Resumen Antecedentes
la queratina que producen quistes odontogénicos (KPOCs) son un grupo de lesiones quísticas que son a menudo agresivo, con altas tasas de recurrencia y multifocalidad . KPOCs incluido quiste odontogénico orthokeratinised (OOC) y quistes odontogénicos paraqueratóticas, que ahora se consideran verdaderos tumores denominados tumores odontogénicos keratocystic (KCOTs). GLUT1 es un transportador de proteína que está implicada en la captación activa de glucosa a través de las membranas celulares y que se sobreexpresa en los tumores en estrecha correlación con la tasa de proliferación y la tomografía por emisión de positrones (PET) resultados de las imágenes.
Métodos
una serie de 58 quistes odontogénicos queratina producción se evaluó histológicamente y inmunohistoquímicamente en términos de expresión GLUT1. Resultados
diferentes datos se correlacionan con el modelo de regresión beta en relación con el tipo histológico y la expresión inmunohistoquímica de GLUT1, que se cuantificó usando dos métodos morfológicos diferentes.
Casos KPOC comprendían 12 y 46 OOCs KCOTs, este último correspondiente al 6 sindrómica y 40 KCOTs esporádicos. expresión de GLUT1 fue muy baja en comparación con los casos OOC casos KCOT, con diferencias estadísticamente significativas cuando se consideró la cuantificación. Los diferentes patrones de localización GLUT1 fueron revelados por inmunotinción, con las células parabasales que muestran mayor reactividad en KCOTs. Sin embargo, entre los casos KCOTs, la expresión de GLUT1 no pudo establecer diferencias entre los casos de síndromes y esporádicas.
Conclusiones
expresión de GLUT1 diferencia entre los casos KCOT OOC y, con un número significativamente mayor expresión en KCOTs, pero no diferenció entre sindrómica y esporádica KCOT casos. Sin embargo, dadas las características estructurales de KCOTs, la hipótesis de que la metodología de la PET no es, probablemente, una herramienta de diagnóstico útil para KCOTs. Se necesitan más estudios de expresión de GLUT1 y el examen PET en serie KCOT para confirmar esta última hipótesis.
Palabras clave
glucosa proteína transportadora de inmunohistoquímica Queratina productoras odontogénico quiste Keratocystic tumor odontogénico Orthokeratinised quiste odontogénico de positrones La tomografía por emisión de fondo
Keratin- que producen quistes odontogénicos (KPOCs) forman un grupo heterogéneo de lesiones quísticas que a menudo son agresivos en carácter, con altas tasas de recurrencia y multifocalidad [1], asociado a una marcada actividad proliferativa [2, 3]. El espectro lesional de KPOCs incluye quistes odontogénicos principalmente orthokeratinised (OOC) y queratoquiste, que, de acuerdo con directrices de la OMS [4] También se hace referencia a los tumores odontogénicos como keratocystic (KCOTs), de conformidad con KCOTs ser verdaderos crecimientos tumorales. La gestión eficaz de estas lesiones quísticas es objeto de discusión frecuente [5] y la transformación maligna es posible, aunque muy poco frecuentes [6].
glucosa como fuente de energía primaria, entra intracelularmente por una familia de transportadores de llamada GLUTs, de los cuales al menos 13 miembros ahora son conocidas con células específicas de expresión [7]. Dentro de estas familias, o glucosa GLUT1 eritrocitos transportador es-expresó más en los tumores, sobre todo en las lesiones malignas, como la glucosa es la principal fuente energética de estos crecimientos neoplásicos [8]. Esto se basa en el uso de una metodología de formación de imágenes, tomografía llamada de emisión de positrones (PET) sola o combinada con la tomografía computarizada (PET-CT), que utiliza como radiotrazador el análogo de la glucosa 18F-fluorodeoxiglucosa (18FGD) [9].
en el área de cabeza y cuello, GLUT1 también se sobreexpresa en momentos concretos en algunos tumores benignos [10, 11], en particular los que tienen una marcada actividad proliferativa [12]. Del mismo modo, en algunos tumores odontogénicos benignos con altas tasas de recurrencia, se ha observado que la sobreexpresión de GLUT1, en la medida en que puede ser útil para el PET o PET-CT para evaluar la recurrencia de estos tumores benignos [13]. Sin embargo, en nuestro conocimiento, la expresión de GLUT1 no se ha investigado en KPOCs con una alta tasa de recurrencia, que se consideran actualmente como un verdadero tumores odontogénicos con una alta probabilidad de recaída [1, 4, 5]. En el presente
estudio, que tuvo como objetivo analizar, por primera vez, a nuestro conocimiento, la expresión de GLUT1 en una serie de KPCOs, para diferenciar los subtipos histológicos y evaluar el potencial para el uso de la PET en el diagnóstico de estas lesiones, similar a lo que se ha reportado en otra tumores benignos de la cabeza y el cuello con altas tasas de recurrencia [13].
