Resumen Antecedentes
Francia El virus del papiloma humano (VPH) son una gran familia de virus de ADN no envueltos, principalmente asociado con cánceres de cuello uterino. evidencia epidemiológica reciente ha sugerido que el VPH puede ser un factor de riesgo independiente para el cáncer de orofaringe. La evidencia sugiere ahora HPV puede modular el proceso de malignidad en algunos tumores orofaringe el tabaco e inducido con el alcohol, pero también podría ser el factor oncogénico principal para inducir la carcinogénesis entre algunos no fumadores. Sin embargo, se necesita más evidencia con respecto a la prevalencia del VPH oral entre los adultos sanos para estimar el riesgo. El objetivo de este estudio fue realizar una revisión del HPV de los adultos sanos normales para evaluar la prevalencia del VPH oral.
Métodos
se seleccionaron pacientes adultos sanos a una escuela dental Estados Unidos para participar en este estudio piloto. Se aisló el ADN a partir de muestras de saliva y se tamiza para el VPH de alto riesgo HPV16 y HPV18 Cepas y tratarse mediante qPCR para la cuantificación y para confirmar la sensibilidad y especificidad analítica.
Resultados
Chi-cuadrado análisis revelaron la muestra del paciente era representativo de la clínica de la población general con respecto a género, raza y edad (p Hotel & lt; 0,05). Se encontraron cuatro muestras de pacientes para albergar ADN de HPV16, que representa 2,6% del total (n = 151). Tres de las cuatro muestras de HPV16-positivas eran de pacientes menores de 65 años de edad y los cuatro eran mujeres e hispanos (no blanca). Ninguna de las muestras dieron positivo a HPV18.
Conclusiones Francia El éxito de la contratación y selección de pacientes adultos sanos revelaron HPV16, HPV18 pero no, estaba presente en un pequeño subgrupo. Estos resultados proporcionan nueva información sobre el estado del VPH oral, que puede ayudar a contextualizar los resultados de otros estudios que demuestran los índices de cáncer orales han aumentado en los EE.UU. entre ambas mujeres y las minorías y en algunas zonas geográficas que no se explican únicamente por las tasas de tabaco y alcohol utilizar. Los resultados de este estudio pueden ser de gran valor para mejorar nuestra comprensión de la salud oral y el riesgo de la enfermedad, así como para ayudar a diseñar futuros estudios que exploran el papel de otros factores que influyen en la exposición oral por VPH, así como el corto y largo . consecuencias a largo plazo de la infección oral por VPH
material complementario Electrónico
La versión en línea de este artículo (doi:. 10 1186 /1472-6831-11-28) contiene material complementario, que está disponible para los usuarios autorizados. Antecedentes
Francia el virus del papiloma humano (VPH) ha sido implicado como la causa de prácticamente todos los cánceres de cuello uterino en todo el mundo [1-3]. Estos representan una gran familia de virus no envueltos de ADN que pueden encontrarse integrado en el genoma del huésped, no integrado o episomal, o como una combinación o mezcla de estos tipos de tejidos infectados [4-9]. virus VPH infectan a muchos tipos de células epiteliales, con neoplasias intraepiteliales representan la inmensa mayoría de los cánceres relacionados con el VPH [5, 10, 11].
