recolonización
Abstract
Antecedentes
Es bien sabido que el uso de productos de limpieza para dentaduras postizas puede reducir Candida albicans la acumulación de biofilm
; sin embargo, la eficacia de los limpiadores de dentaduras postizas de ácido cítrico es incierto. Además, la eficacia a largo plazo de este limpiador de dentadura postiza no está bien establecida, y su efecto en biofilms residuales es desconocida. Este estudio in vitro
en evalúa la eficacia del tratamiento de la dentadura limpiador ácido cítrico en C. albicans
recolonización de biopelículas en poli (metacrilato de metilo) (PMMA) de superficie.
Métodos
C. albicans biopelículas
se desarrollaron durante 72 h en probetas de resina PMMA (n = 168), que fueron asignados aleatoriamente a 1 de 3 tratamientos de limpieza (CTS) durante la noche (8 h). CTs incluye agua purificada como control (CTC) y dos grupos experimentales que utilizan ya sea una dilución 1: 5 de limpiador de dentadura postiza ácido cítrico (CT5) o una dilución 1: 8 de limpiador de dentadura postiza ácido cítrico (CT8). biopelículas residuales que se adhieren a las muestras se recogieron y cuantificaron en dos momentos: inmediatamente después de CTS (TIC) y después de la limpieza y recolonización de biopelículas residual (RT). biofilms residuales se analizaron mediante la cuantificación de las células viables (ufc /ml), y la arquitectura biofilm se evaluó por microscopía confocal de barrido láser (CLSM) y microscopía electrónica de barrido (SEM). tratamientos limpiador de dentadura postiza y períodos de evaluación se consideraron factores de estudio. Los datos fueron analizados mediante ANOVA de dos vías y la diferencia honestamente significativa de Tukey (HSD) (α = 0,05).
: Resultados de la Inmediatamente después de los tratamientos, soluciones limpiadoras de dentaduras postizas ácido cítrico (CT5 y CT8) redujeron el número de células viables en comparación con el control (p & lt; 0,01). Sin embargo, después de 48 h, ambos grupos CT (CT5 y CT8) mostraron recolonización biofilm (p & lt; 0,01). recolonización biofilm residual también se detectó por CLSM y análisis SEM, que reveló una mayor biomasa y espesor medio biofilm para el grupo CT8 (p & lt; 0,01).
Conclusión
cítrico limpiadores de dentaduras postizas ácido pueden reducir C. albicans
acumulación de biopelícula y la viabilidad celular. Sin embargo, esto no impidió que la TC recolonización biopelícula
Palabras clave albicans biofilm
dentadura higiene de la dentadura de Limpieza Candida
poli (metacrilato de metilo) material complementario Electrónico
La versión en línea de este artículo (doi:. 10. 1186 /1472-6831-14-77) contiene material complementario, que está disponible para los usuarios autorizados.
Antecedentes
Candida spp
. es uno de los principales organismos causantes de la estomatitis inducida por la dentadura, que es principalmente debido a su capacidad de adherirse y formar biopelículas sobre tejidos de la cavidad bucal y las superficies de prótesis, así como debido a su resistencia a los agentes antifúngicos [1-4]. Esta biopelícula crece en gran medida en material de la dentadura de resina acrílica y su eliminación efectiva es un reto importante tanto por métodos químicos y mecánicos [2-5]. ¿Cuántas prótesis de limpieza químicos que contienen enzimas, hipoclorito de sodio, peróxido alcalino y soluciones ácidas son disponible para su uso con el cepillado mecánico para eliminar el biofilm residual unido a las superficies de prótesis [5-8]. Las soluciones de limpieza tienen propiedades antimicrobianas, como se demuestra por muchos estudios [7-12]; sin embargo, ninguno de estos métodos parecen eliminar eficazmente el biofilm y prevenir la recolonización en la superficie de la dentadura [6, 7].
Otro tipo de limpiador de dentadura postiza contiene ácido cítrico y está disponible como una solución concentrada, que se puede utilizar a diario ( dilución 5) o semanal (1:: 1 dilución 8) después de la dilución adecuada (como se indica por el fabricante). Este limpiador actúa como un agente quimioterapéutico que puede interrumpir eficazmente biofilms través de un mecanismo secuestrante con iones de calcio [13]. Este mecanismo permite que el ácido cítrico para romper puentes de calcio y, posteriormente, interrumpe la matriz de la biopelícula, que puede conducir a la actividad anti-biofilm [14, 15] se evaluaron.