Métodos
se estudiaron 58 casos de KPOCs que fueron diagnosticados durante un período de 10 años (2005-2015) en el Departamento de Patología de la Fe hospital universitario, Valencia, España. material histológico fue recuperado de almacenamiento. Nuestro trabajo formó parte de un proyecto previamente aprobado por el Consejo de Revisión Institucional (Comité Ético de Investigación Clínica -CEIC-) (Protocolo nº. 2013/0045) y las directrices que se describen en la Declaración de Helsinki, según la revisión de Seul 2008 -Corea- fueron seguidos estrictamente. Antes de realizar la cirugía oral, se obtuvo el consentimiento informado por escrito en todos los pacientes, la comunicación de la participación de sus biopsia orales en este estudio inmunohistoquímico. Se seleccionaron los casos utilizando una base de datos de diagnóstico patológico (Pat Win® versión 4.1.4). Se realizó una búsqueda retrospectiva de 10 años empleando los términos de búsqueda "Queratoquiste", "quiste primordial", "tumor odontogénico keratocystic", "orthokeratinised quiste odontogénico", y "quiste queratinizado", la comprensión de la nomenclatura variada [14] utilizado en estas lesiones .
se revisaron todas las secciones histológicas originales microscópicamente por dos observadores (BVS, FVS), y se reclasifican aplicando las directrices de la OMS de 2005 (4) y los criterios diagnósticos descritos en el OOC [15, 16]. Los datos clínicos, radiológicos y quirúrgicos en todos los pacientes se obtuvieron de los registros médicos que utilizan la plataforma Mizar® 2.0 con la ayuda del visor Luna® 3.0. Hemos tomado nota de los siguientes datos: edad; género; ubicación de la lesión (mandibular y /o maxilar); hallazgos de seguimiento clínico /radiológicos, número de recurrencias; y todos los datos clínicos, patológicos o genéticos que sugiere una asociación sindrómica. Se utilizaron los criterios de Kimonis et al. [17] para diagnosticar el carcinoma basocelular Síndrome nevoides (SCNCB).
Secciones 5 m de espesor fueron cortadas de los bloques originales incluidos en parafina y se montaron en portaobjetos de vidrio recubierto de polietileno-Llysine- antes de la tinción inmunohistoquímica. Epítopo recuperación procedió a 97 ° C durante 20 minutos en una solución de pH elevado Envision FLEX Target Retrieval, seguido de lavado durante 5 minutos en tampón de lavado Envision FLEX. GLUT 1 se immunostained utilizando un anticuerpo policlonal concentrado (Master Diagnostica, Granada, España), a una dilución de 1/50. El tiempo de incubación fue de 20 min y la tinción se visualizó usando el sistema de alta pH EnVision FLEX. secciones de la placenta y las membranas de eritrocitos sirven, respectivamente, externa e interna, controles de tinción positiva y los controles negativos fueron secciones de prueba de forma simulada manchado (el anticuerpo primario fue reemplazado por solución salina tamponada con fosfato -PBS-).
GLUT 1 a inmunotinción nivel epitelial de KPOC se cuantificó usando el sistema de microscopía digital de Leica DMD108 (Leica Microsystems
©, Wetzlar, Alemania) y dos procedimientos diferentes. En primer lugar, se midió el espesor (valores de 0 a 100%) del epitelio marcado por GLUT1. En segundo lugar, una puntuación de inmunoreactividad para GLUT1 (IRS-GLUT1), basado en el descrito por IRS Remmele et al. [18], se estableció. IRS evalúa dos parámetros: la intensidad de la inmunotinción (0 = ausente; 1 = débil; 2 = moderada, 3 = fuerte) y el porcentaje de células marcadas (valores de 0 a 4: 0 = 0%; 1 = 1 a 25%; 2 = 25-50%; 3 = 50-75%; 4 = 75 a 100%). Producto de ambos parámetros suministra los (valores de 0 a 12) del IRS. Adicionalmente, se registró la ubicación de la inmunotinción (basal, suprabasal, intermedia o superficial).
