probiótico
Resumen Antecedentes
La suplementación probiótica puede reducir el número de estreptococos mutans (MS). Una de sus mecanismos propuestos es la inmunomodulación. Salival péptido de neutrófilos humanos 1-3 niveles (HNP1-3) han sido previamente demostrado ser superior en libres de caries que en los niños de caries susceptibles, lo que sugiere su papel preventivo contra la caries. El objetivo fue comparar los niveles salivales HNP1-3 entre un grupo de intervención con probióticos y un grupo control.
Métodos
se llevó a cabo un ensayo clínico doble ciego aleatorizado. Sesenta niños en edad escolar se distribuyeron por igual a cualquiera de una intervención o grupo de control. El uso de una cepa probiótica, Lactobacillus paracasei
SD1, ha demostrado reducir los números de MS en voluntarios. En el conjunto de saliva no estimulada, los niveles de HNP1-3 se ensayaron por ELISA, y MS y el recuento de lactobacilos se analizaron por recuento de colonias en la línea base (T0) y en 3 (T3), 6 (T6), y 12 meses (T12). El sistema de Detección y Evaluación Internacional de caries se utilizó para evaluar el estado de caries.
: Resultados de la En el grupo de intervención, salivales HNP1-3 niveles fueron significativamente mayores que los del grupo de control en T3 y T6 (p & lt
; 0,001), mientras que los recuentos de MS se redujo significativamente (p
& lt; 0,01). En el grupo de intervención, se encontraron correlaciones positivas y negativas entre HNP1-3 niveles y los recuentos de lactobacilos y entre la EM y los recuentos de lactobacilos, respectivamente. Sin embargo, no hubo correlación significativa entre los niveles HNP1-3 mejoradas y la disminución de los números de MS. Las incremento de caries de la superficie de fosas y fisuras, pero no por las superficies lisas, fue significativamente menor en el grupo de intervención en comparación con el grupo control (p = 0,01
).
Conclusiones
Los probióticos pueden mejorar temporalmente salivales HNP1-3 niveles; . Sin embargo, su acción para reducir las nuevas caries de fosas y fisuras implica probablemente interacciones microbianas
de registro prueba gratis TCTR20130904001. (Fecha de registro: September 04, 2013)
Palabras clave
alfa-defensinas La caries dental Streptococcus mutans Probióticos material complementario saliva Electrónico
La versión en línea de este artículo (doi:. 10 1186 /s12903-015-0003-0) contiene material complementario, que está disponible para los usuarios autorizados
Antecedentes
La caries dental. es una de las enfermedades más prevalentes en niños y adultos en todo el mundo [1]. Sin embargo, el éxito de todos los programas de prevención de caries ha sido impedida por su naturaleza multifactorial. La enfermedad es el resultado de la desmineralización, causada por las interacciones de las bacterias cariogénicas, una dieta rica en hidratos de carbono fermentables, y componentes de sistema principal, como las propiedades de los dientes y la saliva [2]. Aunque muchas especies bacterianas pueden desempeñar un papel en el proceso de la caries [3], estreptococos mutans (MS) han sido considerados los principales agentes patógenos asociados al desarrollo de caries tempranas [4]. Las principales propiedades de virulencia de la EM son acidogenicidad, tolerancia a los ácidos, la formación de biopelículas y el diente de adhesión [5]. fuerte asociación entre las cantidades de EM y la patogénesis de la caries dental es demostrado por varios estudios anteriores, revisado en [6].
la administración de probióticos se considera una estrategia potencial para mejorar o mantener la salud bucal. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), los probióticos son "microorganismos vivos que, cuando se administra en cantidades adecuadas, confieren un beneficio de salud en el host" [7]. Se han propuesto varios mecanismos para la acción de probióticos, incluyendo la producción de sustancias antimicrobianas, la competencia con los patógenos mediante la prevención de la adhesión celular y la invasión, y la modulación de las funciones inmunitarias locales y sistémicas [8-11]. En una reciente revisión sistemática [12], varios ensayos clínicos han demostrado la capacidad de la suplementación con probióticos para reducir los recuentos de MS, pero el efecto de disminución es variable y de corta duración. Por otra parte, muy pocos estudios han investigado hasta el momento las cantidades de lactobacilos (LB) y la prevención de la caries nueva ocurrencia por la suplementación probiótica.
