Resumen Antecedentes
Francia El frecuencia de aislamiento y la susceptibilidad a los antifúngicos de Candida oral,
aislados de pacientes con candidiasis oral (CO) se compararon entre los estudios realizados en 2006-2007 y 2012-2013.
Métodos
un total158 cepas se aisló de 112 pacientes que visitaron el hospital de la Universidad de Kagoshima para el tratamiento de OC durante el período de 14 meses a partir de febrero de 2012 y marzo de 2013, y se evalúan en la frecuencia de aislamiento de cada Candida
cepa y la vulnerabilidad frente a los antifúngicos, en comparación con los evaluados en el período 2006-2007.
resultados
Hubo una mayor frecuencia de xerostomía como un motivo de consulta y de enfermedad autoinmune en el estudio 2012-2013 que en el estudio 2006-2007. Más del 95% de los aislamientos fueron Candida
C. albicans y C. glabrata
. Además, la proporción de este último aumentó de 12,3% en el estudio 2006-2007 a 23,4% en el estudio 2012-2013, mientras que la proporción de la primera se redujo de 86,2% a 72,8%, respectivamente. C. albicans
fue aislado en casi todos los pacientes, mientras que C. glabrata
solamente se aisló en forma concomitante con C. albicans
. Las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) no fueron significativamente diferentes entre los grupos con unas pocas excepciones. Candida
cepas, de las cuales superaron los PRM puntos de ruptura, aparentemente aumentaron de miconazol e itraconazol contra C. glabrata
en el estudio 2012-2013, pero esto no fue estadísticamente significativa. Como resultado, más casos de enfermedad autoinmune, se observaron un mayor número de C. glabrata
aislamientos, y mayor resistencia a los azoles en el estudio 2012-2013 que en el estudio 2006-2007.
Conclusión
estos datos indican que con los recientes aumentos de la infección por C. glabrata
, un hongo causante de la OC, y en C. glabrata
resistencia a los azoles, es necesario tener precaución en la selección de fármacos antifúngicos para el tratamiento de la CO.
Palabras clave
Candida glabrata
Candida albicans
aislados clínicamente tensiones mínimas Las cepas resistentes de concentración inhibitoria Yoshiaki Kamikawa, Youichirou Mori contribuyeron igualmente a este trabajo.
material complementario Electrónico
La versión en línea de este artículo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-14). contiene material complementario, que está disponible para los usuarios autorizados
Antecedentes
a principios de 1990, se informó de Candida albicans resistente a fluconazol
para ser frecuentemente aislado de la cavidad oral de los pacientes con síndrome de inmunodeficiencia adquirida. Un estudio epidemiológico se llevó a cabo en la susceptibilidad a las drogas antifúngica de Candida
cepas aisladas de pacientes con candidiasis invasiva [1]. Los programas de vigilancia a nivel mundial se han implementado para hacer frente a la resistencia a los antifúngicos por Candida, tales como el programa centinela de hongos resistentes a la anfotericina B en 2006-2007 antifúngicos de tipo Candín [2] y los informes sobre la susceptibilidad de Candida [3-6]. Hay 2 informes sobre vigilancia doméstica en Japón: 99 de vigilancia por parte de la micosis invasiva Vigilancia Grupo de Estudio de Japón (JMS) [7] y el Informe del Programa de Vigilancia de Japón antifúngica (JASP) [8-10]. Sin embargo, estos programas de vigilancia se centraron en las cepas aisladas de casos clínicos de micosis profunda, y sólo 1 informe, nuestro estudio previo llevado a cabo en el período 2006-2007, se llevó a cabo en la candidiasis oral [11]. México La frecuencia de aislamiento de Candida
es probable que cambie con el tiempo, como lo muestran las comparaciones de los estudios previos realizados en diferentes períodos de tiempo cepas. Por ejemplo, C. glabrata
rara vez se aislaron de pacientes con SIDA con candidiasis oral (CO) o candidiasis esofágica en el estudio de Sudo publicado en 1997 [12]; por el contrario, C. glabrata
se detectó en el 12,3% de los pacientes con OC en nuestro estudio, en el que el itraconazol (ZCIT) fue eficaz a pesar de la existencia de C. glabrata resistente
contra la ZCIT [11]. Además, mientras que C. glabrata resistente
contra la ZCIT se produjo con altas frecuencias de 50% y 72,7% en los pacientes OC-OC y no de este estudio, respectivamente, [11], un estudio de vigilancia japonesa anterior demostró C. glabrata resistente Hoteles en solamente 1,0 a 9,3% de los pacientes con micosis, micosis principalmente arraigado [7-10]. Por lo tanto, la frecuencia de aislamiento de Candida
especies y sus cepas resistentes varía con el tiempo, pero ningún estudio ha informado de variaciones en la frecuencia de OC con el tiempo en el mismo centro de salud. México La presente estudio fue realizado para evaluar fármacos antifúngicos contra Candida
cepas de forma aisladas de la cavidad oral de pacientes OC que visitó el hospital de la Universidad de Kagoshima en 2012-2013 (14 meses) y para evaluar la frecuencia de aislamiento de Candida
especies y sus cepas resistentes en comparación con nuestro estudio previo llevado a cabo en 2006-2007 (24 meses) con el fin de investigar los fármacos antifúngicos uso en el tratamiento de la CO.