Los resultados obtenidos se expresan como la media, la desviación estándar (DE), mediana y rango intercuartil para cada tipo lesional. Para contrastar las diferencias en la expresión de GLUT1, el espesor del epitelio porcentaje de teñido y la puntuación del IRS se compararon, mediante el modelo de regresión beta, cambiar la escala de las variables "score" y "grueso porcentaje manchado" en el rango [0-1]. El análisis estadístico se realizó utilizando el software estadístico R, versión 3.1.2, teniendo en cuenta un valor de p inferior a 0,05 como indicativo de significación estadística.
: Resultados de la Luego de la revisión histológica, los 58 KPOCs se clasificaron, utilizando los criterios de la OMS, en 46 y 12 KCOTs OOCs. De los 46 casos KCOT, 6 fueron considerados sindrómica KCOT (S-KCOT) porque también se observaron otras lesiones o anormalidades consistentes con la presencia de SCCBN. La Tabla 1 resume los datos epidemiológicos, así como la frecuencia de las recidivas, con base en información de la clínica y radiológica de seguimiento. Cabe destacar que el diagnóstico en ningún caso en nuestra serie se realizó a través de la formación de imágenes PET.Table 1 seguimiento de los datos epidemiológicos y
tipo lesional
N ° casos
media edad (años)
proporción M /F
Seguimiento
un
% recurrencia
Ubicación y b
Mb
Perfil - 83,33%
OOC
12
35,50 ± 12,10
7/5
39,0 ± 26 , 01
0%
Mx
Perfil - 16,66%
Mb
Perfil - 75,00%
NS-KCOT
40
45,67 ± 21,20
21/19
29,6 ± 31,04
35%
Mx
Perfil - 22,50%
Mb & amp; Mx
Perfil - 2,50%
Mb
-
33,33%
S-KCOT
6
23,00 ± 18,07
1/5
112,0 ± 76,10
100%
Mx
Perfil - 16,33%
Mb & amp; Mx
Perfil - 50,00%
una media clínico-radiológica de seguimiento expresado en meses sobre B Mb: mandibular; Mx: maxilar
S-KCOT (seis casos) afectados cinco mujeres y un hombre, con edades entre 9-54 años, y la edad media de los pacientes en el momento del diagnóstico fue de 23 ± 18,07 años. Todos los pacientes tuvieron recurrencias; la media del número de recurrencias fue de 3 ± 1,41 durante un período de seguimiento medio de 112 ± 76,1 meses. Las lesiones se produjeron en maxilar y mandibular (tres pacientes), la mandíbula sola (dos pacientes), y el maxilar solo (un paciente). La región premolar fue el más frecuentemente afectado, seguido de las regiones molares y anterior
no sindrómica KCOT (NS-KCOT; 40 casos) se produjo en 21 varones y 19 mujeres (M /F: 1,10). Con una media edad de 45,67 ± 21,2 años (rango, 9-84 años), y el 35% de los pacientes (14 de 40) tenía recurrencias (una media de 1,4 ± 0,6 recaídas) durante 29,6 ± 31,04 meses de seguimiento. De todos los pacientes, 75%, 22,5% y 2,5% tenían lesiones en la mandíbula, maxilar superior, o ambos, respectivamente. La región premolar mandibular fue afectado con mayor frecuencia, y la región anterior menos afectado.
OOCs se observaron en siete varones y cinco mujeres, y la edad media al diagnóstico fue de 35,5 ± 12,1 años (rango, 19-65 años). De todos los pacientes, el 83,5% tenían afectación mandibular exclusivamente, y sólo dos tenían lesiones en el maxilar superior. El área mandibular molar, seguido de la región mandibular premolar, era el sitio más frecuentemente afectado. Cinco de los doce quistes (41,6%) se asociaron con dientes impactados y fueron inicialmente mal diagnosticados clínicamente y radiológicamente como quistes dentígero. Ningún paciente tenía múltiples lesiones OOC, y ningún paciente tuvo recurrencia o desarrollado de otra lesión durante un tiempo medio de seguimiento de 39 ± 26,1 meses (rango, 9-95 meses), lo que confirma una diferencia significativa (p = 0,039
) en comparación con OOC contra todos KPOCs en relación con la recurrencia.
