Resumen Antecedentes
periodontal inflamación se caracteriza por lesiones en los tejidos de colágeno, epiteliales, óseas. Las hipótesis a ser probadas fueron relación entre la s100, BCL2 y mieloperoxidasa en los tejidos gingivales (MPO Cómo afecta el nivel de S100, BCL2). El objetivo de este estudio fue investigar la expresión de la s100, la expresión y la expresión de BCL2 mieloperoxidasa en la inflamación periodontal.
Métodos
27 pacientes (epulis de células gigantes) y 30 pacientes (agudos y crónicos) fueron inflamaciones incluidos en el estudio para la expresión s100, la expresión de BCL2 y expresión mieloperoxidasa por inmunohistoquímica y hematoxilina - eosina.
resultados
gigantes-células en epulis positividad para mieloperoxidasa se ha observado en 100% Sin embargo, sólo 75,31% de las células gigantes fueron positivos para bcl2 expresión. Aguda 98,2% y 89,28% crónica inflamación fue un positivo significativo de la mieloperoxidasa. Los hallazgos inmunohistoquímicos de s100, bcl 2 y la mieloperoxidasa en capas epiteliales han mostrado el resultado de 100%, 82,2%, 100% de células positivas en aguda y 100%, 78,25%, 100% en proceso crónico de inflamación, respectivamente.
Conclusión
los resultados indican que la patogénesis de la inflamación periodontal puede implicar la inhibición de la muerte celular, a través de la sobreexpresión de bcl-2, debido a la identificación de factores de mieloperoxidasa (como resultado el daño del ADN por el producto de la catálisis). Los niveles más altos de actividad s100 se han encontrado en sitios con inflamación crónica.
Antecedentes
infecciones bacterianas son los agentes etiológicos más importantes implicados en la periodontitis crónica y aguda, es la enfermedad multifactorial que conduce a la destrucción del periodonto hueso [1]. infiltración de células inflamatorias ha sido el resultado de las células plasmáticas periodontales: neutrófilos, T & amp; linfocitos B- y macrófagos [2]. lesiones periodontales se han caracterizado por una persistencia de la infiltración de células inflamatorias, que puede ser responsable de la médula colágenos resorcinol. La investigación realizada por Baelum V. & amp; López R. [3] demostró que la enfermedad periodontal afecta a entre el 10% y el 15% de la población del mundo, siendo la principal causa de pérdida de dientes.
Células inflamatorias (células plasmáticas) han expresado en mieloperoxidasa. neutrófilos polimorfonucleares se expresan en gran medida la mieloperoxidasa en las células plasmáticas [4]. El gen de mieloperoxidasa se encuentra en el cromosoma 17 (17q23.1) [5].
Mieloperoxidasa (MPO) han catalizada la síntesis de ácido hipocloroso microbicida que permite la defensa contra las bacterias [6]. Además, las células plasmáticas sintetizan ácido hipocloroso a partir de H
2O 2 y NaCl. Radical hidroxilo (-OH) es principalmente activo en moléculas importantes perjudiciales tales como proteínas de ADN y lípidos [7]. El peróxido de hidrógeno (H 2O 2) es un potente agente de especies de oxígeno, es capaz de atravesar la membrana nuclear y dañar el ADN. [8] Hay un creciente apoyo a la afirmación de que la inflamación induce daño del ADN que conduce a la apoptosis en las células periodontales [9] Además, los estímulos apoptóticos pueden desencadenar la apoptosis a través de diferentes mecanismos, incluyendo receptores y ligandos de muerte celular específicas, tales como CD95 [10 ], las señales de estrés, la inducción de moléculas directa o indirectamente en la apoptosis, a través de p53. Bcl2 es un miembro de la familia de proteínas anti-apoptóticas que pueden prevenir o reducir la muerte celular inducida por una variedad de estímulos [11]. El gen BCL-2 fue identificado en el cromosoma humano t (14; 18) [12]. La vía de la muerte intrínseca se inicia por la liberación mitocondrial de citocromo c
, un proceso que es inhibida por las proteínas BCL2 anti-apoptosis [13].