Aunque LB, que se utiliza comúnmente como probióticos, se han asociado con la progresión de la caries [13], una estudio reciente ha revelado que sólo una cierta especie, es decir
, Lactobacillus salivarius
, está más relacionada con el desarrollo de caries por su capacidad de producir altos niveles de ácidos [14]. En contraste con estas bacterias cariogénicas, Lactobacillus paracasei
aislados de pacientes libres de caries posee una capacidad para suprimir el crecimiento de MS [15,16]. En este estudio, Lactobacillus paracasei
SD1 se introdujo como una cepa probiótica y se utiliza en la cavidad oral debido a sus varias propiedades demostradas anteriormente, incluyendo la inhibición del crecimiento de MS, la producción menos ácido que el otro LB, y buena adherencia al epitelio bucal células [17].
péptidos de neutrófilos humanos 1-3 (HNP1-3) son pequeños péptidos antimicrobianos catiónicos que proporcionan la primera línea de defensa del huésped frente a un amplio espectro de microorganismos [18]. HNP1-3 se expresan en las células epiteliales ductales de glándulas salivales submandibulares y secretada en la saliva [19]. También son producidos por los neutrófilos y se liberan en el fluido crevicular gingival [20]. El papel preventivo de HNP1-3 contra la caries dental ha sido sugerido por los niveles salivales HNP1-3 significativamente más altos en los niños libres de caries que en aquellos que sufren de caries demostradas por Tao et al. [19]. Dado que uno de los mecanismos probióticos se ha propuesto estar involucrado con el anfitrión de la regulación inmune, que, por lo tanto, la hipótesis de que la suplementación con probióticos podría ayudar a prevenir la caries dental por el aumento de la inmunidad del huésped local a través de una mayor producción de HNP1-3 salival. Los objetivos de este estudio fueron examinar los efectos de la intervención de probióticos en los niveles salivales HNP1-3, recuentos de MS, y el recuento de LB, y para determinar las correlaciones entre estos parámetros host y microbianas. Por otra parte, las nuevas apariciones de lesiones de caries de los segundos molares permanentes durante un ensayo clínico de 12 meses se evaluaron y compararon entre los grupos control y de intervención.
Métodos
Información general sobre el diseño del estudio
Este ensayo fue diseñado como una aleatorizado, doble ciego y el método con dos grupos paralelos controlado con placebo. El protocolo de estudio fue aprobado por los Comités Humanos Experimentación de las facultades de Odontología, Universidad de Chiang Mai y Universidad Príncipe de Songkla, Tailandia. El consentimiento informado se obtuvo de los padres o tutores de cada participante antes del comienzo de este estudio. Sesenta participantes elegibles y saludables de cada 246 niños fueron asignados por igual a cualquiera de los dos grupos, el control y los grupos de probióticos, usando un procedimiento de aleatorización sencilla mediante sorteo (Figura 1). Los criterios de inclusión y exclusión se identifican en los participantes y en la Figura 1. Para el método de doble ciego, el código se mantuvo por un observador independiente. Este código no se dio a conocer hasta que se hayan analizado todos los datos. Ninguno de los investigadores, los médicos, los participantes, los profesores, o el estadístico sabía si los niños recibieron leche de control o intervención a lo largo de todo el curso de este estudio. El ensayo se ha registrado en el http: //www. ClinicalTrials en th /, una de las primarias de la OMS Registro de Redes, Ensayos Clínicos identificador TCTR20130904001... El período experimental entera duró 12 meses, y la medición de los resultados de este estudio consistió en cuatro parámetros: HNP1-3 salivales, los niveles de MS y LB a cuatro puntos de tiempo diferentes: T0 (línea de base), T3 (tres meses de la intervención), T6 (seis meses de intervención) y T12 (seis meses después del cese de la intervención), y la presencia de lesiones de caries o desmineralizada a T0 y T12 (Figura 1). El cálculo del tamaño de la muestra
