forman a partir de células madre gigantes comprometidos llamadas megacariocitos, ya que pinzan bits de su citoplasma y extruir ellos en la circulación sanguínea. Las plaquetas tienen microtúbulos alrededor de su periferia y una membrana ampliamente invaginado en contacto con el fluido extracelular.
sus membranas contienen receptores para una serie de sustancias, incluyendo el colágeno, difosfato de adenosina (ADP), el factor de von Willebrand y fibrinógeno. Algunos de los contenidos de su citoplasma tienen su origen en los megacariocitos, algunos son sintetizados internamente y otros se quedan después de la endocitosis. Entre los orgánulos intracelulares dos tipos de gránulos:
1) gránulos densos, que contienen las sustancias no proteicas, que son secretadas en respuesta a la activación de plaquetas, incluyendo la serotonina, ADP /ATP, histamina, dopamina y catecholamines.1
2) * -granallas, que contienen secretadas proteins.1-3 Entre estas proteínas almacenadas son factores de crecimiento angiogénicos y mitogénicos que son esenciales para la regeneración de tejidos duros y blandos y reparación. Marx4 de América del Norte y Anitua et al 1 de Europa han demostrado que se obtiene más temprano y una mayor densidad ósea en los sitios quirúrgicos tratados con PRP en comparación con los sitios de control. Los factores de crecimiento en las plaquetas son factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento transformante (TGF), factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), derivado de plaquetas factor de crecimiento epidérmico (PDEGF), y la insulina factor-1 de crecimiento -como (IGF-1). Estos participan de diversas maneras en la estimulación de la quimiotaxis, proliferación celular y la maduración de la herida en healing.1
En el plasma rico en plaquetas de la década de 1990 (PRP) se introdujo como un biomaterial.5,6 autólogo Una variedad de máquinas se han adaptado para lograr la separación centrífuga óptima de PRP para el uso terapéutico de pequeñas cantidades de citrato blood.7-13
En 2002, Gonshor9 desarrolló un procedimiento caracterizado por un método de doble giro centrifugación usando una centrífuga no automatizado para secuestrar y concentrar las plaquetas a un nivel valores de sangre total de cuatro a ocho veces el valor inicial. Las concentraciones técnica produjo de PDGF-AB encima de 500% y TGF, mayor que 800%. Su pruebas mostraron que el rendimiento de plaquetas 85,1% se mantuvo en reposo durante todo el procedimiento, el mantenimiento de su integridad y viabilidad, sin la activación inadvertida. La trombina bovina 5000 unidades y solución de cloruro de calcio al 10% se utilizaron para la activación de las plaquetas, creando un gel de PRP.
En 2005 Marx y Garg15 publicaron un excelente libro de texto sobre "Aplicaciones dentales y craneofaciales de plasma rico en plaquetas". En este texto, los autores afirman que "los factores de crecimiento se han convertido en el" Santo Grial "en la cicatrización de heridas" y proyectado preparación de trombina bovina liofilizada como el estándar para iniciar la coagulación de PRP y la activación de las plaquetas.
Sin embargo, una año antes, en 2004, la trombina bovina dejó de estar disponible en Canadá. Este evento provocó una búsqueda de una alternativa a la trombina bovina. trombina autólogo y /o trombina humana recombinante eran las opciones lógicas. Por lo tanto, la necesidad se convirtió en la madre de la invención, y una búsqueda se puso en marcha una alternativa.
Sujetos
Este estudio consistió en 21 pacientes que requirieron la colocación de implantes y /o injerto óseo. De los 21 pacientes necesitaron 5 colocación inmediata del implante con el injerto óseo, sólo el 8 por la colocación del implante es necesario, y el 8 de hueso es necesario injertar solamente.
Materiales y métodos
Materiales
1) centrifugadora de propósito general (no automatizado) con un rotor de seis posiciones, o una centrífuga automatizado.
2) 4 tubos al vacío de color amarillo-top -10ml que contienen dextrosa citrato ácido (ACD-a) solución.
3) 6 -10 ml tubos al vacío rojo-top noncoagulant
4) 21 -.. calibrador de aguja de mariposa y de calibre 19 aguja de mariposa
5) 21/2 "(63 mm) aguja roma .
6) 3 "(76 mm) aguja roma.
7) Solución al 10% de cloruro de calcio.
8) 6- jeringas estériles de 5 ml.