evidencia epidemiológica reciente ha sugerido que el VPH también puede ser un factor de riesgo independiente para el cáncer orofaríngeo , revelando contra el VPH en tres veces el número de lesiones orales precancerosas, y casi cinco veces más cánceres de la orofaringe en comparación con la mucosa oral normal [12-14]. De todos los tipos de VPH, el alto riesgo cepas de VPH 16, y en un grado menor HPV18, son los más comúnmente identificados a partir de biopsias orales [15-21]. Aunque los factores de riesgo tradicionales para el desarrollo de cáncer de orofaringe mantienen el consumo de tabaco y el consumo excesivo de alcohol, otros factores de riesgo, tales como el VPH, pueden desempeñar un papel importante en la determinación de si se desarrolla y la rapidez con que puede progresar [14, 19, 22-28]. Francia El comparativamente baja presencia de VPH de alto riesgo en tejidos normales y prevalencia mucho mayor en las lesiones orofaríngeas pre-cancerosas y cancerosas pueden sugerir que el VPH infecta preferentemente ya desarrollar cáncer de orofaringe [12-14]. Aunque es posible que la baja prevalencia en individuos sanos podría ser atribuible a otros factores, incluyendo la recogida de muestras inadecuada o la sensibilidad del ensayo, también es posible que el VPH puede funcionar para modular el proceso de malignidad en el desarrollo o tumores orofaríngeos establecidos, como se ha observado en los estudios de la infección por VPH en otros tipos de cáncer en desarrollo [29-39]. Por ejemplo, recientes estudios epidemiológicos y de casos y controles han demostrado que los pacientes con tumores orofaríngeos VPH positivas habían mejorado significativamente las tasas de supervivencia [12, 40, 41] y las tasas de respuesta terapéutica en comparación con los controles negativos de VPH [42]. Varios in vitro
estudios han investigado recientemente posibles mecanismos que pueden explicar estos cambios fenotípicos en cánceres de la orofaringe [25-27]. La evidencia está acumulando que la infección por VPH de algunos cánceres de la orofaringe se correlaciona con un aumento de las tasas de supervivencia y mejor pronóstico entre algunos pacientes debido a estos cambios en la respuesta celular [40-45]. Estos estudios ponen de relieve la necesidad de comprender no sólo la prevalencia de la infección oral por VPH, sino también la duración y persistencia de este tipo de infecciones, debido a su potencial de afectar a la progresión del tumor orofaríngeo.
Es probable que el VPH puede modular el proceso de malignidad en algunos de tabaco y alcohol inducida por cáncer de orofaringe, pero también pueden ser el factor oncogénico principal para la inducción de la carcinogénesis en un subgrupo de pacientes sin estos factores de riesgo tradicionales. Cierta evidencia ha demostrado que no son de tabaco y alcohol no relacionados con cáncer de orofaringe tenían seis veces más probabilidades de albergar infecciones por VPH que los controles emparejados por caso [46]. Para evaluar con precisión el riesgo, se necesitan más estimaciones de la prevalencia del VPH oral entre los adultos sanos. Estudios internacionales han evaluado la prevalencia del VPH en adultos sanos a partir de muestras de biopsia, revelando las tasas de prevalencia que van del 0 al 15% [20, 47-51]. Además, otros estudios han comenzado a reportar la saliva menos invasiva y métodos de prueba basados en lavado orales para identificar VPH entre las muestras de saliva de adultos sanos, revelando las tasas de prevalencia entre el 2,8 y el 25% [15, 52-60]. Algunos de estos
se llevaron a cabo estudios de detección de VPH oral en los EE.UU. en adultos normales y saludables, además de los pacientes con cáncer de orofaringe [57, 58, 61]. Estos estudios han reportado tasas mucho más bajas, entre el 1,3 y el 7%, que en los estudios internacionales anteriores [47, 50, 53]. Basándose en esta información, el objetivo de este proyecto ha sido realizar un cribado de las cepas más comunes de VPH de alto riesgo, HPV16 y HPV18, en adultos sanos normales. Este estudio piloto se llevó a cabo en Nevada, un estado recientemente se ha documentado que presentan tasas de cáncer de orofaringe entre 1997 y 2005 - a pesar de la disminución de las tasas de tabaco y alcohol en el estado, así como la disminución de las tasas de cáncer de orofaringe a nivel nacional [23, 24] . El objetivo a largo plazo es proporcionar información más detallada acerca de la prevalencia del VPH de alto riesgo por vía oral para permitir estimaciones más confiables del riesgo de cáncer de orofaringe.