Soluciones de ácido cítrico por su capacidad para descontaminar superficies de los implantes [16], lo que demuestra una reducción en el número de especies patógenas. Aunque las soluciones de ácido cítrico, también son eficaces contra Streptococcus mutans
biopelículas y biopelículas derivados de múltiples especies que se desarrollan en las superficies de titanio [16], todavía no se ha reportado el efecto de productos de limpieza de ácido cítrico contra Candida
biopelículas en las superficies de la dentadura.
Aunque el uso continuo de productos de limpieza de ácido cítrico por 3 meses mostró efectos adversos con mayor liberación de iones de aleaciones de Co-Cr [17, 18], sin efectos nocivos se han demostrado con materiales de prótesis en general [19]. Por el contrario, otros productos de limpieza para dentaduras postizas, principalmente los que contienen hipoclorito de sodio, podrían aumentar la rugosidad superficial, disminuir la dureza, y, finalmente, cambiar el color de resinas acrílicas y revestimientos de dentaduras postizas [19-21]. Por lo tanto, limpiadores de ácido cítrico podría ser adecuado para las prótesis dentales removibles y aparatos de ortodoncia y para la eliminación de biofilms y prevenir su recolonización.
Por lo tanto, teniendo en cuenta la escasez de estudios que examinan la eficacia de los limpiadores de ácido cítrico para la eliminación de biofilms a partir de materiales de prótesis, el presente estudio evaluado la eficacia de los limpiadores de ácido cítrico sobre Candida albicans
recolonización de biopelículas en poli (metacrilato de metilo) (PMMA).
Métodos diseño experimental
Este estudio in vitro
en utilizó un diseño aleatorio, ciego . C. albicans
biopelículas se desarrollaron durante 72 h en probetas de resina PMMA (n = 168) y luego asignados aleatoriamente a 1 de 3 tratamientos de limpieza (CTS): agua purificada, utilizados como control (CTC); 1: 5 dilución de prótesis ácido cítrico limpiador (CT5); o dilución 1: 8 de limpiador de dentaduras ácido cítrico (CT8). biofilms residuales que se adhieren a los especímenes se recogieron y cuantificaron en dos puntos de tiempo diferentes: inmediatamente después de la limpieza tratamientos (grupo ICT) o 48 h después de la limpieza, cuando residual biofilm recolonización (grupo RT) que ocurriría. biofilms residuales se analizaron mediante la determinación del número de células viables (UFC /ml). arquitectura Biofilm se evaluó por microscopía confocal de barrido láser (CLSM) y microscopía electrónica de barrido (SEM). Los factores de estudio fueron los tratamientos limpiador de dentadura postiza y períodos de evaluación (TIC o RT). Las variables de respuesta fueron el número de células viables y la arquitectura de C. albicans
biofilms residuales. Un esquema del diseño experimental se ilustra en el archivo 1. especímenes
resina adicionales
especímenes en forma de disco (10 mm de diámetro, espesor de 2 mm y 219,8 mm
2) área de PMMA polimerizado por microondas ( Onda Cryl; Artigos Odontológicos Clássico Ltd, Sao Paulo, Brasil) fueron fabricados de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de la polimerización, los discos se sumergieron en agua purificada a 37 ° C durante 48 h para la liberación de monómero residual [22]. Las muestras de PMMA se muelen con un pulidor horizontal (modelo APL-4; Arotec, Sao Paulo, Brasil) y el uso de papeles de óxido de aluminio cada vez más finos (320-, 400-, y de grano 600) para estandarizar la rugosidad superficial en 0,34 ± 0,02 m. Antes de desarrollar el biofilm, los discos se limpiaron ultrasónicamente (Thornton T 740; Thornton-Inpec Eletrônica Ltda, Vinhedo, Brasil) con alcohol al 70% y se esterilizan agua ultra purificada (20 min) para eliminar los contaminantes y los artefactos de la superficie [23] . La ausencia de contaminación se confirmó mediante la inmersión de una muestra de las muestras en los medios de cultivo estéril
Los especímenes fueron asignados aleatoriamente a 1 de los 3 grupos de tratamiento, que se dividen a su vez dentro de los puntos de tiempo evaluados:. Inmediatamente después de los tratamientos (TIC) y 48 h después de la limpieza y recolonización biofilm residual (RT). Se determinó el número de muestras en cada grupo (n = 12) con las pruebas preliminares, que confirmó el tamaño de la muestra arrojó una potencia adecuada (80%) para detectar diferencias estadísticamente significativas.