priori se llevó a cabo con un enfoque en las diferencias de medias de conteo de SM entre dos grupos independientes que utilizan el software G Potencia [21], con el tamaño del efecto igual a 0,8 en el nivel de significancia de 5% y 90% de energía de prueba . El cálculo produjo no menos de 28 participantes en cada grupo. Figura 1 Un diagrama de flujo que muestra el consorte número de participantes en el control y los grupos de probióticos en el inicio y la finalización de la prueba. Fuera de 246 niños incluidos en este ensayo, 60 participantes siguieron siendo elegibles debido a los criterios de inclusión y exclusión. Sesenta participantes fueron asignados por igual a o bien el control o el grupo probiótico por simple aleatorización se describe en los métodos. Los participantes recibieron leche en polvo con o sin probióticos durante la primera intervención de seis meses, y se recogieron muestras de saliva para análisis de niveles HNP1-3, MS y LB recuentos en cuatro momentos diferentes: T0, T3, T6 y T12. El examen oral para la evaluación de las puntuaciones ICDAS se llevó a cabo en T0 y T12.
Preparación de leche en polvo enriquecido con probióticos México La cepa probiótica, Lactobacillus paracasei
SD1, se aisló de voluntarios libres de caries y se ha demostrado previamente para ejercer el efecto inhibidor máximo en Streptococcus mutans in vitro
[17]. La cepa bacteriana se identificó por PCR-RFLP de los 16S ribosomal RNA genes y electroforesis en gel de dodecil-poliacrilamida de sodio [22]. La intervención probiótico fue fabricado en una forma de leche en polvo por la técnica de secado por pulverización. Las condiciones de cultivo y la técnica de secado por pulverización se realizaron como se describe anteriormente [23]. Brevemente, un cultivo de Lactobacillus paracasei
SD1 se inoculó en una mezcla de 1% de los probióticos y una cantidad de 3 litros de tratamiento térmico (50 ° C durante 30 min) y 20% de leche desnatada reconstituida, y luego se secó por pulverización con un secador por pulverización (modelo B191 Buchi Mini Spray secador; Flawil, Suiza). El producto final era un polvo blanco amarillento con contenidos de humedad de 3,44 ± 0,85% y los recuentos de viables de 7,5 ± 0.20x10
8 ufc /g, que se almacenó a 4 ° C. La viabilidad de Lactobacillus paracasei
SD1 en el polvo de leche inoculada se evaluó previamente en un estudio de seis meses mediante el examen de su crecimiento por triplicado hombre Rogosa y Sharpe (MRS) verter en las placas bajo incubación anaerobia durante tres días a 37 ° C [23 ]. Se demostró que la tasa de supervivencia máxima de Lactobacillus paracasei
SD1 en la leche desnatada en polvo fue del 99% si la leche en polvo se almacenó a 4 ° C durante seis meses [23]. Sin embargo, la tasa de supervivencia se redujo drásticamente si la leche en polvo se almacenó a 25 ° C [23]. La leche en polvo en la apariencia general de los dos grupos de probióticos y de control era idéntica, excepto por la ausencia de la cepa probiótica en el grupo de control, y se empaquetó en las mismas bolsas de plástico transparente marcados con un nombre de cada participante. Los pasos de embalaje y la entrega fueron realizados por un asistente de investigación que desconocía de cada paso de la recogida y análisis
Participantes
Los criterios de inclusión fueron:. (I) una buena salud bucal con caries en los dientes dos o menos (ii) presencia de cuatro segundos molares en la boca (iii) la ausencia de lesiones cariosas profundas activos no tratados (iv) ausencia de la periodontitis (v) para no fumadores y (vi) el cepillado dental diario hábito usando pasta de dientes con fluoruro. Los criterios de exclusión fueron los adolescentes con enfermedades sistémicas, recibiendo antibióticos sistémicos dentro de las seis semanas, el consumo rutinario de probióticos o xilitol, la alergia a la leche de vaca, intolerancia a la lactosa y alergia alimentaria severa. Antes del comienzo del ensayo clínico, se informó a todos los participantes no consumir cualquier producto que contiene probióticos, como el yogur, yogur para beber, queso, etc., a lo largo de toda la duración de esta prueba. Los participantes de ambos grupos fueron instruidos para mezclar 5 g de leche en polvo en 50 ml de agua y beber una vez al día, excepto en los días de la toma de saliva, durante seis meses bajo la supervisión de instructores. En las vacaciones o los fines de semana, todos los niños se les informó a beber su leche en el país y para devolver las bolsas de plástico vacías. El cumplimiento se verifica por sus profesores que llenaron en un diario todos los días con la información sobre la asistencia escolar de los niños y de si los niños habían estado bebiendo la leche. Era evidente que no hay niños que participaron en este estudio estaban ausentes de sus clases debido a la baja por enfermedad durante la primera intervención de seis meses. Se pidió a todos los participantes a informar de inmediato cualquier efecto secundario.