Métodos Sujetos Humanos
Francia El protocolo de este estudio titulado "La prevalencia de Oral Virus del Papiloma humano (VPH) en la Universidad de Nevada, las Vegas - Escuela de Medicina Dental (UNLV-SDM) Clínica de la Población "fue presentada, en su versión modificada, y aprobado por la Oficina de UNLV de Integridad de la Investigación - sujetos Humanos (OPRS # 1002 -3361), el 9 de abril de 2010. en resumen, los sujetos en esta muestra de conveniencia fueron reclutados por miembros de la Clínica Universidad de las Vegas-SDM durante su visita al dentista en una de las 15 fechas de las clínicas. Consentimiento Informado se requiere y se llevó a cabo en el lugar. Criterios de inclusión: los sujetos tenían que tener 18 años de edad o más y deben estar de acuerdo en participar. Criterios de exclusión: los sujetos menores de 18 años de edad, los sujetos que se negaron a participar, y los sujetos con diagnóstico previo de cáncer de orofaringe fueron excluidos Tamaño de la muestra
Para determinar un tamaño de muestra adecuado, estudios previos que pruebas de detección de alto. riesgo de VPH oral en adultos sanos se evaluaron para determinar la gama de tamaños de la muestra, que variaban en gran medida de 12 - 1680 [47-62]. Investigaciones anteriores en UNLV y la Clínica Universidad de Las Vegas-SDM demostraron bajas tasas de participación para exámenes invasivos, basados en la sangre [63], pero las tasas más altas de participación mediante la biomonitorización no invasiva y los métodos de detección, incluyendo la toma de saliva (datos no publicados). Estos estudios tuvieron tamaños de las muestras que van desde 16 - 200. En base a esta información combinada el tamaño máximo de la muestra se calculó en 200.
Saliva Collection Protocolo
En breves adultos sanos, que aceptaron participar se les dio un pequeño, estéril contenedor de recogida de saliva, un tubo de polipropileno estéril de 50 ml de Fisher Scientific (Fair Lawn, Nueva Jersey). Luego se pidió a los participantes para masticar en un pequeño trozo de cera de parafina durante un minuto y luego expectorar. Las muestras se almacenaron en hielo hasta su transporte a un laboratorio para el análisis biomédico. Cada muestra de saliva se le asigna un número único, generado de forma aleatoria para evitar el sesgo de la investigación. La información demográfica sobre la muestra fue recogida al mismo tiempo, que consistía en edad, género, y etnicidad solamente. conteo
celular y aislamiento de ADN
Todas las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 2100 g
(RCF) y el sedimento se lavó con solución salina tamponada con fosfato 1X (PBS) (HyClone: Logan, UT) y se resuspendieron en 5 ml de 1X PBS. El número de células se determinó utilizando azul de tripano (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) utilizando un microscopio Zeiss Axiovert 40 invertida (Göttingen, Alemania) y un hemocitómetro (Fisher Scientific: Fair Lawn, Nueva Jersey). Para determinar si las muestras albergaban el virus HPV, el ADN fue aislado de la muestra de saliva utilizando un mínimo de 3,5 × 10
5 células y el kit de aislamiento de ADN GenomicPrep (Amersham Biosciences: Buckinghamshire, Reino Unido), utilizando el procedimiento recomendado por el fabricante, tal como se describe anteriormente [26, 27, 32]. pureza del ADN se calculó utilizando mediciones de la relación de absorbancia a 260 y 280 nm (relación A260 /A280 entre 1,7 y 2,0). A continuación, se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR)
ADN de cada muestra para llevar a cabo PCR con el Fisher exACTGene completo kit de PCR (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) y un gradiente termociclador Mastercycler (Eppendorf: Hamburgo, Alemania) usando los siguientes cebadores para HPV16 [26, 27], HPV18 [27, 32], y glyceraldehyde- 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) [64], sintetizado por SeqWright (Houston, TX):