9) 6 -... 1 ml jeringas estériles
10) contenedor estéril para PRP
11) contenedor estéril para PPP
12) contenedor estéril para sérica 13) 4 platos de Dappen estériles. 14) del paquete de membrana de colágeno estéril. (Colla cinta o cinta Neo) 15) Gradilla. La sangre recogida y procesamiento Se tomaron tubos de sangre de la región antecubital con un calibre 21 o calibre 19 aguja de mariposa y se recoge en amarillo-top tubos de recogida de sangre 4-10ml que contienen dextrosa citrato ácido solución (ACD-A). Se recogieron dos tubos adicionales de sangre como se ha descrito anteriormente, excepto en rojo-top tubos al vacío de 10 ml sin anticoagulante. (Cada uno de los dos tubos de tapón rojo fue marcado con una X) (Fig. 1). Los cuatro tubos de color amarillo-top de sangre fueron procesados para producir PRP usando el Gonshor Procedimiento9 (figs. 2-4). Los tubos de dos RedTop de sangre se dejaron de lado a coagularse. El uso de la centrífuga de propósito general que se describe en la publicación de Gonshor, 9 de los tubos de dos tapón rojo con la sangre coagulada se centrifugaron a 2000 rpm durante 10 minutos a lo largo de con los cuatro tubos de tapón rojo con plasma para la segunda vuelta (Fig. 3). El suero se retiró cuidadosamente de cada tubo con una jeringa estéril y se agruparon, en un recipiente estéril (Fig. 5). Los recipientes que contienen PRP (4.5mls), PPP (6.5mls) y suero (2,5 ml) se cubrieron y se colocan en la operatoria quirúrgica junto con un vial de cloruro de 10% de calcio, platos de Dappen estériles, 5 ml y jeringas estériles de 1 ml (Fig . 6). ACTIVACIÓN dEL PRP con el fin de activar el PRP para obtener un gel de plasma rico en plaquetas, 1 ml de PRP se dispensó en cada uno de los cuatro platos de Dappen (Fig. 7). 10% de cloruro de calcio se añadió a cada plato dappen en una proporción de 1 CaCl2: 5 PRP en volumen (0,2 ml CaCl2: 1 ml PRP). a continuación, se añadió suero al PRP calcificada en cada plato dappen en una proporción de 1 Suero: 2 PRP en volumen (0,5 ml de suero: 1 ml PRP). El complejo se dejó reposar a temperatura ambiente y se registró el tiempo para la formación de gel PRP (Fig. 8). El proceso de activación anteriormente también se consiguió mediante la aspiración de las cantidades apropiadas de PRP calcificado y suero en un 5 ml. jeringuilla. El complejo activado podría entonces ser entregado a través de la jeringa a cualquier sitio diana. Cuando se hizo el injerto óseo, se añadieron hueso autógeno, aloinjerto, xenoinjerto o un injerto compuesto de PRP calcificado, a continuación, se añadió suero para producir un gel PRP en presencia del material de injerto (Figs 9 & amp;. 10). El tiempo para la formación de gel PRP se registró y luego el complejo gel-injerto PRP fue colocada in situ. En todos los casos donde se utilizaron membranas reabsorbibles, para la entrega de factores de crecimiento in situ, oclusividad celular y /o la regeneración tisular guiada, las membranas se sumergieron en PRP calcificada, que se activa con suero luego se coloca inmediatamente in situ entre el hueso y el tejido blando antes de gel de PRP fue formado. Se registraron los tiempos para la formación del gel in situ PRP. Cuando se utilizó plasma pobre en plaquetas (PPP) como un sellante de tejido también se activa con cloruro de suero y 10% de calcio. Después de dispensar 1 ml de PPP en un cloruro de calcio plato dappen se añadió en una proporción de 1 CaCl2: 2,5 PPP en volumen (0,4 ml CaCl2: 1 ml PPP). a continuación, se añadió suero en una proporción de 1 Suero: 1 PPP en volumen (1,0 ml de suero: 1 ml PPP). El complejo se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego utilizados para sellar los puntos de línea de incisión y sutura de entrada quirúrgicos (Fig. 11). Se dejó en reposo durante 5 minutos in situ. Este proceso también se llevó a cabo mediante la aspiración de los respectivos volúmenes de calcificada PPP, 2 y suero en una jeringa de 5 ml y se deja reposar durante 10 minutos antes de su uso. Resultados El volumen de PRP concentrado obtenido ascendió a un promedio de 1,1 ml /tubo. Esto se compara favorablemente con resultados.9 de Gonshor El volumen total de PRP obtenido a partir del 4 citrato tubos de sangre fue 4.5mls. El volumen de suero obtenido a partir de los 2 tubos de sangre entera coagulada después de la centrifugación