Los análisis de los niveles salivales HNP1-3
Se recogió una cantidad de 2 ml de saliva total no estimulada y se dividió en dos alícuotas, una para el análisis de los niveles de HNP1-3 igualmente y la otra para análisis de los niveles microbiológicos. La primera alícuota se añadió con Nonidet P-40 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) a la concentración final de 0,1% (v /v), se centrifugaron a 15.000 rpm a 4 ° C durante 10 min [19], y se recogió el sobrenadante clarificado y se almacenó congelado para su posterior análisis de los niveles de HNP1-3 por un kit ELISA HNP1-3 (HyCult Biotechnology, Uden, Países Bajos) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En breve, las muestras diluidas de saliva (1: 200) se aplicaron a una placa de pre-recubierto por triplicado con el anticuerpo primario específico para HNP1-3, y se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente. Para un control negativo, se añadió tampón de dilución sin la adición de las muestras de saliva a la placa de pre-revestido. Después de lavar cuatro veces con tampón de lavado, cada pocillo se incubó con el anticuerpo trazador biotinilado durante 1 h a temperatura ambiente. Después, se añadió el conjugado de estreptavidina-peroxidasa y se incubó durante 1 h. Después de eso, 3,3 ', 5,5'-tetrametilbencidina, un sustrato cromogénico, se añadió durante 20 min, y después la reacción se detuvo mediante la adición de ácido oxálico al 2%. Las concentraciones de HNP1-3 en muestras de saliva se calcularon a partir de una curva patrón establecida por varias concentraciones conocidas de un estándar HNP1-3, utilizados como el control del sistema de ELISA. Las concentraciones salivales de HNP1-3 se normalizaron luego por su contenido total de proteínas usando un ensayo de proteína BCA (Pierce Inc., Rockford, IL) según las instrucciones del fabricante.
Ensayos microbiológicos
las cantidades de saliva MS y LB se evaluaron mediante un método de recuento de colonias típico en T0, T3, T6 y T12. La segunda parte alícuota de las muestras de saliva era diez veces diluida de 1:10 a 1: 10.000. Cada dilución (10 l) se dejó caer sobre las placas de agar selectivas, agar Mitis Salivarius bacitracina (MSB) para MS (Difco Laboratories, Detroit, MI) y agar MRS para LB (Difco Laboratories). Las condiciones de incubación fueron anaeróbica, 10% H 2, 10% de CO 2 y 80% N 2 a 37 ° C durante 48 h. El recuento de colonias se realizó bajo un microscopio por duplicado.