HPV16 cebador directo, ATGTTTCAGGACCCACAGGA;
HPV16 imprimación, CCTCACGTCGCAGTAACTGT inversa;
HPV18 cebador directo, ATGGCGCGCTTTGAGGATCC;
HPV18 cebador inverso , GCATGCGGTATACTGTCTCT;
GAPDH cebador directo, ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH cebador inverso, ACCACTGACACGTTGGCAGT; se utilizó
Uno g de ADN plantilla para cada reacción. El primer paso de desnaturalización corrió durante tres minutos a 94 ° C. se realizaron un total de 30 ciclos de amplificación, que consta de 30 segundos de desnaturalización a 94 ° C, 60 segundos de hibridación a 58 ° C, y 30 segundos de extensión a 72 ° C. La extensión final se realizó durante cinco minutos a 72 ° C. Los productos de reacción de PCR se separaron por electroforesis en gel usando Reliant 4% NuSieve ® 3: 1 geles de agarosa Plus (Lonza: Rockland, ME). Las bandas se visualizaron por iluminación UV de bromuro de etidio-geles teñidos y capturaron utilizando un sistema Kodak Gel lógica 100 de imagen y 1D Image Analysis Software (Eastman Kodak: Rochester, NY): PCR cuantitativa (qPCR)
muestras de ADN. luego fueron procesados utilizando qPCR para proporcionar una cuantificación más específicos y sensibles. Los cebadores y sondas fueron diseñados utilizando biblioteca Roche sonda universal (UPL) software de diseño de ensayo para amplificar la región de superposición E6 y E7 de HPV16 secuencia de genes [GenBank: K02718] y la limpieza de genes β-actina humana [GenBank: M10277]. Todos los cebadores fueron adquiridos de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.) Y sondas compraron de Roche Applied Science (Indianapolis, IN).
HPV16 E6 /E7 cebador directo 5'-CAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAA-3 ', HPV16 E6 /E7 cebador inverso 5'-CCAGCTGGACCATCTATTTCA-3 ', HPV16 E6 /E7 hidrólisis "Taqman" sonda 5' - (FAM) -AGGAGGAG- (oscuro tinte desactivador) -3 '(UPL sonda # 63) se utilizó para amplificar el par 73 de base (pb) región entre la posición 535 nucelotide (nt) y 607 nt posición. β-actina humana cebador directo 5'-3-GTGGGGTCCTGTGGTGTG sonda 5 ', β-actina humana 5'-GAAGGGGACAGGCAGTGA-3', "Taqman" humana hidrólisis β-actina '- (FAM) -GGGAGCTG- (oscuro tinte desactivador) - 3 '(UPL sonda # 24) amplificó la región de 61 pb entre 2642 y 2702 la posición de nucleótido posición nt. Francia el tiempo real mezcla de reacción se prepara en un LightCycler ® 480 placa de múltiples pocillos 96 que contiene 1 × LightCycler ® 480 Sondas Maestro (Roche Applied Sciences), 1 mM de cada conjunto de cebadores respectiva (adelante y atrás), 0,2 M de la sonda respectiva, y 2 l de molde de ADN; en un volumen de reacción final 20 l. La mezcla de sondas maestro contenida tampón de reacción, mezcla de dNTP (incluyendo dUTP en lugar de dTTP), MgCl 3,2 mM 2, y Taq ADN polimerasa
. El ensayo de PCR en tiempo real se realizó en un sistema LightCycler 480 (Roche Applied Science) con los siguientes parámetros de ciclo: pre-incubación de la activación de la enzima inicial a 95 ° C durante 10 minutos, seguido por 45 ciclos de 95 ° C durante 10 segundos (velocidad de rampa 4,4 ° C /segundo), 60 ° C durante 30 segundos (velocidad de rampa de 2,2 ° C /segundo) y 72 ° C durante 1 segundo (velocidad de rampa 4,4 ° C /segundo). Después de la fase de amplificación, una etapa de enfriamiento se realizó a 40 ° C durante 30 segundos (velocidad de rampa de 2,2 ° C /segundo). Adquisición de la señal de fluorescencia se realizó mediante el establecimiento (465 a 510 nm) después de la 72 ° C fase de extensión de cada ciclo de Mono La hidrólisis de la sonda. Todas las muestras se llevaron a cabo por triplicado