Proteínas S100 han expresado en el citosol de neutrófilos, los monocitos, los macrófagos activados, y queratinocitos y liberado durante la activación o la muerte de estas células. La familia de genes S100 incluye al menos 13 miembros que ubican como un grupo en el cromosoma 1q21 [14]. proteínas S100 también conocidas como antígenos L1, calgranulina A y B, los macrófagos inhibidor de la migración, la proteína relacionada con el factor (MRP) y el antígeno de la fibrosis quística, tienen varias funciones en las reacciones inflamatorias [15].
los resultados por Sun-Hee Heo et . Alabama. [16] han demostrado los patrones de expresión de S100A2 en los tejidos gingivales durante la estimulación lipopolisacárido bacteriano. S100A2 expresión se reguló por lipopolisacárido bacteriano.
Tenemos hipótesis establece que existe la relación entre la s100, BCL2 y mieloperoxidasa en los tejidos gingivales (MPO sí afecta el nivel de S100, BCL2). Francia El objetivo de este estudio es comparar los niveles de expresión de s100, BCL2 y MPO en los tejidos gingivales en diferentes etapas de la enfermedad periodontal y en comparación con los épulis de células gigantes.
Métodos
la selección del paciente y de la encía tissues colección
las muestras de estudio han incluido el periodontal y epulis tejidos de los pacientes. Los sujetos fueron divididos en dos grupos iguales:
Grupo de pacientes (Grupo 1). especímenes granuloma de células gigantes se obtuvieron de 27 personas que tenían un diagnóstico morfológico de granuloma de células gigantes (ocho hombres y 14 mujeres, rango de edad 30 a 70 años, edad media, 47,51 ± 12,37 años).
grupo control (grupo 2) consistió en 30 pacientes que habían muerto en el hospital regional de Sumy. Los pacientes tenían diversos diagnósticos somáticas (no complicaciones ateroscleróticas) y dentales - parodontit. 17 varones y 13 mujeres, rango de edad 43 a 69 años, edad media, 57.33 ± 8,31 años han estado investigando. Se recogieron las muestras de encía crecido durante los procedimientos de corte mandíbulas. Después de muestras de tejidos teñidos grupo 2 por foo hematoxilina eosina, todas las muestras se dividieron en dos grupos (agudos y crónicos). El grupo de control tiene dos subgrupos. subgrupos agudas - 13 (5 varones y 3 mujeres, rango de edad 43 a 69 años, edad media, 54.38 ± 7.9 años). subgrupos crónicas. - 17 (7 hombres y 15 mujeres, rango de edad 44 a 68 años, edad media, 59,58 ± 8,11 años): perfil del consentimiento escrito informado se obtuvo de todos los sujetos de estudio, de acuerdo con las directrices establecidas por el Consejo de Salud de Ucrania. El presente estudio fue aprobado por la Universidad Estatal de Sumy (Protocolo nº 5/2012.): Perfil del hematoxilina y eosina (H & amp; E).
Las manchas se han utilizado durante al menos un siglo y que sigan siendo esencial para la identificación de diversos tejidos tipos y el cambio morfológico.