Detección de caries Internacional y Sistema de Evaluación (ICDAS)
Al principio y al final de este estudio (T0 y T12), todos los participantes fueron examinados para la salud oral y dental caries estado por dos dentistas con experiencia (SP) y ST con kappa de Cohen valores de 0,85 y 0,82 para las calibraciones intra e inter-examinador, respectivamente. El examen se llevó a cabo mediante el uso de un espejo de boca y una jeringa de aire bajo una lámpara de tratamiento. Los datos de caries para cada superficie del diente, incluyendo oclusal (fosas y fisuras) y la superficie lisa (bucal, lingual, mesial y distal) de la caries, se registran de acuerdo con los criterios del Sistema de Evaluación (ICDAS) [24] La detección Internacional caries y. Los códigos ICDAS consisten en: 0 = sonido, 1 = primer cambio visual en el esmalte, 2 = cambio visual distinta en el esmalte, 3 = descomposición del esmalte localizada, 4 = subyacente sombra dentina, 5 = cavidad distinta con dentina visible, y 6 = extensa cavidad dentro de la dentina visible. evaluación del riesgo de caries en este estudio se determinó mediante los criterios modificados anteriormente descritos por Nase y compañeros de trabajo [25], que incluyen tanto clínica estado de la caries y cantidades MS como sigue. Los participantes de "alto riesgo" se definen por tener tanto una puntuación ICDAS & gt; 0 y los niveles de MS ≥10 5 ufc /ml, mientras que los de "riesgo moderado" tenían o bien una ICDAS score & gt; 0 o MS niveles ≥10 5 ufc /ml y los de "bajo riesgo" tenían una puntuación ICDAS = 0 y MS niveles & lt; 10 5 ufc /ml análisis estadístico
Francia El Mann-Whitney U
. se utilizó la prueba para analizar las diferencias entre los grupos en los niveles de HNP1-3 salivales. Las diferencias en los niveles salivales HNP1-3 entre cuatro periodos diferentes en cada grupo se analizaron por la prueba de Kruskal-Wallis, seguido por la prueba de Mann-Whitney U
prueba. El número de recuentos de colonias para la EM y que para LB se presenta como log ufc /ml y se analizó por la muestra independiente t-test
. Las correlaciones entre cada par de los datos de los niveles de HNP1-3, recuentos de MS y LB en cada grupo se pusieron a prueba mediante la prueba de correlación de Pearson. El análisis de regresión se realizó para los datos de correlación significativos. Un odds ratio (OR) para el incremento de caries se calcula Tabla de contingencia. El paquete de software utilizado fue el paquete estadístico para Ciencias Sociales (SPSS versión 17.0 Inc., Chicago, IL), y se consideraron las diferencias significativas cuando p
-valores fueron inferiores a 0,05. . Todos estos métodos estadísticos fueron realizados por un experto en bioestadística (TS): Resultados de la
datos demográficos
Un total de 60 participantes (Rangos de edad 13-15 años; n = 26
para los hombres y 34 para de mujeres) completaron este ensayo clínico de 12 meses (Figura 1). No se reportaron efectos secundarios adversos de los probióticos o la ingesta de leche en polvo en esta cohorte. El cumplimiento para el consumo diario de leche en polvo en ambos grupos se controló cuidadosamente bajo la supervisión de maestros y bien controlada durante todo el primer período de intervención de seis meses. La evaluación de riesgo de caries reveló que el porcentaje de participantes clasificados en el "alto riesgo", el "riesgo moderado" y los grupos de "bajo riesgo" fueron de 50, 31,7 y 18,3, respectivamente. Aunque el procedimiento aleatorio se realizó para asignar todos los 60 participantes elegibles para el control o grupo de probióticos, que coincidió que los porcentajes de riesgo alto, moderado y bajo la caries en el control frente al grupo probiótico eran casi iguales de la siguiente manera: 50,0 frente a 50,0, 33,3 frente a 30,0, y 16,7 frente a 20,0, respectivamente.