sensibilidad analítica Francia El CaSki (American Type Culture Collection, Manassas, VA). Línea celular de adenocarcinoma de cuello uterino se utilizó para desarrollar las curvas de calibración tanto para el HPV16 (600 copias /genoma) y β -actina (2 copias /genoma) genes. ADN extraído a partir de células CaSki se diluyó en serie diez veces a partir de 50 ng a 0,0005 ng [65]. Este paso permitió la cuantificación relativa del nivel de ADN de entrada y la cantidad final como el número de viral copias /genoma /célula. La cuantificación se consigue utilizando ciclo umbral (C T) medida con la segunda derivada máxima método (LightCycler versión 1.5.0.39 Software 480; Roche Applied Science). Las muestras de saliva & gt; 0.001 copias /genoma del VPH fueron considerados positivos. análisis de la especificidad se realizó en qPCR ensayo contra el VPH 18 y se encontró que el 100% específico (datos no mostrados)
Evaluación estadística
sensibilidad y la especificidad se calcula como la proporción de verdaderos positivos y verdaderos negativos (valor de corte & gt;. 0.001 copias /genoma), respectivamente. Tras la adquisición de muestras de saliva y los resultados de detección de VPH, la información demográfica de cada muestra se comparó con el perfil demográfico general del paciente piscina UNLV-SDM (N = 71, 051) mediante una prueba de chi-cuadrado (χ2), para determinar si cualquier característica (género, raza, edad) era diferente de lo esperado entre los pacientes evaluados en este estudio (n = 151). Un nivel de probabilidad de alfa (α) = 0,05 se utilizó para determinar la significación estadística.
Resultados
Las muestras de saliva se obtuvieron de 151 pacientes UNLV-SDM entre el 2 de junio y el 1 de octubre de 2010. Los pacientes de los cuales eran muestras recogido y proyectado no fueron estadísticamente diferentes de la población global clínica de UNLV-SDM con respecto al género, la raza o la edad (tabla 1). Más específicamente, el número total de hembras y machos de la muestra fue aproximadamente igual (52,3% y 47,7%, respectivamente) y no significativamente diferente de la población clínica global (p = 0,589
). Había un poco más pacientes blancos en la muestra del estudio (48,3%) que en la población general UNLV-SDM (40,8%) (p = 0,133
). Además, había un poco menos de 18 - 64 años de edad en la muestra (80,8%) que en la clínica global (85,3%) (p = 0,354
) .Tabla 1 Análisis demográfico de los participantes del estudio
Variables
UNLV-SDM
estudio de muestreo
El análisis estadístico
Género
|
|
Mujer
n = 35.952 (50,6%) guía empresas n = 79 (52,3 %) guía empresas χ2 = 0,119, df = 1
Hombre
n = 35.099 (49,4%) guía empresas n = 72 (47,7%) guía empresas p = 0,589
Race
|
|
|
blanca
n = 28.989 (40,8%) guía empresas n = 73 (48,3%) guía empresas χ2 = 1,621, df = 1
No blanco
n = 42.062 (59,2%) guía empresas n = 78 (51,7%) guía empresas p
= 0,133
Edad
|
|
|
18 - 64 años
n = 60.598 (85,3%) guía empresas n = 122 (80,8%) guía empresas χ2 = 1,056, df = 1
65 +
n = 10.453 (14,7%) guía empresas n = 29 (19,2%) guía empresas p =
0,354
Análisis de muestras de saliva reveló recuentos de células que varían entre 0,8 - 2,4 x 10 6 células /ml (Tabla 2). Se aisló el ADN con éxito de todas las muestras de saliva recogidas, con concentraciones medias de ADN que oscilan entre 820 - 1047 ng /mL. Las medidas de absorbancia y análisis de la relación A260 /A280 confirmaron la pureza del ADN aislados, con un promedio entre 1,87 y 2 2.05.Table recuento celular y el aislamiento de ADN
Conteo de células (células /ml) guía empresas concentración de ADN media (ng /l) guía empresas A260 /A280
muestras (n)