formación de película salival en muestras
Antes de desarrollar los ensayos de la biopelícula, las muestras de PMMA limpias se recubrieron con saliva para imitar el entorno de la cavidad oral. toda la saliva humana fue donado por un voluntario sano, que dieron su consentimiento informado por escrito. El Comité de Investigación y Ética de la Facultad de Odontología de Piracicaba, Universidad Estatal de Campinas, aprobó este estudio. La muestra de saliva se recogió a la misma hora del día, para cada experimento, y el volumen de recogida se limita a 50 ml por periodo de recogida
toda la saliva humana se recogió por estimulación masticatoria con la película flexible (Parafilm M;. American Can Co , Neenah, WI). La saliva se clarificó por centrifugación a 3800 g
durante 10 min a 4 ° C. El sobrenadante se recogió y se esteriliza por filtración (22 micras) para su uso inmediato. Para cada disco, una película salival se formó en la superficie después de la incubación durante 30 min, a 37 ° C y 75 rpm, en un agitador orbital.
Condiciones de inóculo y de crecimiento
Un asa de siembra de cultivo de levadura de C. albicans gratis (ATCC 90028) fue reactivado y se incubó durante 24 horas a 37 ° C. Después, se recogieron las células, se suspendieron en base nitrogenada de levadura (YNB) caldo (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), suplementado con glucosa 100 mM. La densidad celular fue espectrofotométricamente (Spectronic 20; Bausch & amp; Lomb, Rochester, NY) estandarizada a una densidad óptica de 0,25 a 520 ηm, que correspondía a 1 × 10 6 CFU /mL de inóculo [24] ensayo Biofilm
. discos de saliva recubierto
PMMA se colocaron verticalmente en poliestireno placas de cultivo de 24 pocillos. Posteriormente, 2 ml de la suspensión celular estandarizado (1 × 10 6 CFU /ml de C. albicans
en YNB suplementado con glucosa 100 mM) se añadió a cada pocillo. Biofilm se desarrolló a 37 ° C, y bajo 75 rpm en un agitador orbital, durante 72 h, para permitir la maduración de biofilm. El medio se cambió cada 24 h. ensayos de biofilm se realizaron por triplicado en 3 experimentos independientes protocolos de tratamiento.
Después de que el crecimiento de biopelícula durante 72 h, las muestras fueron asignados aleatoriamente a 1 de 3 CTs durante la noche (8 h). limpiador de ácido cítrico (CURADEN BDC 105, CURAPROX, Suiza) se diluyó en agua purificada, de acuerdo con las instrucciones del fabricante, en 1: 5 ó 1: 8 soluciones, que se recomiendan para su uso diario o semanal, respectivamente. Cada muestra se colocó en un vaso de precipitados estéril que contiene 8 ml de la solución de tratamiento.
Después de los tratamientos limpiadores (8 h), las muestras se retiraron y se lavaron dos veces en 2 ml de solución salina tamponada con fosfato esterilizado (PBS) solución (pH 7,4) . Se recogieron las biopelículas residuales que se adhieren a las muestras inmediatamente (TIC) o se dejan crecer en las mismas condiciones durante 48 h (grupo RT) [10].