Métodos sujetos
este estudio se analizaron 158 cepas aisladas de 112 pacientes que visitaron el Departamento de Cirugía Oral, Universidad de Kagoshima hospital, para el tratamiento de la CO durante el período de 14 meses a partir de febrero de 2012 y marzo de 2013. las cepas recogido de pacientes que han recibido terapia con medicamentos antifúngicos dentro de los 3 meses de la colección fueron excluidos de este estudio.
Análisis de variables de antecedentes de Candida
pacientes -isolated
se realizó un análisis por edad, sexo, enfermedad sistémica subyacente, el uso de hormonas esteroides, uso de prótesis dentales, motivos de consulta, y la enfermedad oral en los 112 pacientes de los que se aisló Candida
.
Colección de Candida
de la cavidad oral y el cultivo bacteriano
Antes del diagnóstico de OC, el área afectada de la cavidad oral se limpió con un bastoncillo de algodón estéril previamente sumergido en una solución salina fisiológica estéril. muestra de fluido recogido en el bastoncillo se unta sobre una Candida CHROMagar
medio de cultivo (Nippon Becton Dickinson y Company, Ltd.) y se incubó durante 48 horas a 36 ° C.
Identificación de especies de Candida
cultivo positivo de Candida
especies se determinó por observación colorimétrica de colonias en el CHROMagar Candida
medio de cultivo que contienen sustratos colorimétricos sintéticos que se cambian para ser cromogénico por las enzimas contenidas en Candida
especies. La confirmación de la determinación de las especies de Candida entonces hecho por la PCR basada en el método informado de Kanbe et al., Las células brevemente hongos que crecen en el medio de cultivo CHROMagar Candida se recogieron por centrifugación, se lavaron tres veces con agua destilada, y se extrajeron los ADN y purificada de acuerdo con el protocolo de un kit de purificación de ADN, kit de ADN rápido (BP Biomedical, US). A continuación, las muestras de ADN se amplificaron por PCR y los productos de PCR fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa para determinar el tipo de especies de Candida [13].
Diagnóstico de OC
fluido recogido en el bastoncillo de la zona afectada se transfirió en un portaobjetos de vidrio para la tinción de Gram por un método de rutina. Un diagnóstico de OC se hizo cuando la formación de colonias se observó durante la incubación y la presencia de la pseudo micelio se muestra por tinción de Gram [14].
Evaluación de la susceptibilidad a fármacos antimicóticos
Candida
cepas detectadas por el anteriormente métodos mencionados fueron re-sembraron en medio agar Sabouraud (Nippon Becton Dickinson y Company, Ltd.), seguido de una incubación de 48 horas a 36 ° C. Entonces se diluyó la cultura y se ajustó a un factor de McFarland de 0,5 mediante la medición de la densidad óptica a 530 nm usando un espectrofotómetro ViSpec II (Kyokuto, Japón), y se aplica para el ensayo para determinar la susceptibilidad. Una concentración inhibitoria mínima (CIM) de cada una de ANF-B, 5-FC, FLCZ, MCZ, ITCZ, y en contra de estos MCFG Candida
cepas se determinó con un ASTY levadura-como hongos Sensibilidad Kit (Kyokuto Pharmaceutical) compatible con el Comité Nacional de Normas de laboratorio clínico (NCCLS) método M-27A [15]. El kit incluye 11 concentraciones de cada fármaco antifúngico en una microplaca de 96 pocillos, es decir, las concentraciones finales de 0, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, y 16 mg /ml de anfotericina B, miconazol, y micafungina, 0, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 mg /ml para fluconazol y 5-FC, y 0, 0,015, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1 , 2, 4, y 8 mg /ml para el itraconazol y micafungina. La concentración de "0 g /ml" se considera como un control. Las cepas con alta MIC fueron sometidos a re-medición de MIC con un DP de hongos semejantes a las levaduras Eiken (Eiken Química) compatible con el método clínico y de laboratorio Standards Institute (CLSI) M27-A3 [10, 16]. MIC50 y MIC90, MICs requerida para inhibir el crecimiento de las respectivas 50% y 90% de Candida
especies, se calcularon. Las cepas resistentes fueron determinados por los siguientes criterios: ANF MIC-B, FLCZ, ≥64 mg /ml; 5-FC, ≥32 mg /ml; MCZ, ≥4 g /ml; MCFG, & gt; 2 mg /ml; y la ZCIT, ≥1 g /ml.