0,8 - 1,2 x 106
915
2.05
31
1.6- 1.9 × 106
820
1,87
94
2.1 a 2.4 × 106
1047
1,95
26
El ADN extraído se proyectó posteriormente la presencia de HPV16 y HPV18 usando PCR (Figura 1). A partir de esta evaluación, cuatro muestras de pacientes fueron determinadas de estar VPH-positivo, lo que representó el 2,6% del total proyectado (n = 4/151). Las cuatro muestras de ADN albergaban HPV16 y ninguno se encontró que ser positivos para HPV18. A pesar de que un conjunto de muestras positivas de sólo cuatro pacientes no permite ninguna conclusión o conclusiones más generales, un análisis descriptivo preliminar de la información demográfica reveló estas cuatro muestras eran de mujeres, que también eran minoría (no blancos, hispanos) (Tabla 3). Tres de las cuatro muestras eran de pacientes de entre 18 - 64 años de edad (2,0%), y una muestra de vino de un paciente de más de 65 años de edad (0,7%). Figura 1 La selección de muestras de pacientes para el VPH. PCR utilizando ADN extraído de las muestras de los pacientes (n = 151) se escrutó utilizando cebadores con HPV 16 y VPH 18-específica, que reveló cuatro muestras de HPV16 albergado (2819, 2718, 2527 y 2430). No se encontraron muestras de albergar HPV18. ADN extraído previamente a partir de líneas celulares de adenocarcinoma cervical, CaSki y GH354, se utilizó como HPV16 y HPV18 controles positivos, respectivamente.
Tabla 3 Análisis de HPVscreening
Variables
HPV16-positive
HPV18-positive
HPV-negative
Género
|
|
Mujer
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 75 (49,7%)
Hombre
n = 0
n = 0
n = 72 (47,7%)
Race
|
|
|
blanca
n = 0
n = 0
n = 73 (48,3%)
no blanco
n = 4 (2,6%) guía empresas n = 0
n = 74 (49,0%)
Edad
|
|
|
18 - 64 años
n = 3 (2,0%) guía empresas n = 0
La n = 119 (78,8%)
65 +
n = 1 (0,7%) guía empresas n = 0
n = 28 (18,5 %)
muestras de ADN fueron procesadas mediante qPCR cuantitativa para proporcionar una evaluación cuantitativa, así como la medición de la sensibilidad y especificidad (Figura 2). El análisis de la gama de número de copias /genoma para la limpieza de genes (β-actina) dentro de VPH-negativo (rango: 4 - 363 copias /genoma) y las muestras positivas para el VPH (rango: 75 a 1096) fueron similares y muy por encima del valor de corte (& gt; 0,1 copias /genoma). Análisis de los resultados qPCR en el número de copias /genoma de VPH reveló notables diferencias en el número de copias entre el VPH-negativo (rango: 0,0001 - 0,000004 copias /genoma) y VPH-positivo (rango: 70 - 111), que se distinguían fácilmente utilizando el punto de corte valor (& gt; 0.001 copias /genoma). No se encontraron falsos positivos o falsos negativos, lo que demuestra la suficiente sensibilidad y especificidad para determinar la proporción de verdaderos positivos (4/4 ó 100%) y verdaderos negativos (147/151 o 100%). Figura 2 Análisis gráfico de los resultados de la prueba de VPH qPCR. Trazado del número de copias /genoma para la limpieza de genes (β-actina) fue similar a partir de muestras de VPH-positivo (rango: 75-1096) y muestras de VPH-negativas (rango: 4 - 363 copias /genoma). Número de copias /genoma mediante qPCR fue significativamente por encima del valor de corte (& gt; 0,1 copias /genoma), lo que confirma las muestras positivas para el VPH hicieron ADN de HPV16 puerto (rango: 70 - 111 copias /genoma), pero no HPV18. Los valores para las muestras de VPH-negativos fueron muy por debajo del valor de corte (rango: ,0003-0,000004 copias /genoma)., Con la excepción de tres muestras (2867, 2854, 2792) que estaban por debajo del límite de detección
Discusión