cuantificación de células viables de biopelícula residual
biopelículas residuales se rompieron y se adhirieron microorganismos fueron retirados de los especímenes mediante tratamiento con ultrasonidos (7 W durante 30 s). soluciones tratadas por ultrasonidos se diluyeron en serie en PBS y se sembraron (20 l) por triplicado en agar Sabouraud Dextrosa. Las placas se incubaron a 37 ° C en condiciones aerobias durante 48 h. CFU se contaron usando un microscopio estereoscópico, y los resultados se expresan en unidades formadoras de colonias por ml (UFC /ml)
análisis de la arquitectura Biofilm:. SEM
especímenes con biofilms unidos se lavaron con PBS estéril y se coloca en 1% tetróxido de osmio durante 1 h. Las muestras se lavaron posteriormente en agua purificada, se deshidrataron en una serie de lavados con etanol (70% de 10 min, 95% para 10 min, y 100% para 20 min) y se secaron al aire en un desecador antes de revestimiento por bombardeo iónico con oro [24, 25]. A continuación, las muestras fueron montadas en los trozos de aluminio y se recubrieron con oro. Las características de la superficie del biofilm se visualizaron con SEM (JSM 5600LV, JEOL, Tokio, Japón) a 1.500 × en un modo de alto vacío a 15 kV análisis de la arquitectura
Biofilm:. CLSM
Las biopelículas formadas en las superficies de PMMA fueron teñidas utilizando el kit Live /Dead BacLight Viabilidad, que comprende SYTO-9 y yoduro de propidio (PI). Antes de los exámenes CLSM, las muestras se protegieron de la luz y se incubaron a 37 ° C durante 20 min [24, 25]. Imágenes de biopelículas teñidas fueron capturados utilizando un sistema CLSM (LEICA - TCS SP5, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania). Se obtuvieron una serie de imágenes a intervalos de 1 micras de la sección de z para una vista tridimensional de la biopelícula. Por lo menos, cinco campos ópticos representativos fueron examinados para cada muestra.
Software COMSTAT se utilizó para analizar imágenes CLSM. Las propiedades de arquitectura de las biopelículas analizados por COMSTAT incluyen el biovolumen (m 3 /m 2), espesor medio (m), y el coeficiente de rugosidad.
El análisis estadístico
Los datos fueron analizados utilizando el software estadístico ( SAS v 9.0;. SAS Institute, Inc, Cary, NC) con un nivel de significación fijado en el 5%. Se evaluaron los supuestos de igualdad de varianzas y distribución normal de los errores para cada variable. Cuando se violó la normalidad, los datos fueron transformados logarítmicamente. Los factores que interfieren en las variables de respuesta (C. albicans
células viables, CFU /ml), bio-volumen (μm3 /μm2), espesor medio se analizaron con ANOVA de dos vías (tipo y evaluación (micras) y el coeficiente de rugosidad) período). comparaciones post-hoc se realizaron mediante la prueba de la diferencia honestamente significativa de Tukey (HSD).
Resultados
Las comparaciones de dos vías ANOVA mostraron que ambos factores de estudio "tratamientos" (CTC, CT5, y CT8) y "períodos de evaluación" (TIC y RT) afectaron la cuantificación de células viables (p & lt; 0,01); pero no se detectaron interacciones estadísticos. Sin embargo, para los parámetros de la arquitectura biofilm (bio-volumen, espesor medio, y la rugosidad), las comparaciones de ANOVA de dos vías mostró una interacción estadísticamente significativa (p & lt; 0,001). Entre los factores en estudio comentario El uso de limpiadores de ácido cítrico no dio lugar a recuentos de células viables inmediatamente después de los tratamientos para ambos grupos experimentales (CT5 y CT8) (p & lt; 0,01), como se muestra en la Tabla 1. Sin embargo, 48 h después de los tratamientos, C. albicans
recuentos de CFU se detectaron en el la cuantificación de células viables, lo que demuestra que las biopelículas residuales podrían recolonizar las muestras de superficie de PMMA. Aunque el ácido cítrico CTs no eran eficaces dentro de las 48 h (p & lt; 0,01), estas soluciones de limpieza mostraron menor número de recuentos de CFU en comparación con el grupo control (p & lt; 0,01) tanto en tiempo de evaluación points.Table 1 C. albicans viable la cuantificación de células (media ± dE) de acuerdo con diferentes tratamientos y período de evaluación