Después de realizar la inmunohistoquímica en nuestra serie KPOC (. las figuras 1 y 2), se observó que la expresión de GLUT1 era baja y poco visible en OOC, mostrando sólo una débil reactividad citoplasmática y membranosas, que se distribuyó, en el basal, parabasales y las capas intermedias del epitelio quístico, a veces con un predominio de la reactividad basal. Por el contrario, la inmunorreactividad fue mayor en KCOT, con inmunotinción membranosa más pronunciada en parabasal que en las células basales. Las células intermedias de KCOT también se marcaron pero con inmunotinción moderado, a menudo algo más alta que las células basales. Además, se observó que la inmunotinción GLUT1 era muy similar, tanto en intensidad y localización, en casos NS-KCOT S-KCOT y. Higo. 1 expresión de GLUT1 en KCOT y OOC. KCOT (a y b) que muestra una GLUT1 pronunciado inmunotinción con un patrón predominantemente membranosa (a). La inmunorreactividad es especialmente marcado en el parabasal y los niveles de epitelio intermedia (B). inmunotinción débil en GLUT1 OOC (C y D), con un patrón citoplasmático y también ligeramente granular membranosa, algo más pronunciada a nivel basal (d). (GLUT1, 200x y 400x)
Fig. 2 expresión de GLUT1 en KCOT y OOC. Vista panorámica y los detalles de la inmunotinción GLUT1 en KCOT (a, b, cyd) y las muestras OOC (E, F, G y H), donde se presentan los diferentes proporción del espesor epitelial con inmunotinción GLUT1. Los eritrocitos (asteriscos) aparece con un etiquetado intenso, como un control positivo interno. (GLUT1, 100, 200x y 400x)
En cuanto a la cuantificación de la expresión de GLUT1, el IRS-GLUT1 (puntuación con valores que van de 0 a 12) los resultados numéricos en general pequeños (Tabla 2), especialmente en los casos OOC (puntuación media: 3,84 ± 2,93) en comparación con los casos KCOT (puntuación media: 5,53 ± 2,62). ambas puntuaciones medias en comparación, utilizando el modelo de regresión beta, una tendencia estadística cerca de la significación (p = 0,057
) se encontró, en relación con el IRS grupo de OOC, que eran más bajos que los del grupo KCOT. Del mismo modo, entre los casos KCOT, los casos S-KCOT mostraron un poco más alto IRS (6,28 ± 2,13) que los casos NS-KCOT (IRS: 5,37 ± 2,72) y que los valores del IRS de ambos subgrupos S-KCOT y NS-KCOT, aunque con diferencias significativas (p = 0,477
) .Tabla 2 GLUT-1 de expresión en los casos KPOC fotos: por el contrario, en la evaluación de la expresión por el epitelio porcentaje espesor GLUT1 + (Tabla 2) (Fig. 2), que encontrado que los casos OOC tienen un espesor más pequeño (31,46 ± 19,94%) con GLUT1 + inmunotinción de casos KCOT (56,61 ± 22,34%), y la diferencia fue estadísticamente significativa (p
= 0,002). Por lo tanto, el análisis del espesor porcentaje del epitelio GLUT1 + tinción permitió la discriminación de los dos subtipos KPOC. Finalmente, en S-KCOT subgrupo, el espesor porcentaje con GLUT1 + inmunotinción (66,42 ± 17,96%) fue mayor que en los casos esporádicos (NS-KCOT) (52,03 ± 22,60%), aunque con diferencias significativas (p
= 0,128).
Discusión
en el presente estudio, se han analizado por primera vez a nuestro conocimiento, la expresión de GLUT1, un transportador de proteína implicada en la captación activa de glucosa a través de las membranas celulares, en una serie de KPOCs, que constituyen un grupo heterogéneo de lesiones quísticas odontogénicos, que a menudo son agresivos en carácter, con altas tasas de recurrencia y multifocalidad [1], y se asocia con una marcada actividad proliferativa [2, 3].
expresión de GLUT1 tiene una relación importante con la metodología 18FGD-PET, una modalidad de imágenes funcionales de rápido desarrollo que ha mostrado una gran promesa en el campo de la primaria, recurrente y la detección de tumores metastásicos, así como en la planificación y el seguimiento de la terapia de diversos tumores [19] .