fue de 2,5 ml. El volumen de PPP obtenido fue de 6,5 ml. Para la formación de gel de plasma rico en plaquetas in vitro (Fig. 8), el intervalo de tiempo fue de 5-10 minutos. El rango fue de 30-60 segundos en situ. procesamiento de la sangre completa tomó aproximadamente 30 minutos. PRP gel se formó rápidamente en la presencia de autoinjerto (Fig. 9) y aloinjerto (Fig. 10). Un coágulo de PPP se formó en 10 minutos cuando se añadió suero para calcificado PPP (Fig. 11). Esto fue utilizado como un sellante de tejido autólogo para los puntos de la línea de incisión y sutura quirúrgicas de entrada. DISCUSIÓN beneficios fisiológicos de PRP Con el fin de aprovechar los beneficios fisiológicos de PRP , es más importante que los factores de crecimiento liberados de plaquetas viables, ya que es durante el acto de la exocitosis de gránulos que la plaqueta completa structure.2,3,9 terciaria de la proteína del factor de crecimiento la estructura terciaria, con su conformación única es el más biológicamente estructura activa. La conformación molecular permite que la proteína de presentar adecuadamente su sitio activo a su sustrato específico para que la catálisis puede proceder. Anitua et al 1 han enumerado una serie de situaciones en las que guiaron la secreción de productos de plaquetas autólogas puede promover la curación y la reparación de heridas. Las situaciones son: cirugía maxilofacial y los injertos de hueso, cirugía de implantes dentales, cirugía ortopédica y la reconstrucción ósea, cirugía plástica facial y cosmético, úlceras en la piel, la reparación del agujero de la cirugía de la retina-ojo, la medicina deportiva-cartílago y reparación del tendón. Hasta la fecha, el uso más generalizado de PRP es en odontología, 4,5,11,12,15 donde varios autores han mostrado que la administración de PRP en una variedad de sitios quirúrgicos haber precipitado rápidamente tanto duro y blando regeneración de tejidos y repair.1 , 5-7,15,16 Otros afirman que el uso de plaquetas autólogas puede influir positivamente en el resultado cuando se usan autoinjertos, aloinjertos, xenoinjertos y para el aumento de la cresta alveolar procedures.15,16 la regeneración ósea requiere el reclutamiento , la proliferación y la maduración de los osteoblastos que se derivan de cells17,18 madre mesenquimales y un estudio sugiere que productos de la liberación de plaquetas también promueven la migración de cells.19 madre mesenquimales Gonshor9 afirma que la combinación de los factores de crecimiento PDGF y TGF se ha demostrado para acelerar la reparación ósea, 20 promover la proliferación de fibroblastos, aumentar la vascularización del tejido, la velocidad de la formación de colágeno, 21,22 mitosis de las células madre mesenquimales, células endoteliales, así como los osteoblastos, que juega un papel clave en la velocidad y extensión de la formación ósea. una serie de 20 pacientes sometidos a múltiples extracciones, coágulo de PRP se depositó en las tomas en un lado de la boca mientras que la otra sirvió como control. Las biopsias óseas fueron tomadas en lugares de extracción de entre 10 y 16 semanas. En la mayoría de los pacientes con coágulos PRP, la regeneración ósea era muy amplio y tejido óseo era compacto con trabéculas bien organizadas. En contraste, en el grupo de control de la cavidad se llena principalmente con tissue.1 conectivo Mediante el uso de modelos animales algunos autores han demostrado que, al igual que en los seres humanos, la adición de PRP-coágulo de implantes de titanio alrededor rugosas en el momento de su implantación en goats23 y minipigs24 mejorado tanto la extensión y calidad de la regeneración ósea alrededor de los implantes. lo que está iniciando el coágulo? es un hecho fisiológico bien conocido que la sangre comienza a coagularse cuando se expone al colágeno en vivo. El hecho de que una pieza de colágeno reduce el tiempo de activación es prueba de que se proporciona una superficie adecuada para la iniciación de la cascada de coagulación. Por tanto, los precursores y enzimas del sistema de coagulación deben estar presentes en el suero que se utiliza de este modo iniciar la cascada de coagulación. La trombina normalmente no está presente en el suero después de la coagulación es completa ya que su producción se detiene por la inhibición de la antitrombina III de factores 