consentimiento informado y la guía ética
Todos los pacientes que participaron escrito el consentimiento informado en proporcionar directamente explicación detallada verbal y por escrito de esta investigación. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética Humana del Hospital Médica y Dental de la Universidad de Kagoshima (No.23-18 y 23-27).
El análisis estadístico se utilizó la prueba
probabilidad exacta de Fisher para determinar las diferencias de género (2 × 2), los motivos de consulta (2 × 8), enfermedad sistémica (sí o no; 2 × 2), el uso de esteroides (2 × 2), la presencia de prótesis dentales (2 × 2), la candidiasis oral (2 × 4), la composición aislado de Candida
especies (2 × 7), y la incidencia de cepas resistentes entre el 2006-2007 estudio y el estudio 2012-2013. La diferencia de edad entre los 2 estudios se examinó mediante t de Student
. valor de p inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativa.
Resultados
Parámetros sociales
Como se muestra en la Tabla 1, no hubo diferencias estadísticamente significativas en las variables de antecedentes en términos de género, edad, uso de un tratamiento de hormonas esteroideas, presencia y el tipo de enfermedades sistémicas y la presencia de prótesis dentales entre los pacientes en el estudio 2006-2007 y los del estudio 2012-2013. Entre los pacientes con 1 queja principal, xerostomía fue mayor en el estudio de 2012 a 2013 (23,2%) que en el estudio de 2006 a 2007 (8,8%), mientras que linguae tylosis fue inferior al 7,0% y 0%, respectivamente. En conjunto, la composición de los motivos de consulta fue significativamente diferente entre los pacientes 2006-2007 y 2012-2013 los pacientes tal como se analizó mediante la prueba de probabilidad exacta de Fisher (p & lt; 0,05). A pesar de una diferencia significativa en la aparición de la enfermedad sistémica entre los 2 estudios (77,2% vs. 86,6%), la presencia de enfermedades autoinmunes fue mayor en el estudio 2012-2013 que en el 2006-2007 estudio (27,6% vs. 6,7% , respectivamente) .table 1 Parámetros sociales de los pacientes con candidiasis oral matriculados en los estudios de 2006-2007 y 2012-2013
2006-2007
2012-2013
prueba
sujetos number
Total
57
112
Gender
Male
19
(33.3)
30
(26.8)
Fisher’s prueba de probabilidad exacta
Mujer
38 gratis (66,7)
82 gratis (73,2)
[2 × 2]
NS
Edad media
[max-min]
67,9
[26 -90]
69,6
[21-97] la prueba t de Student
NS
motivos de consulta
sensación de calor (HS) guía empresas 23 gratis (40.4)
46 gratis (41.1) guía empresas
sobre Taste anormalidad (TA)
2 gratis (3,5) 0
gratis (0)
La xerostomía (X)
5 gratis (8.8)
26 gratis (23.2)
Tilosis linguae (TL)
4 gratis (7,0) 0
gratis (0)
prueba de probabilidad exacta de Fisher
Rubor /Erosión (R /S)
4 gratis (7.0) guía empresas 8 gratis (7.1) guía empresas [2 × 8]
AS + TA + X
9 gratis (15.8)
16 gratis (14.3)
p & lt; 0,05
AS + TA + R /E
5 gratis (8.8)
8 gratis (7.1)
AS + TL
5
(8.8)
8
(7.1)
Total
57
(100)
112
(100)
Systemic enfermedad
Sí
44 gratis (77,2)
97 gratis (86,6)
prueba de probabilidad exacta de Fisher
Ninguno
13 gratis (28.8)
15 gratis (13.4) guía empresas [2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Endocrine
22
(29.3)
22
(17.3)
Cardiovascular
18
(24.0)
28
(22.0)
Gastrointestinal
123
(16.0)
12
(9.4)
Fisher’s prueba de probabilidad exacta
Tumor maligno
8 gratis (10.7)
12 gratis (9.4)
[2 × 7]
CNS
4
(5.3)
10
(7.9)
N.S.