Immunostainings
para S100, BCL2 y MPO se han realizado fijado en formalina (pH 7,4) de tejido. secciones de tejido embebidas en parafina han sido tratados monoclonal de ratón anti-dy s100, anti-bcl2 y anti-mieloperoxidasa (Thermo Fisher Scientific UK). En pocas palabras, 4 micras de espesor secciones de tejido se dewaxed en xileno y se colocaron en agua a través de alcoholes graduados. la recuperación de antígeno se ha realizado en el microondas diapositivas en tampón 10 mM de citrato (pH 6,2) durante 30 minutos a alta potencia, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para eliminar la actividad peroxidasa endógena, las secciones han sido tratados con peróxido de hidrógeno recién preparada 1,0% en la oscuridad durante 30 min a 37 ° C de temperatura. La unión de anticuerpo no específica fue bloqueada por medio de suero de bloqueo. Las secciones se incubaron durante 30 min, a 37 ° C de temperatura, con los anticuerpos primarios contra s100, bcl2 y mieloperoxidasa diluidos 1: 100 en solución salina tamponada de pH de fosfato (PBS) 7,2 luego un lavado triple con PBS sigue. Anti- (IgG de ratón) conjugado de peroxidasa de rábano picante (01:40 000 dilución) se ha cumplido para la detección de la S100, Bcl2 y MPO anticuerpos primariy, a continuación, las secciones se incubaron durante 20 min, a 37 ° C de temperatura. El color fue visualizado por DAB. Francia El aspecto de los factores positivos se detectó semicuantitativamente mediante el recuento de células gigantes positivos en el campo visual.
Los datos fueron analizados utilizando el software STATISTICA 8.0, versión de usuario STA862D175437Q. Los resultados han sido presentados como media ± desviación estándar. La prueba de haber sido normalizar su uso antes del análisis de los datos. Además, se aplicó el método de Student no paramétrica para llevar a cabo un análisis comparativo simple. El valor de P & lt; 0.05 han sido considerados como una significativa.
Resultados
Los grupos 1 y 2 de los hombres y las mujeres se concentraron sobre todo rango de edad de 30 a 70 años. Grupo 1 células gigantes ocurrieron en la mandíbula inferior (55%) con más frecuencia que en el maxilar superior. En el grupo 2 los pacientes se han dividido en 13 con aguda y 17 con inflamaciones crónicas.
En la Fig. 1a A se observó infiltración de células bajo tamaño en la inflamación aguda. la infiltración celular significativa y el epitelio en proliferación (Fig. 1b) parecían ser más intensiva en la inflamación crónica. células inflamatorias agudas y crónicas están circulando leucocitos, células plasmáticas y macrófagos tisulares. Figura 1 Los tejidos periodontales hematoxilina y eosina (x100 aumentos) Un (a) - diminuto células de infiltración con edema superpuesta, B (a) - capas del epitelio, C (b) - grandes células de infiltración con edema superpuesta, D (a) - la proliferación epitelial, E (c) - zona de la hemorragia, F (c) - células gigantes
epulis periférico de células gigantes se muestra en la Fig. examen microscópico 1c ha revelado el tejido con la abundancia de células gigantes (Fig. 1c F), tejido conectivo fibroso, áreas de hemorragias (Fig. 1c E) y unos capilares. No había ningún signo de malignidad. La inflamación crónica cuando los macrófagos no logran desintegrado diversas partículas, se fusionan y forman células gigantes multinucleadas. Además, las células gigantes morfológicamente distintos también aparecen en algunos tumores también.