GLUT1 o transportador de glucosa de eritrocitos es el miembro mejor conocido de la familia de transportadores de GLUTs independiente de la insulina que se sobreexpresa en las lesiones tumorales [7], especialmente los malignos, dado el aumento de consumo de glucosa presente en las células tumorales se necesita para proporcionar energía para la proliferación celular [8]. expresión GLUT1 en diferentes modelos de crecimiento del tumor ha estado estrechamente correlacionados, primero, con la tasa de proliferación celular, y segundo, con la eficacia de la metodología 18FGD-PET como técnica de diagnóstico [20], dado que, como la glucosa, 18 FDG pasa a través la membrana celular a través de GLUTs, y luego se somete a la fosforilación por la hexoquinasa para formar FDG-6-fosfato. FDG-6-fosfato no se metaboliza más, y se acumula en los tejidos con metabolismo de la glucosa activo [21].
Dentro del espectro lesional de KPOC, se han identificado formas quísticas de carácter relativamente inocuo, tal como el llamado OOC [ ,,,0],15, 16]; queratoquiste y formas agresivas también incluidos, denominado clásicamente [1] y hoy llamados KCOT [4]. Estas últimas lesiones presentan una marcada actividad proliferativa [2, 3] y tienen un alto potencial de recurrencia [5], hasta el punto de ser considerado el crecimiento del tumor odontogénico verdadera [4]. Hoteles en nuestros resultados, verificamos que la presente en OOC la basal, parabasal y capas intermedias una expresión muy limitada de GLUT1. Comparativamente casos KCOT muestran una alta reactividad, centrado principalmente en la capa de células parabasales. Además, los niveles de expresión de GLUT1 cuantificados en OOC y KCOT mostraron una diferencia estadísticamente significativa (o estaban cerca de la significación estadística) de acuerdo con el espesor del epitelio quística marcado por GLUT1 o IRS-GLUT1, respectivamente. Sin embargo, en nuestro estudio, la expresión de GLUT1 no discrimina entre los casos de síndromes y esporádicos de KCOT.
En los tumores, la expresión de GLUT1 se correlaciona bien con tasas de proliferación celular dado el metabolismo de la glucosa activa de tumores altamente proliferantes [21]. Esta relación se confirmó en nuestro estudio de las claras diferencias en la expresión de GLUT en OOC y KCOT. Nuestros resultados parece estar en acuerdo con los de otros estudios que informó de diferencias obvias en las tasas de proliferación de ambas lesiones quísticas odontogénicos, utilizando diversos marcadores inmunohistoquímicos proliferativas, tales como Ki 67 [2] o ciclina D1 [2, 3]. expresión de GLUT1 se estableció en nuestros casos KCOT, con mayor intensidad, en particular a nivel de células parabasales, y estos datos refuerza el papel de las células parabasales como elementos protagonistas en el crecimiento del tumor de KCOT [2, 3]. Teniendo en cuenta que el tipo de tratamiento es conocido realizado para tener una notable influencia en las tasas de recurrencia de KCOT [5], hay que señalar que, dado el carácter retrospectivo de nuestro estudio, con diversos y no homogéneos tratamientos, no es posible establecer con certeza la relación entre la expresión de GLUT1 y la recidiva lesional.
Otro aspecto a considerar es la relación entre la expresión de GLUT1 y la eficacia de la detección de tumores mediante PET o PET-TC combinada. Varios estudios inmunohistoquímicos han demostrado la sobreexpresión de GLUT1 en los tumores malignos humanos y una correlación entre la expresión de GLUT1 y la progresión neoplásica [21]. Además, se ha informado que la sobreexpresión de GLUT1 estar estrechamente relacionada con la captación 18FGD de PET, porque 18FGD también es absorbido a través del transporte intracelular de GLUT1 [21-25].
Posibles usos y aplicaciones del PET, paradójicamente, no se limitan a tumores malignos; Así, en el área de la cabeza y cuello, se ha observado que algunos tumores benignos [26], tales como adenoma pleomórfico [10], miofibroma [12] y adenoma ceruminous [11], demuestran positividad por PET. Estas lesiones benignas a menudo se incluyen en la lista de posibles errores y dificultades en la evaluación de los cánceres de cabeza y cuello utilizando PET pero este conocimiento correcto pueden proporcionar información diagnóstica útil en un contexto clínico adecuado [26]. Bienvenidos en los tumores odontogénicos , un estudio previo [13] mostró cuatro casos de ameloblastoma, un tumor benigno con una alta tasa de recurrencia, con reactividad frente a GLUT1 y la positividad en el examen PET, postulando que el PET-TAC puede ser útil en el diagnóstico por imagen de las recurrencias en el ameloblastoma. En este informe [13], GLUT1 inmunotinción no fue cuantificado, por lo que no es posible comparar nuestros resultados en KCOT con los reportados en ameloblastoma. Por otra parte, no hay ningún estudio publicado sobre el uso de la PET-TC en el diagnóstico o seguimiento de KCOT, y en nuestra serie de KPOC, ningún caso fue sometido a un examen PET o PET-CT.