Viral
6
(8.0)
8
(6.3)
Autoimmune
5
(6.7)
35
(27.6)
Total
75
(100)
127
(100)
Steroid
Dose
12
(21.1)
28
(25.0)
Fisher’s prueba de probabilidad exacta
no dosificadas-
45 gratis (78,9)
84 gratis (75.0)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Denture
Wearer
37
(64.9)
57
(50.9)
Fisher’s prueba de probabilidad exacta
no portador
20 gratis (35.1)
55 gratis (49.1)
[2 × 2]
total
75 gratis (100) guía empresas 112 gratis (100)
NS
candidiasis oral pseudomembranosa
42 gratis (73,7)
42
gratis (37,5)
eritematosa
11 gratis (19.3)
52 gratis ( 46.4)
prueba de probabilidad exacta de Fisher
hipertrófica
2 gratis (3.5)
4
(3.6) guía empresas [2 × 2]
Mixed
2
(3.5)
14
(12.5)
N.S.
Total
55
(100)
112
(100)
Cifra entre paréntesis representa el porcentaje, salvo la edad.
Clasificación de la candidiasis oral (CO)
Clasificación de los casos diagnosticados de anticonceptivos orales también se muestra en la Tabla 1. Entre los 57 pacientes en el estudio 2006-2007, OC era mayor frecuencia clasificado como OC pseudomembranosa (73,7%), seguido de OC eritematosa (19,3%). En el estudio de 2012-2013, sin embargo, OC eritematosa representó el medio (46,4%) de los casos de OC, seguido de OC pseudomembranosa (37,5%) y OC mixto (eritematosa y pseudomembranosa, 12,5%), pero no se observó diferencia estadística.
Aislado Candida
especies
en total, 158 cepas de Candida
fueron aisladas en los pacientes en el estudio 2012-2013. Los Candida
especies más frecuentemente aislados fueron Candida albicans (C. albicans
, 116 cepas, 73,4%), seguida por C. glabrata gratis (36 cepas, 22,8%), C. tropicalis
(3 cepas, 1,9%), C. parapsilosis
(2 cepas, 1,3%), y C. krusei
(1 cepa, 0,6%) (Tabla 2). Cuando se analizaron sobre una base del paciente, C. albicans
fue aislado en todos los pacientes (n = 112), mientras que C. glabrata
nunca fue encontrado por su propia cuenta, únicamente de forma concomitante con C. albicans
en 36 pacientes . Más de una especie de Candida
especies se aisló en 41 pacientes, con concomitantes C. albicans y C. glabrata
sobre ser la combinación más común en aproximadamente el 90% de estos pacientes. Por el contrario, entre 65 cepas de Candida aisladas en pacientes
en el estudio 2006-2007, 56 cepas de C. albicans
(86,2%), 8 cepas de C. glabrata gratis (12,3%), y se identificaron 1 cepa de C. tropicalis gratis (1,5%), y
no se detectaron cepas de C. parapsilosis y C. krusei
. Por lo tanto, en el estudio 2012-2013, el número de cepas aisladas de C. glabrata
era casi el doble de la del estudio 2006-2007, y la relación de C. albicans
a todo Candida
cepas se por lo tanto, significativamente inferior en el estudio 2012-2013 cuando se analizaron en una cepa de base o en un paciente-base. Así, en tanto el paciente-base y la tensión base-análisis, se observó una diferencia estadística entre el 2006-2007 estudio y el estudio 2012-2013 (p & lt; 0,01) .Tabla 2 Distribución de las especies de Candida aisladas de pacientes con candidiasis oral en 2006-2007 y 2012-2013 los estudios
especies de Candida
Número de pacientes (%)
prueba
2006-2007
2012-2013
especies individuales aislados
Candida albicans gratis (CA )
49 gratis (86,0)
71 gratis (63.4)
Candida glabrata
(CG) guía empresas 1 gratis (1,8) 0
gratis (0)
Candida tropicalis gratis ( CT)
0 gratis (0) 0
gratis (0)
Candida parapsilosis gratis (CP )
0 gratis (0) 0
gratis (0)
Candida krusei gratis (CK)
0 gratis (0) 0
gratis (0)
prueba de probabilidad exacta de Fisher