en relieve salival HNP1-3 niveles en el grupo probiótico México la mediana de los niveles salivales HNP1-3, expresada en la unidad de g /mg de proteínas totales, en el probiótico grupo fueron significativamente mayores que los del grupo de control en T3 (1,0250 frente a 0,5145 g /mg; p
& lt; 0,001) y T6 (1,1470 frente a 0,5415 g /mg; p
& lt; 0,001), pero no a T0 o T12 (Figura 2). Con respecto a la cinética de los niveles HNP1-3 salivales en el grupo probiótico durante el período de 12 meses de este estudio clínico, se demostró que los niveles HNP1-3 fueron elevados temporalmente durante el período de intervención de seis meses (Figura 2). En otras palabras, estos niveles se incrementaron significativamente en T3 y T6 (p
& lt; 0,001) y disminuyó gradualmente a T12. Sin embargo, no hubo cambios significativos en los niveles de HNP1-3 salivales en el grupo de control en cuatro puntos de tiempo (T0, T3, T6 y T12) se observaron (Figura 2). Figura 2 Aumento significativo pero transitorio en la saliva de péptidos de neutrófilos humanos (PNH) 1-3 niveles de suplementación probiótica. El eje x y
del gráfico de diagrama de caja demuestra niveles salivales HNP1-3 normalizados por concentración de proteína total en la unidad de g /mg para el control (cuadros vacíos) y las cajas (gris) probióticas grupos de cuatro diferentes períodos de la saliva colección: T0, T3, T6 y T12. * = P Hotel & lt; 0,05; *** = P Hotel & lt; 0.001. Las líneas continuas muestran las diferencias significativas entre los dos grupos, mientras que las líneas de puntos representan las diferencias significativas dentro del grupo probiótico.
Disminución del conteo de SM en comparación con el aumento de los recuentos de LB por la intervención de probióticos
las cuentas medias y los errores estándar para salivar MS y LB (log ufc /ml) en T0, T3, T6 y T12 en el control y grupos de probióticos se demuestran en un gráfico lineal (Figura 3). Al inicio del estudio (T0), se demostró que la media salival recuento de LB en el grupo probiótico (una línea continua) no fue significativamente diferente de la del grupo control (una línea de puntos), mientras que la media MS salival cuenta en el grupo probiótico fue significativamente mayor que en el grupo control (p
& lt; 0,05; Figura 3). Sin embargo, en el instante T3 y T6, una reducción significativa en MS cuenta en el grupo probiótico era claramente evidente cuando se comparan con los del grupo de control (p = T3
& lt; 0,001 y T6 = p
& lt; 0,01), mientras que un aumento significativo en los recuentos de LB en cambio se observó (p
& lt; 0,05; Figura 3). En contraste con el grupo probiótico, no hay cambios significativos en los recuentos medios para salival MS y LB se encontraron en el grupo de control (líneas de trazos en la Figura 3). En T12, el recuento de la media para salival MS en el grupo probiótico se aumentó y volvió casi a la línea base, mientras que el recuento de la media para salival LB en el grupo probiótico todavía era significativamente más alta que en el grupo control (p
& lt; 0,01; Figura 3), lo que sugiere la capacidad de LB para ser retenido en la cavidad oral a pesar de la cesación de la intervención probiótico durante seis meses. Figura 3 significativa pero transitoria reducción en mutans salivales estreptococos (MS) cuenta por la intervención del probiótico. El gráfico ilustra lineal significa cargos de MS (círculos abiertos) y log los de lactobacilos (LB; círculos negros) en la unidad de ufc /ml (y
eje y) en tanto probiótico (líneas continuas) y el control (líneas de puntos ) grupos de cuatro diferentes períodos de recogida de saliva (x
eje y): T0, T3, T6 y T12. * = P Hotel & lt; 0,05; ** = P Hotel & lt; 0,01; *** = P Hotel & lt; 0.001. Las barras de error representan el error estándar (SE). Los valores de la media logarítmica recuentos de MS y LB y (SE) se muestran en las cajas sólidas para el grupo probiótico y en las cajas de puntos para el grupo de control en cada período de recogida de saliva.