S100, Bcl2 y MPO expresa en células gigantes. expresión S100, la expresión de BCL2 y expresión mieloperoxidasa en las células gigantes epulis se muestran en la Fig. 2. Por inmunohistoquímica, 100% de las células gigantes parecían ser positivo para la mieloperoxidasa, mientras que sólo el 75,31% de las células gigantes fueron positivos para Bcl 2 (P & lt; 0,05). Por el hecho de proteína s100 ha expresado en 10,72% de células gigantes. Mieloperoxidasa ha expresado fisiológicamente en las células plasmáticas de epulis 87,69%. s100 y bcl 2 han expresado en las células plasmáticas 24,34% (P & lt; 0,05) y 11,28%, respectivamente, bcl 2 y mieloperoxidasa expresión ser débil o ausente en el tejido conectivo. La figura 2 Expresión de s100, bcl2and mieloperoxidasa en el tejido gingival (ampliación x100): A - Las capas de epitelio con la expresión de la mieloperoxidasa, B - Células de la sangre de infiltración con la expresión de la mieloperoxidasa, C - pericellular y edema perivascular, D - Células de la sangre de infiltración con la expresión mieloperoxidasa , e - las capas de epitelio con la expresión de la mieloperoxidasa y la proliferación, M - células gigantes con la expresión de la mieloperoxidasa, G - estroma fibroblástico, H - células de la sangre de infiltración con la expresión de la mieloperoxidasa, I - edema pericellular y perivascular, G - células de la infiltración de sangre con 2expression Bcl , K - las capas de epitelio, con alto nivel de expresión de bcl 2, L - las capas de epitelio con 2expression bcl, N - estroma fibroblástico, M - células de la sangre de infiltración con Bcl 2 de expresión, O - pericellular y perivascular edema, P - gigante células con expresión de bcl 2, Q - células de la sangre de infiltración con baja 2expression bcl, R - células de la infiltración de sangre con la expresión s100, S - pericellular y edema perivascular, T - capas del epitelio con la expresión s100, T - capas del epitelio con baja expresión s100, V - estroma fibroblástico, W - células de la sangre de infiltración con la expresión s100, X - estroma fibroblástico, Y - células gigantes con "mala" la expresión s100 Francia El inmunoexpresiones de s100, BCL2 FIN MPO (Grupo 2) han sido confirmados por la presencia de citoplasma manchado marrón en la infiltración de células. En general, s100 tinción fue más intensa en las células plasmáticas. En la inflamación aguda S100 (Fig. 2), sólo 36,2 ± 5,3% de las células parecía ser positiva. La infiltración de células, mostró inmunorreactividad BCL2 supuso el 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) en el proceso agudo (Fig. 2). Mieloperoxidasa ha expresado en 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01). Células positivas en la inflamación aguda de
Figura 2 muestra los resultados de la s100, bcl2 y expresión MPO en proceso crónico
mieloperoxidasa 82,. 28 ± 2,5% de P & lt; 0,01 se expresó en la infiltración de células plasmáticas durante la inflamación crónica. Bcl 2 se expresó en células plasmáticas crónicas infiltración 55,67 ± 6,1% P & lt; 0.05. Тhe inmunoexpresiones de S100 en la infiltración de células ha mostrado el resultado de células positivas 95,0 ± 0,31%.
Тhe inmunoexpresiones de s100, bcl2 y MPO en capas epiteliales (proceso agudo) han mostrado el resultado de 100%, 82,2 ± 2,93% y 100%, respectivamente. En el proceso de la inflamación crónica de las células positivas han demonstratrd s100 - 100%, BCL2 - 78,25 ± 4,23% y mieloperoxidasa -. 100% respectivamente
Discusión
Este estudio ha afirmado que la MPO fue capaz de estimular mayores de la expresión de BCL2 en las células de la inflamación durante el proceso crónico y agudo. actividad de la mieloperoxidasa expresa en neutrófilos reclutados a la encía después de insultos química o inmunológica contribuye a la destrucción del tejido. Meloperoxidase podría influir en la extensión y /o la severidad de la enfermedad periodontal [17].
Alto nivel de la MPO se han observado en las células gigantes. Elevados niveles de expresión de BCL2 pueden prevenir la apoptosis celular, induciendo de esta manera las células inflamatorias a permanecer localmente en el tejido periodontal, causando la consiguiente secreción de citoquinas excesiva que conduce a la destrucción progresiva de los tejidos periodontales [1]. Mieloperoxidasa puede ser liberado a partir de neutrófilos activados por la desgranulación sólo en niveles moderados [18], y la disponibilidad bcl2 protege regiones. La citolisis de neutrófilos en el curso de la formación de la inflamación podría proporcionar un mecanismo de liberación de [18, 19] y explicar los altos niveles de mieloperoxidasa y S100. Actividad de S100A12 y de la proteína C-reactiva puede ser marcadores de la actividad inflamatoria en la periodontitis crónica [20]. Estudios anteriores han sugerido que la apoptosis está implicada en la patogénesis de la enfermedad periodontal inflamatoria [21]. También se ha demostrado que la frecuencia más alta de Bcl-2 expresión resulta en la destrucción periodontal progresiva [22].