Plural especies aisladas
[2 × 10]
CA + CG
6
(10.5)
36 gratis (32.1) guía empresas p & lt; 0,01
CA + CT
0 gratis (0)
3 gratis (2.7)
hotels, CA + CP
0 gratis (0)
1 gratis (0,9)
CA + CG + CT
1 gratis (1,8) 0
gratis (0)
CA + CP + CK
0
(0)
1
(0.9)
Total
57
(100)
112
(100)
Las especies de Candida
Número total de Candida cepas aisladas (%)
prueba
2006-2007
2012-2013
Candida albicans
56 gratis (86,2)
112 gratis (72,8)
Candida glabrata
8 gratis (12.3) guía empresas 36 gratis (23.4)
Candida tropicalis
1 gratis (1.5)
3 gratis (1.9)
exacta de Fisher prueba de probabilidad
Candida parapsilosis
0 gratis (0)
2 gratis (1.3)
[2 × 5]
Candida krusei
0 gratis (0)
1 |
(0.6) guía empresas p & lt; 0,01
total
65 gratis (100) guía empresas 154 gratis (100
la susceptibilidad a los fármacos antifúngicos
Dado que pocos (de 1 a 3 cepas) de la Candida
especies distintas de C. albicans y C. glabrata
fueron aislados en ninguno de los estudios, los valores de CMI de los fármacos antifúngicos contra C. tropicalis
, C. parapsilosis, España y C. krusei
, que nunca fueron aislados por sí solo, pero sólo en combinación con C. albicans y C. glabrata
, no eran fiables. Por lo tanto, los resultados de las pruebas de sensibilidad se refieren principalmente a la CIM de C. albicans y C. glabrata
gratis (Tabla 3) .Tabla 3 antifúngica perfil de susceptibilidad, en contra de la anfotericina B, flucitosina, fluconazol, miconazol, itraconazol, y micafungina, de las especies de Candida aisladas de pacientes con candidiasis oral en los estudios de 2006-2007 y 2012-2013
una. anfotericina B (ANF-B)
Año
Colar
No. de cepas
MIC (μg/mL)
MIC50
MIC90
<0.03
0.03
0.06
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
>16
2006-2007
C. albicans
56
8
43
3
2
0,5
0,5
C. glabrata
8
1
2
2
2
1 |
0,5
2
C. tropicalis
1
1 |
0,25
0.25
2012-2013
C. albicans
112
página 4
12 86
La
9
1
0,5
1
C. glabrata
36
1
2
16
14
2
1
0,5
1
C. tropicalis
3
1 |
2
1
1
C. parapsilosis
2
2
Hotel & lt; 0,03
& lt; 0,03
C. krusei
1
1
0,5
0,5
b. flucitosina (5-FC)
Año
Strain
Nº de cepas
MIC (mg /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125 0,125
0,25
0,5
1 2
4
8
16
32
64
& gt ; 64
2006-2007
C. albicans
56
18
8
24
3
1
2
0,25
0,5
C. glabrata
8
4
1
1
2
Hotel & lt; 0,125
16
C. tropicalis
1
1
0,125 0,125
2012-2013
C. albicans
112
56
1
43
3
3
4
1
1
0,25
1
C. glabrata
36
20
6
6
2
1
1
& lt; 0,125
8
C. tropicalis
3
3
& lt; 0,125
& lt; 0,125
C. parapsilosis
2
página 2
2
C. krusei
1
1
1 |
0,25
0,25
c. fluconazol (FLCZ)
Año
Strain
Nº de cepas
MIC (mg /ml) guía empresas MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125 0,125
0,25
0,5
1
2
4
8
16
32
64
& gt; 64
2006-2007
C. albicans
56
22
22
5
1
1
1
1
3
0,5
4
C. glabrata
8
1
página 2
2
1
1
1 |
2
& gt; 64
C. tropicalis
1 |
1
& gt; 64
& gt; 64
2012-2013
C. albicans
112
4
33
51
2
1
3
3
3
0.5
página 2
C. glabrata
36
4
1
5
6
7
7
2
16
64
C. tropicalis
3
1
2
32
32
C. parapsilosis
2
2
2
2
C. krusei
1
1
2
2
d. miconazol (MCZ)
Año
Strain
Nº de cepas
MIC (mg /ml) guía empresas MIC 50
MIC 90
& lt; 0,03
0,03
0,06
0.125
0,25
0,5
1
2
4
8
16
& gt; 16
2006-2007
C. albicans
56
2
22
20
8
1
3
0,125
0,25
C. glabrata
8
1
2
2
1 |
2
1
4
C. tropicalis
1
0,125 0,125
2012-2013
C. albicans
112
2
20
64
18
1
1
1
2
3
0,25
0,5
C. glabrata
36
1
5
12
7
página 3
3
2
3
2
16
C . tropicalis
3
1
1
1 |
1
4
C. parapsilosis
2
1
1
1-2
2
C. kurusei
1
1
página 4
4
correo. itraconazol (ZCIT)
Año
Strain
Nº de cepas
MIC (mg /ml) guía empresas MIC