Reducción significativa en el incremento de caries para el fosa y fisura superficial en el grupo probiótico
los porcentajes de sonido (ICDAS puntuación = 0) y superficies en mal estado (puntuaciones ICDAS = 1-6) a partir de las cinco superficies de los dientes, incluyendo fosas y fisuras, mesial, distal, bucal, y lingual, en T0 y T12 en grupos tanto de control como de probióticos se ilustran en forma de barras apiladas a un total de 100% (Figura 4A). Era evidente que los porcentajes de lesiones de caries en los segundos molares permanentes en ambos grupos de control y probióticos se incrementaron en casi todas las superficies de los dientes durante este estudio de 12 meses y que la caries de fosas y fisuras en ambos grupos fue más prevalente en nuestra cohorte de lo que era caries en los otros cuatro superficies lisas, incluyendo mesial, distal, bucal y lingual (Figura 4A). Las sumas de los porcentajes de incremento de caries para los cinco superficies de los dientes, incluyendo el pozo y la superficie de la fisura y cuatro superficies lisas, y durante cuatro superficies lisas en el grupo probiótico en comparación con el grupo control fueron 25,5 frente a 44,2 y 15,2 frente a 21,4, respectivamente (Figura 4B ). Los porcentajes de incremento de caries sólo en la superficie de fosas y fisuras fueron 10,3 frente a 22,8 (Figura 4B). Curiosamente, el porcentaje de caries nueva ocurrencia para las cinco superficies de los dientes (OR = 1,605; IC del 95%: 1,007-2,557; p = 0,045
) y para la superficie de fosas y fisuras (OR = 2,582; IC del 95%: 1,235-5,400 ; p = 0,01
) fue significativamente menor en el grupo probiótico que en el grupo de control, mientras que no hubo diferencia significativa en la nueva caries ocurrencia entre dos grupos para las cuatro superficies lisas (OR = 1.506; IC del 95% 0.726- 3,126; p = 0,269
). Figura 4 disminución significativa en el porcentaje de incremento de caries de la superficie de fosas y fisuras, pero no por las superficies lisas, por la intervención del probiótico. (A) Los 100% barras apiladas muestran los porcentajes de sonido (área blanca; ICDAS Puntuación = 0) y poco sólidas (áreas rellenas; puntajes ICDAS = 1-6) Las superficies de las cinco superficies de los dientes, incluyendo fosas y fisuras, mesial, distal , bucal y lingual, en el control (panel superior) y los grupos de probióticos (panel inferior). Nota porcentajes más altos de superficies poco sólidas en la superficie de fosas y fisuras que los de las otras cuatro superficies. (B) El gráfico de barras muestra una reducción significativa en el porcentaje de incremento de caries en el grupo probiótico para una combinación de todas las cinco superficies de los dientes y para la superficie de fosas y fisuras solo, pero no para las cuatro superficies lisas combinadas, incluyendo mesial, distal, bucal y lingual superficies. * = P Hotel & lt; 0,05; ** = P = 0,01
.
La falta de correlación entre el aumento de los niveles de HNP1-3 y números de MS
correlaciones disminuyeron entre cada par de niveles salivales HNP1-3 en mcg /mg de proteína total, MS recuentos de reproducciones y LB en log ufc /ml en ambos grupos de probióticos control y se determinaron mediante la prueba de correlación de Pearson (véase la disposición 1 para los datos de cada parámetro), y se reveló que las correlaciones significativas entre estos parámetros sólo se encontraron en el grupo probiótico, pero no en el grupo control (Figura 5). En particular, los niveles salivales HNP1-3 se correlacionaron positivamente con los recuentos de LB (r = 0,376
; p & lt
; 0,001; Figura 5B) con la ecuación del análisis de regresión: y = 0.653x
+ 5.929, donde y
es el recuento de registro y LB x
es el nivel HNP1-3, mientras que los recuentos de LB se asociaron inversamente con recuentos de MS (r = -0.282
; p = 0,002
; Figura 5F). Sin embargo, hay una correlación significativa entre los niveles salivales HNP1-3 y el conteo de SM en el grupo probiótico (Figura 5D), lo que sugiere que el aumento de los niveles salivales HNP1-3 por la intervención de probióticos no están asociados con la disminución de las cantidades de EM. Figura 5 correlaciones positivas y negativas entre péptido salival humana de neutrófilos (HNP) 1-3 niveles y los recuentos de lactobacilos log (LB) y entre los recuentos de registro de estreptococos mutans (MS) y los de LB, respectivamente, en el grupo probiótico. Los coeficientes de correlación (r)