Gamonall et all. [23] no ha encontrado diferencias estadísticamente significativas en varions cantidad de BCL2 en encía sana y en la encía de pacientes con enfermedad periodontal. Nuestros estudios han confirmado la vista de Pandilova [24] y Ellis et all. [25] que la progresión crónica de la disminución de la inflamación expresa bcl-2. En fibroblastos gingivales humanos con la activación de la inflamación de BCL2 no se ha observado en diferentes etapas de los epulis de infección y de células gigantes. Sule Bulut et all. [26] resultados indican que la patogénesis de la ciclosporina A sobrecrecimiento gingival inducido podría implicar la inhibición de la apoptosis y la sobreexpresión de bcl-2 en la fijación de una alta concentración de ciclosporina A. Nuestro estudio ha demostrado un alto nivel de expresión de BCL2 y la inhibición de la apoptosis en las células de epitelio gingival. Creemos que esto se debe a las funciones de protección del epitelio. En epitelio gingival s100 también se relaciona con la etapa de diferenciación [27]. Se sabe que estas células positivas para activar los macrófagos o neutrófilos [28]. La investigación realizada por Saito et al. [29] demostraron numerosas células epiteliales bcl-2-positivos en las biopsias gingivales de pacientes que estaban tomando nifedipina y la fenitoína, que indican que esta proteína podría estar involucrada en el desarrollo de hiperplasia gingival nifedipina inducida. Creemos que la presencia de la proteína Bcl-2 no es un indicador de cursos favorables de células gigantes epulis.
S100 juega un papel importante en la respuesta inmune relacionada con la periodontitis. s100 se une 2 Ca2 + y 2 iones Zn2 +. Si Zn2 + se une a S100 que disminuye su Ca2 + afinidad. S100 también interactúa con p53 en un Ca2 + -dependiente, que afecta a la estabilidad de la interacción S100-p53 [30] interacción Aforesaid s100-p53 conduce a la inhibición de la apoptosis durante la inflamación. La proteína Bcl-2 es un potente inhibidor de la muerte celular, mientras que la proteína p53 de tipo salvaje activa la vía apoptótica [5]. P53 mutado
pierde esta función y permite la proliferación de células neoplásicas. Bcl-2 también modula la función de p53 y activa la proliferación celular y la transformación [31].
Thr expresión de S100 se han detectado como proinflamatoria fagocitos células en sitios de inflamación intestinal [32, 33]. enfermedades autoinmunes sistémicas (dermatomiositis, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Kawasaki, etc.) tienen una clara asociación con la expresión en los macrófagos S100 infiltraton con la degeneración del tejido [34, 35].
Conclusión Las investigaciones sobre
marcador BCL2 en células de la encía durante periodontal la inflamación que sugerencia de que periodonto tejidos, continuamente expuesta a las infecciones bacterianas pueden contener células con alto nivel de resultados de mieloperoxidasa que el daño del ADN por producto de la catálisis.
Los niveles más altos de actividad s100 se han encontrado en sitios con inflamación crónica. Nuestros resultados sugieren que la baja expresión s100 puede jugar un papel importante en la actividad de las células gigantes en epulis de células gigantes. Que se considera que los factores más importantes en el pronóstico del granuloma de células gigantes. Como resultado de nuestras investigaciones hemos creado un diagrama de la Fig. 3. La figura 3 S100, BCL2 y la interacción proteína myeloperoxid durante la inflamación periodontal
Declaraciones
Agradecimientos
Los autores desean agradecer al Laboratorio de Inmunología de la Universidad Estatal de Sumy.
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de la competencia. intereses
los autores declaran que no tienen intereses en competencia.
contribuciones de los autores PCCF fueron los responsables del diseño del estudio. SCT analizado e interpretado los datos. MTX escribió el informe. BFPP hizo el trabajo de laboratorio. RM, ayudó a redactar el manuscrito. Todos los autores leído, comentado y aprobado el artículo final.