contar las células viables (106 UFC /ml)
tratamiento de limpieza
períodos de evaluación
Inmediatamente después de los tratamientos (TIC) guía empresas mascotas para recolonizar (RT)
CTC - H2O
1,01 ± 8.59Aa
11,1 ± 12.30Ba
CT5 - 1: 5
0AB
1,92 ± 3.64Bb
CT8 - 1 : 8
0AB
3,63 ± 4.12Bb
diferentes letras mayúsculas indican diferencias estadísticamente significativas (p & lt; 0,01) entre los períodos de evaluación [se trata inmediatamente (TIC ) y se dejó para recolonizar (RT)]. letras minúsculas diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p & lt; 0,01). entre tratamientos (CTC, CT5, y CT8) guía Biofilm análisis arquitectura se presentan en la Tabla 2. No se detectaron diferencias estadísticamente significativas para los períodos de evaluación (P & lt; 0,01) y para los tratamientos de limpiador de dentadura postiza (p & lt; 0,05). Inmediatamente después de los tratamientos (TIC), las biopelículas tratados con CT5 fueron más afectadas que los tratados con CT8 y los grupos de control, que muestra una baja bio-volumen y espesor promedio que los de los otros grupos (p & lt; 0,05). Además, el grupo CT8 mostró un coeficiente de rugosidad mayor, lo que indica la biopelícula era menos compactada (p & lt; 0,05). Después del período de recolonización (RT), biofilms trató con solución de limpieza diaria (CT8) mostró un aumento de la bio-volumen y en el espesor de la media en comparación con los de la 1: 5 dilución (CT5) y el control (agua) tratamientos (p & lt ; 0,05) .Aunque no hubo diferencias estadísticamente significativas en la arquitectura de las biopelículas tratados con agua o CT5 (p & gt; 0,05), se detectaron diferencias en las biopelículas visualizadas mediante SEM y CLSM entre los grupos (Figuras 1 y 2). Como indican las cifras, las biopelículas de los grupos de control y de ácido cítrico mostraron diferentes niveles metabólicos después de cada TC para la evaluación tanto periods.Figure 1 presenta imágenes SEM representativas de biopelículas tratados con agua purificada, CT5, y CT8 en la TIC y períodos de evaluación RT. En cuanto al tratamiento de control (agua purificada), no se detectaron cambios sustanciales en la estructura de la biopelícula. Las hifas se observaron inmediatamente después de los tratamientos con ácido cítrico (Figura 1B y C). Se observó una reducción dramática en el número de células para el grupo CT8 inmediatamente después de los tratamientos (Figura 1C). Además, se observó una ligera reducción en el número de células para CT5 en ambos puntos temporales (Figura 1B y E), en comparación con el control. Las biopelículas se identificaron para todos los grupos después del período de recolonización (Figura 1D, E y F) y un mayor número de células se observaron para el grupo CT8 a TA (Figura 1F) .Tabla 2 Bio-volumen (m 3 /m 2), media espesor (micras), y el coeficiente de rugosidad (media ± dE) de C. albicans biopelículas de acuerdo con diferentes tratamientos y período de evaluación
Bio-volumen
espesor medio
coeficiente de rugosidad
Tratamientos
períodos de evaluación
períodos de evaluación
Evaluación periods
ICT
RT
ICT
RT
ICT
RT
CTC
10.77 ± 1.5AA
1,30 ± 1.2Ba
12.25 ± 2.1Aa
1,53 ± 1.4Ba
0,11 ± 1,41 0.1Aa
± 0.4Ba
CT5
12,61 ± 3.1Aa
1,14 ± 0.6Ba
11,97 ± 1,04 3.1Aa
± 0.6Ba
0,21 ± 0.2Aa
1,73 ± 0.1Ba
CT8
3,87 ± 9,71 2.8Ab
± 2.7Bb
4,88 ± 3.7Ab
11.69 ± 3.3Bb
1,17 ± 0.3Ab
0,30 ± 0.2Bb
las diferentes letras mayúsculas indican diferencias estadísticamente significativas (p & lt; 0,01) entre los períodos de evaluación dentro de los tratamientos [se trata inmediatamente (TIC); y se deja recolonizar (RT)]. letras minúsculas diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p & lt; 0,05). entre tratamientos (CTC, CT5, y CT8) dentro de los períodos de evaluación
Figura 1 Representante imágenes de microscopía electrónica de barrido (SEM) (1.500 ×) de C. albicans biopelículas de acuerdo con diferentes tratamientos y períodos de evaluación: a, grupo CTC (TIC); B, grupo CT5 (TIC); C, grupo CT8 (TIC); D, grupo CTC (RT); E, grupo CT5 (RT); F, grupo CT8 (RT). Tenga en cuenta el hifal (flechas) la formación inmediatamente después de ambos tratamientos solución de ácido cítrico en las TIC y la recolonización después de 48 h (RT).