y los niveles de significación (p-valores
) entre cada par de tres parámetros, incluyendo HNP1-3 niveles en mg /mg, LB que cuenta en log ufc /ml y el conteo de SM en el registro se determinaron las cfu /ml y se ilustran tanto para el control (a, C y e) y probiótico (B, D y F) grupos. El análisis de regresión podría determinarse sólo por la correlación significativa entre el aumento de los niveles de HNP1-3 y aumentó LB cuenta en B, y una línea de regresión se ha elaborado con la ecuación: y = 0.653x
+ 5.929; p = 0,003
Discusión
Las principales conclusiones de este estudio incluyen (a) un aumento significativo transitoria de los niveles salivales HNP1-3 en T3 y T6 en el grupo probiótico.; (B) un aumento significativo en los recuentos de LB a diferencia de una disminución transitoria de la MS cuenta durante la intervención probiótico; (C) correlaciones positivas y negativas que se encuentran entre los niveles HNP1-3 y los recuentos de LB y entre los recuentos de LB y MS que cuenta, respectivamente, en el grupo probiótico; y (d) una reducción significativa en el incremento de caries de la superficie de fosas y fisuras, no para las superficies lisas. Entre estas cuatro conclusiones principales, el aumento significativo de los niveles salivales HNP1-3 por la suplementación con probióticos durante el período de intervención de seis meses es de gran interés ya que es probable que el Lactobacillus paracasei
SD1 puede ejercer un efecto inmunoestimulante por una mayor producción de innata efectores inmunes, especialmente HNP1-3, a partir de células epiteliales ductales salivales submandibulares de glándulas [19], que luego son secretadas en la saliva. El posible efecto inmunoestimulante de Lactobacillus paracasei
SD1 órdenes de más investigaciones. Además, la activación inmune innata por Lactobacillus paracasei
SD1 se corrobora con la correlación significativa entre los niveles salivales HNP1-3 elevadas y un aumento de los recuentos de LB visto en la Figura 5B. La activación de la inmunidad del huésped, en particular el aumento de la producción de inmunoglobulina A secretora (sIgA), se ha demostrado previamente para ser uno de los principales mecanismos de los probióticos en el tracto gastrointestinal [26-28] y en la cavidad oral [29-31]. En este estudio, la razón para investigar sólo el salivales HNP1-3 niveles durante la intervención probiótico se basó en la observación de un único estudio anterior demostró que los niveles significativamente más altos HNP1-3 en las muestras de saliva de los niños libres de caries que los de caries niños susceptibles [19]. Sin embargo, es necesario determinar aún más los niveles salivales de otras moléculas efectoras relacionadas con la inmunidad, especialmente otros péptidos antimicrobianos además de HNP1-3, en un estudio futuro. Se observa que los niveles de HNP1-3 salival detectados en nuestra cohorte fueron comparables a los medidos por el mismo método ELISA realizado por Tao y compañeros de trabajo [19]. Curiosamente, los niveles HNP1-3 fueron elevados temporalmente durante el período de intervención de seis meses y se redujo gradualmente a los niveles basales después de la interrupción de la ingesta de probióticos. La inducción temporal de los niveles HNP1-3 estuvo en línea con la inducción transitoria de los niveles de IgAs en la saliva por la ingesta de probióticos [30], lo que indica que el consumo diario de probióticos parece ser necesario para un aumento sostenible en las respuestas inmunitarias del huésped. Sin embargo
, los niveles elevados salival HNP1-3 no se correlacionaron significativamente con los recuentos de MS disminuido, pero los recuentos de LB fueron lugar correlacionados inversamente con la MS que cuenta, lo que sugiere que el mecanismo de acción probiótica en la cavidad oral puede implicar probablemente la competencia y /o la interacción entre dos microorganismos diferentes, como se muestra anteriormente por Teanpaisan y Piwat [22] en lugar de una mayor producción de HNP1-3.