El objetivo principal de este estudio fue realizar un examen oral de los adultos sanos normales en Nevada por VPH de alto riesgo. Los intentos anteriores de esta institución y dentro del estado para obtener muestras de sangre a base de otros tipos de proyecciones, tales como los niveles de plomo (Pb), han tenido muy poco éxito debido a la aprehensión del paciente y el miedo a la extracción de sangre [63]. Para evitar estos problemas específicos, este estudio se utilizó de forma no invasiva saliva recogida para llevar a cabo este análisis. Estos esfuerzos permitieron en última instancia, para la recogida y clasificación de muestras de pacientes de decenas; una notable mejora en las tasas de participación de los pacientes más de otra anterior, pero similar, los intentos de recoger muestras biológicas de la población local. Los resultados de este estudio proporcionan nuevos datos a partir de una población de pacientes previamente no apantallado y el área geográfica para complementar la creciente corpus de información sobre la prevalencia del VPH oral entre los adultos sanos.
Estos datos demostraron una tasa de prevalencia de HPV oral de alto riesgo (2,6 %) prácticamente los mismos que los estudios más recientes multinacionales de adultos sanos y libres de cáncer (3,1% a 5%) [61, 62]. Durante las últimas décadas, los estudios internacionales han evaluado la prevalencia del VPH en adultos sanos a partir de muestras de biopsia, que informaron ampliamente las tasas de prevalencia variables que oscilan entre el 0 - 15% de [47-51]. Sin embargo, otros informes publicados recientemente cribado para la infección por VPH oral entre los adultos sanos, utilizando la saliva y las pruebas de lavado bucal informaron las tasas de prevalencia globales que también estaban cerca de este rango (1,3%, 2,8%, 7%) [52-59].
Además, aunque los resultados de este estudio encontraron la infección oral por VPH sólo entre cuatro pacientes, que eran minoría y hembra, la gran mayoría de pacientes de sexo femenino y de las minorías en este estudio no tenía ninguna evidencia de infección oral por VPH. Como un estudio piloto inicial, estos datos sugieren puede ser necesario un análisis más completo y profundo de esta población, ya que los estudios epidemiológicos recientes han demostrado que las tasas de refugio cáncer orofaríngeo aumentado considerablemente entre las mujeres de las minorías en los EE.UU., a pesar de las tasas globales de la disminución de [ ,,,0],66]. De manera más general, las tasas de cáncer de orofaringe han surgido entre algunos subgrupos minoritarios [67], a pesar de una disminución general en la población general en los EE.UU. [23, 24, 68]. Esto puede explicarse, en parte, por mayores tasas de tabaco y alcohol, pero también puede ser atribuible a otros factores como la educación, los ingresos, el estrés, la dieta, el conocimiento sobre la salud y la exposición a agentes infecciosos orales [22, 25]. Este estudio piloto proporciona información preliminar sobre la prevalencia del VPH oral y los resultados sugieren que una mayor investigación puede estar justificada, particularmente a la luz de las disparidades de salud que enfrentan las hembras y las minorías en Nevada y en los EE.UU., en general [23, 24].
este estudio también reveló la presencia de la cepa HPV16 de alto riesgo, pero no HPV18. Aunque algunos informes han sugerido que la infección oral por VPH puede implicar múltiples cepas del VPH [15-21, 69], este resultado no es muy diferente de otros hallazgos que sugieren HPV16 puede dar cuenta de la inmensa mayoría de las muestras orales VPH positivos [48, 49, 53, 57, 59]. Es probable que una mayor expansión de este proyecto para incluir muestras más grandes va a descubrir las cepas de VPH adicionales para proporcionar más extensas estimaciones de la infección por VPH oral dentro de esta población.