Figura 2 microscopía confocal de barrido láser Representante (CLSM) de C. albicans biopelículas de acuerdo con diferentes tratamientos y evaluación períodos en los tratamientos y períodos evaluados: A, grupo CTC (TIC); B, grupo CT5 (TIC); C, grupo CT8 (TIC); D, grupo CTC (RT); E, grupo CT5 (RT); F, grupo CT8 (RT). Las barras representan 12,5 m. Nota densidad celular más baja en TIC, para ambos grupos CT5 y CT8 (B y C), en comparación con el control (A). Tenga en cuenta la densidad de células menor para el grupo CT5 en comparación con el grupo CT8 en RT. Ligera reducción de la densidad celular en el grupo de control puede ser debido a la biopelícula sobre-maduración.
Discusión En el presente estudio, se evaluó la eficacia de limpiador de dentaduras ácido cítrico para eliminar o matar a la C. albicans
biopelícula formada en la superficie de las muestras de PMMA. Un efecto a largo plazo de otras soluciones limpiadoras de dentaduras postizas se demostró en estudios anteriores [7, 9], que también incluyó la evaluación de la solución (hipoclorito de sodio) estándar de oro. En el presente estudio, sólo se usó agua purificada como control. Teniendo en cuenta que es bien conocido que el hipoclorito de sodio es eficaz contra Candida
biofilms, nuestro estudio dirigido para mostrar las diferencias, si las hubiera, entre limpiador de dentaduras ácido cítrico y la ausencia de tratamiento químico. El presente estudio demostró que el tratamiento con ácido cítrico fue más eficaz que la ausencia de tratamiento; Sin embargo la comparación con una solución estándar de oro aún no se han probado. Francia El limpiador de dentaduras ácido cítrico utilizado en el presente estudio fue una mezcla de agua ultra-purificada y ácido cítrico en no tóxico, soluble en solución química, de baja viscosidad del agua, que puede romper los puentes de calcio de iones que sirven como sitios de unión químicos que unen las cadenas poliméricas EPS [13]. Sobre la base de la literatura, el ácido cítrico es el agente quimioterapéutico con el mayor potencial para la eliminación de biofilms de superficies de titanio contaminados in vitro
, aunque no logró la eliminación completa [14, 16].
En el presente estudio, se observado un fenómeno biofilm recolonización en ambos grupos experimentales cuando las muestras limpiadas se mantuvieron durante 48 h más en un medio de cultivo suplementado con glucosa. Por lo tanto, se encontró que el ácido cítrico interrumpido las biopelículas, pero no eliminó totalmente. Este hallazgo conduce a la suposición de que este limpiador de la dentadura puede ser un método complementario eficaz para la eliminación de biopelículas una vez que se permite que los escombros para ser eliminado más fácilmente de la superficie de la dentadura. Por lo tanto, se espera que el ácido cítrico presenta un efecto más consistente en la eliminación de biofilm cuando se asocia con un método mecánico, tal como cepillado, para eliminar por completo la biopelícula madura de dentaduras [14, 16, 26].
Aunque el número de células viables era nula inmediatamente después de los tratamientos, ya sea con limpiadores ácido cítrico, hay que señalar que el número de células viables identificados por el ensayo de CFU tiene baja sensibilidad cuando un pequeño número de células son viables. En un intento de explicar estos resultados, se utilizó CLSM como un método auxiliar para el ensayo de CFU mediante el análisis de las biopelículas con sus estructuras tridimensionales en conserva, que también mostraron la viabilidad. Por lo tanto, la presencia de biofilm residual se confirmó por SEM y análisis CLSM, y fue posible observar células viables que recuerdan y estructuras de biopelícula en las TIC. Estas biopelículas residuales contribuyeron a la recolonización de superficie después de 48 h, como se observó en RT Francia El presente estudio evaluó los 1:. 5 y 1: 8 diluciones de limpiador ácido cítrico para simular su uso diario y semanal. Estas soluciones probablemente no afectaron completamente las capas basales de las biopelículas. Este fenómeno puede ser debido a la presencia de una matriz extracelular, que protegía la biopelícula de la limpieza, y las células que recuerdan en quiescencia metabólica, lo que representó la recolonización después de 48 h [1, 27]. . Por lo tanto, una sola exposición a cítrico limpiador de dentaduras ácido no es capaz de eliminar Candida
biofilms, o prevenir su recolonización
La comparación de los resultados de la cuantificación de células viables y análisis de la arquitectura biofilm, se encontró que los tratamientos con 1: 5 y 1: 8 diluciones de las soluciones de ácido cítrico podrían tener un efecto retardado sobre las células del biofilm. Aunque se observaron muchas células viables en las imágenes CLSM, éstos no fueron detectados por la evaluación de células viables. Esto puede explicarse por el fenómeno conocido como Post-antifúngica Efecto (PAFE), en la que sustancias almacenadas en el interior de las vacuolas pueden matar a las células en el tiempo [4].