1XA, Xa, XIa, y XIIa con la ayuda de su heparina cofactor, y lo que queda se compleja con la trombomodulina de la fibrinolisis con el ayuda de la proteína C, proteína S, el activador tisular del plasminógeno (tPA), activador del plasminógeno uroquinasa del plasminógeno (uPA) y la plasmina. la investigación que hay que hacer en la cuantificación de los componentes precursores de coagulación y enzimas del suero y su estabilidad bajo condiciones variables. Otros estudios también deben llevarse a cabo en la estabilidad de los factores de crecimiento después de haber sido liberado de las plaquetas resultados in situ Los resultados obtenidos in situ son similares a los resultados obtenidos por Anitua et al 1 cuando se riegan superficies periimplantarias con PRP calcificado mezclado con sobrenadante extruido de un coágulo retraída inmediatamente después de la colocación del implante. Los resultados in vitro Los tiempos de coagulación ya obtenidos in vitro podría ser una indicación de que las concentraciones de los precursores de la coagulación y enzimas pueden ser relativamente bajas en el suero y se necesita tiempo para que las reacciones se desarrollan. Sin embargo, una vez que se inició la activación de la coagulación posterior procedió rápidamente. Esto es consistente con la naturaleza autocrina /paracrina de la comunicación intercelular a través de mediadores químicos durante la activación de plaquetas. Anitua et al1 establece que la administración de las plaquetas activadas en coágulo de fibrina o cola de fibrina proporciona un soporte adhesivo que puede limitar la secreción a un lugar elegido, y la presentación de los factores de crecimiento unido a las plaquetas y /o de fibrina puede dar como resultado una actividad mejorada sobre las proteínas recombinantes . Extendido en los tiempos de activación in vitro podría ser ventajoso cuando el hueso autógeno, aloinjertos y xenoinjertos son para ser mezclado con PRP antes de la colocación in situ de los injertos de aumento de cresta, injertos de mantenimiento cresta, injertos de elevación de seno, reparación de membrana de Schneider así como la rápida curación de los tejidos blandos y maduración. CONCLUSIÓN el procedimiento que aquí se presenta muestra cómo la trombina autóloga en el suero del paciente se puede utilizar para activar las plaquetas. Debe proporcionar una alternativa segura para su uso terapéutico. La fácil disponibilidad de PRPgel autólogo con la liberación de factor de crecimiento y cola de fibrina autóloga como un sellante de tejido muestra que la trombina autóloga en el pacientes suero puede activar eficazmente las plaquetas y de ese modo proporcionar una alternativa para continuar la estimulación de la regeneración de tejidos, la reparación y la maduración en odontología y medicina . Precaución * Los niveles de factor de crecimiento, recuento de plaquetas y tiempos de activación varían de individuo a individuo, así como con la edad y estado de salud. * El envejecimiento de suero y PRP puede afectar a los tiempos de activación ya que las proteínas son muy lábiles in vitro. * Cuando se utiliza este procedimiento, se deben tomar medidas para asegurar que se proporciona un entorno de máxima estéril para la recogida de sangre, procesamiento de PRP y la activación. Dr. Smith ha sido en la práctica privada durante 25 años en New Westminster, BC. En 2004, inventó un procedimiento específico para el paciente para la activación de la trombina autólogo de plaquetas en plasma rico en plaquetas (PRP). Salud Oral da la bienvenida a este artículo original. me gustaría agradecer al Dr. Aron Gonshor de Montreal, el Dr. Ross MacGillivray, el Dr. Ed Pryzdial, y el Dr. Dana Devine, del Centro de Investigación de la sangre de la Universidad de Columbia británica, por su inestimables discusiones. Divulgación El autor afirma que no tiene interés financiero en cualquier empresa o cualquiera de los productos mencionados en este artículo. Referencias 1.Eduardo Anitua, Isabel Andia, Bruno Ardanza, Paquita Nurden (3,4), Alan t. Nurden. plaquetas autólogas como fuente de proteínas para la curación y regeneración de tejidos. Diario de Trombosis y Hemostasia 2004; 91: 4-15 2.Rendu M, Brohard-Bohn B. 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plasma rico
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