Este estudio tiene varias limitaciones que deben ser considerados. En primer lugar, aunque la naturaleza no invasiva de este estudio fue suficiente para el reclutamiento y la selección de un número significativo de pacientes, el tamaño total de la muestra fue un poco limitado en comparación con los estudios multinacionales más grandes mencionados anteriormente [57, 58, 61]. El número de adultos sanos seleccionados para el VPH oral en este estudio piloto, sin embargo, se compara favorablemente con un número de otros informes - con tamaños de muestra que van desde 12 hasta 97 [20, 47-53]. En segundo lugar, los datos demográficos y de comportamiento detallados no fueron designados como críticos para los objetivos iniciales de este estudio piloto, sin embargo, la inclusión de fumar y el consumo de tabaco, así como información más detallada acerca de otros comportamientos, la vivienda, la educación, los ingresos y otros indicadores socioeconómicos , así como las prácticas sexuales pueden proporcionar ideas adicionales en futuras investigaciones [55, 58, 59, 70]. Por último, la detección de cepas adicionales de VPH de alto riesgo [71-75] y otros agentes infecciosos orales puede ser posible en futuros estudios con más recursos y personal significativos.
Conclusiones En este estudio se reclutaron
con éxito a pacientes y muestras de saliva seleccionados para VPH de alto riesgo, lo que confirma HPV16, HPV18 pero no, estaba presente en un pequeño subconjunto de los pacientes adultos sanos en una población clínica de la escuela dental de los Estados Unidos. Estos pacientes eran mujeres y minorías. Muchas disparidades de salud enfrentan las mujeres y las minorías en los EE.UU., y con una cierta evidencia que sugiere que el tabaquismo y las tasas de cáncer de orofaringe pueden estar aumentando en estos subgrupos de población, los resultados de este estudio pueden ser de gran valor para otros, los profesionales dentales, y de salud médica para promover una comprensión de riesgo para la salud y la enfermedad oral
abreviaciones
(VPH):.
virus del papiloma humano
(EEUU): Estados
Estados
(ADN): El ácido desoxirribonucleico
(UNLV-SDM):
Universidad de Nevada, Las Vegas - escuela de Medicina Dental
(PCR): la reacción en cadena de la polimerasa
(GAPDH):
gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa
(qPCR):
reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa
(pb):
par de bases
(nt):
nucleótidos
(RCF):
fuerza centrífuga relativa
( PBS): solución salina tamponada con fosfato
(dNTP):
desoxirribonucleótidos trifosfato
(dUTP):
2'- desoxiuridina trifosfato
(dTTP):.
desoxitimidina trifosfato
Declaraciones
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a la Universidad de Nevada, Reno (UNR) Facultad de Medicina de la Universidad de las Vegas la Escuela de Ciencias de la Salud de la Comunidad y la Universidad de las Vegas-SDM Departamento de Ciencias Biomédicas y de la Oficina de Investigación para la entrega de los suministros y reactivos para este estudio piloto inicial. KK quiere agradecer a Laurel Pritchard, Kenneth Fernández y Chandler Marrs por su ayuda. "Archivos originales presentados para las imágenes
A continuación se presentan los enlaces a los autores de los autores
archivos originales presentados para las imágenes. 'archivo original de la figura 1 12903_2010_195_MOESM2_ESM.pdf autores 12903_2010_195_MOESM1_ESM.pdf Autores archivo original para la figura 2 Conflicto de intereses México La autores declaran que no tienen intereses en competencia.
contribuciones de los autores
KK, SW, AB y RW concebido, supervisado y coordinado el diseño experimental. RB, JC, JF, DM, y JM eran responsables de reclutar pacientes, consentimiento informado, la toma de muestras, y algunos análisis biomédico. DT, KK, y SW llevó a cabo la extracción de ADN, análisis de PCR y qPCR. KK, SW y DT eran responsables del análisis de los datos, así como la redacción y edición de este manuscrito. Todos los autores han leído y aprobado el manuscrito final.
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