Sin embargo, a pesar de esta última limitación, varios puntos sugieren que la metodología de PET no es una herramienta de diagnóstico útil en el caso de KCOT. En primer lugar, la media de IRS-GLUT1 encontrado en nuestro estudio fue baja (5,53 ± 2,62) sobre una posible puntuacion máximo de 12, y un segundo aspecto muy importante a tener en cuenta es la estructura del tumor. Por lo tanto, KCOT es una lesión tumoral quística donde reactividad GLUT1 se limita al revestimiento epitelial. Otsuru et al. [13] informó de un caso de ameloblastoma uniquístico y tres tipos no uniquístico. Curiosamente, ameloblastoma uniquístico mostró menor reactividad a GLUT1 y menor absorción de 18 FDG en comparación con los tipos de tumores sólidos [13]. Este hallazgo sugiere que la eficacia de 18FGD-PET está vinculado, independientemente de la reactividad de GLUT1, con el volumen de la masa tumoral [27]. Además, la hipótesis de que la metodología de PET-CT probablemente no es útil en el caso de KCOT, se establece porque la captación celular de 18FGD por KCOT no alcanzó niveles suficientes para causar una SUVmax adecuada (valor máximo normalizado). Otros estudios, el análisis de la expresión de GLUT1 y PET en serie KCOT, son necesarias, en nuestra opinión, para determinar si el análisis de la expresión de GLUT1 en ameloblastoma es aplicable a KCOT y si 18FGD-PET es una herramienta útil en el diagnóstico de KCOT recurrencia.
Conclusiones
expresión de GLUT1 diferencia entre los casos KCOT OOC y, con un número significativamente mayor expresión en KCOTs, pero no diferenció entre los casos esporádicos y KCOT sindrómica. Sin embargo, dadas las características estructurales de KCOTs, la hipótesis de que la metodología de la PET no es, probablemente, una herramienta de diagnóstico útil para KCOTs. Se necesitan más estudios de expresión de GLUT1 y el examen PET en serie KCOT para confirmar esta última hipótesis
abreviaciones
GLUT1:.
eritrocitos transportador de glucosa 1
KPOC:
quistes odontogénicos de queratina productoras
KCOT:
tumor odontogénico keratocystic
OOC:
orthokeratinised quiste odontogénico
SCNCB:
nevoides basocelular carcinoma de síndrome de
PBS:
solución salina tamponada con fosfato
IRS: puntuación
inmunorreactiva
PET: tomografía por emisión de positrones
TC: tomografía computarizada
18FGD:
18F-FDG
OMS: Organización Mundial de la Salud
< DFN> S-KCOT:
sindrómica tumor odontogénico keratocystic
NS-KCOT: Read no sindrómica keratocystic tumor odontogénico
Declaraciones
Agradecimientos los autores agradecen a
David Marín Hervas por su ayuda con el análisis estadístico y la revisión crítica del estudio logo articles abierto AccessThis se distribuye bajo los términos de la Licencia Internacional 4.0 Creative Commons Reconocimiento (http:. //creativecommons . org /licencias /por /4. 0 /), que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que le dan el crédito correspondiente al autor (s) original y la fuente, proporcionar una enlace a la licencia Creative Commons, e indicar si se han realizado cambios. La renuncia Creative Commons Public Domain Dedication (http:. //Creativecommons org /publicdomain /cero /1 0 /) se aplica a los datos facilitados en este artículo, a menos que se indique lo contrario
de la competencia. intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en competencia contribuciones
autores diseño del estudio:. BVS. Colección de muestras biológicas: BVS, FVS. revisión histopatológica: BVS, FVS. Procesamiento de las muestras /Estudio inmunohistoquímico: FVS. Análisis de los datos: BVS, LFN. Interpretación de los resultados: BVS, LFN. La escritura de la primera versión: BVS, LFN. La escritura de dratf definitiva: FVS. Revisión crítica del manuscrito: Todos los autores. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