Según PAFE, la absorción de ácido cítrico por Candida
células durante los tratamientos contribuido a la ausencia de las UFC en la evaluación de células viables, así como la reducción de la densidad celular de los 1: 5 y 1: 8 grupos, en comparación con el control. Con respecto a los biofilms visualizados en RT, se observó una biomasa mayor para el grupo CT8 que para el grupo CT5. Esta diferencia puede estar relacionada con las diferencias en el daño provocado por los dos limpiadores en RT, lo que significa que el tratamiento CT8 permitió mayor recolonización biofilm en el período de evaluación de RT.
Según la PAFE y los resultados obtenidos con las imágenes CLSM, biofilms tratados de el 1: grupo 5 mostró un daño mayor que los de la 1: grupo 8. capas basales de las biopelículas tratados con la dilución 1: 5 parecían mostrar una mayor respuesta a las TIC. Esto es porque el tratamiento de dilución de 1,5 resultó en una menor biofilm bio-volumen y espesor medio a TA. Además, el 1: tratamiento de dilución 8 no afectó profundamente biofilms, lo que permite su ampliamente recolonización después de 48 h
Los resultados del presente estudio demuestran que limpiador de dentaduras ácido cítrico es eficaz en la reducción de C. albicans
la viabilidad celular en. una biopelícula madura, inmediatamente después de los tratamientos. Sin embargo, esta solución de limpieza no elimina completamente la biopelícula y no impide su recolonización después de 48 h. Por lo tanto, este estudio presenta los resultados importantes en relación con el efecto anti-biopelícula de limpiador de dentaduras ácido cítrico.
Los resultados de este estudio deben interpretarse con cuidado debido a la naturaleza in vitro Red de las 72 h formada biopelícula no coincidir plenamente el entorno de la cavidad oral. Además, durante las primeras 72 horas de la formación inicial de biopelículas, que se utilizan para simular una biopelícula madura, habría varios sucesiones microbianas a través del tiempo, que podrían ser un tanto una limitación del presente estudio. Sin embargo, los resultados proporcionan datos importantes sobre cómo los
C. albicans biofilm se comporta con tratamientos diarios y semanales con limpiador de dentaduras ácido cítrico utilizados en la práctica clínica. Se necesitan estudios adicionales con otras especies de Candida
en una sola o mezclada biopelícula, que están cada vez más implicados en la estomatitis protésica a largo plazo. Además, estas biopelículas deben ser utilizados para las comparaciones entre la eficacia a largo plazo de este tipo de tratamientos con ácido cítrico y una solución estándar de oro (hipoclorito de sodio), lo que beneficiaría a los enfoques de tratamiento clínico.
Conclusión
Dentro de las limitaciones de este estudio, se encontró que los limpiadores de dentaduras postizas ácido cítrico redujo la viabilidad celular, pero no impidieron la recolonización de biopelículas dentro de las 48 h.
Declaraciones
Agradecimientos Los autores agradecen a
Sao Paulo investigación que apoya la Fundación (Fundación de Amparo a Pesquisa do Estado de S. Paulo) para las becas otorgadas a YWC y MMB (procesa 12 /07436-6 y 12 /21011-8)
material complementario Electrónico
12903_2014_404_MOESM1_ESM.pdf archivo adicional 1:. Esquema del diseño experimental realizada En el presente estudio. (PDF 727 KB) de los autores originales presentados archivos de imágenes
A continuación se presentan los enlaces a los autores originales presentados archivos de imágenes. 'archivo original de la figura 1 12903_2014_404_MOESM3_ESM.tif autores 12903_2014_404_MOESM2_ESM.tif Autores archivo original de la figura 2 Conflicto de intereses México La autores declaran que no tienen intereses en competencia.
contribuciones de los autores
FF, PRL, WJS, y AADBC conceptualizado y diseñado el estudio. FF, PRL, y WJS recogieron los datos. YWC y MMB interpretados y analizados los datos. FF, PCL, MMB, y PRL redactó el manuscrito. WJS y AADBC a cabo la revisión final del manuscrito. Todos los autores leído y aprobado la versión final de este manuscrito.
