Resumen Antecedentes
La higiene bucal es importante para la salud oral y sistémica, especialmente para las personas institucionalizadas ancianos y pacientes comprometidos. Sin embargo, el control mecánico de la placa convencional es a menudo difícil para estos pacientes debido al dolor o el riesgo de aspiración. Aunque la terapia fotodinámica antimicrobiana (TFDa), que se considera una alternativa o complemento a los enfoques mecánicos, tiene aplicación potencial como un método menos estresante de control de placa diaria, se ha informado de ninguna aplicación clínica de esta técnica.
Métodos Nos
investigado el efecto inhibidor de una combinación de azul de toluidina O (TBO), y un emisor de luz roja de diodos (LED) en la formación de placa dental en voluntarios sanos. Se determinó la concentración óptima de TBO en preliminares in vitro
experimentos en evaluar el efecto bactericida de TFDa en Streptococcus oralis
y para aclarar su seguridad en células de fibroblastos. Para estudiar el mecanismo de la mediada por TBO TFDa, la calidad y cantidad de especies reactivas de oxígeno (ROS) generado durante TFDa también fueron examinadas usando espectroscopia de resonancia de spin electrónico (ESR). Posteriormente, el efecto inhibidor de TFDa en la formación de placa dental se investigó en once sujetos como un estudio clínico piloto. Los premolares inferiores derechas o izquierdas fueron asignados al azar al tratamiento (con TFDa) o control (sin TFDa) grupos. En total, se aplicó TFDa seis veces (dos veces por día) a los dientes en el grupo de prueba durante un período de cuatro días. En el cuarto día, el estudio concluyó y se realizaron los análisis.
Resultados
Una combinación de 500 o 1.000 mg de TBO /ml y la irradiación LED durante 20 s redujo significativamente el número de unidades formadoras de colonias de Streptococcus oralis
. La citotoxicidad de TFDa era comparable a la de los antisépticos estándar utilizados en la cavidad oral. Los radicales hidroxilo se detectaron mediante análisis de ESR, pero el oxígeno singlete no lo era. Un ensayo controlado aleatorio demostrado que TFDa con 1.000 mg /ml TBO y la irradiación LED rojo suprimió significativamente la formación de la placa dental sin dañar los dientes o los tejidos circundantes.
Conclusiones
TFDa tiene el potencial de ser una modalidad novedosa técnica prometedora para dental control de la placa.
registro de prueba gratis Este ensayo se ha registrado en el hospital Universitario de la Red de Información médica Registros de Ensayos Clínicos (número UMIN000012504).
Palabras clave
terapia fotodinámica antimicrobiana emisor de luz roja del diodo azul de toluidina O Dental control de la placa de hidroxilo radical ensayo controlado aleatorizado Electrónico material complementario
La versión en línea de este artículo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-152) contiene material complementario, que está disponible para los usuarios autorizados
Antecedentes
terapia fotodinámica antimicrobiana (TFDa) es un procedimiento en el que la activación dependiente de oxígeno de un fotosensibilizador por la luz (principalmente láseres) conduce a la generación de especies reactivas del oxígeno citotóxicos (ROS). Recientemente, este procedimiento se introdujo en el médico [1, 2] y dentales [3-6] campos. Además de la confirmación de su potencial antimicrobiano in vitro
[7, 8], los estudios clínicos previos han evaluado la aplicación de TFDa para el tratamiento del acné vulgar en dermatología [9], y de periodontal [10, 11], de endodoncia [12 , 13], y peri-implante [14] enfermedad en odontología. Además, ya que utiliza compuestos generados por la luz, TFDa puede ser capaz de erradicar las bacterias resistentes a múltiples fármacos, sin influir en la aparición de una resistencia adicional en las bacterias [15]. El aumento de
existe evidencia de que el cuidado oral es crítica para la salud sistémica, especialmente en pacientes comprometidos. Anteriormente, Yoneyama et al
. informó que una buena higiene bucal disminuye el riesgo de la neumonía y la tasa de mortalidad en individuos ancianos institucionalizados [16, 17]. Abe et al
. También sugirió que la higiene oral fue efectiva en la prevención de la influenza [18]. Los Institutos Nacionales de Salud (NIH) ha recomendado que "todos los pacientes con cáncer deben tener un examen oral antes de la iniciación de la terapia del cáncer y el tratamiento de la preexistente o enfermedad oral concomitante es esencial para reducir al mínimo las complicaciones orales en los pacientes con cáncer" [19 ]. Convencionalmente, herramientas mecánicas, tales como un cepillo de dientes, hilo dental, o un cepillo de esponja lograr la eliminación de la placa bacteriana dental. Sin embargo, el control mecánico de la placa es técnicamente exigente, y puede ser físicamente estresante para los sujetos con un rango reducido de movimiento del brazo, o una condición médica que les impide mantener una buena higiene bucal. Por lo tanto, la aplicación de unos medios no mecánicos para controlar la formación de la placa dental podría ser de interés de ancho.
En 1993, Wilson et al
. [20] propuso TFDa como una alternativa a los materiales farmacéuticos y mecánicas de la eliminación de la placa bacteriana dental. Sin embargo, no hay informes clínicos sobre el uso de TFDa como un método de cuidado oral preventiva para el control de la formación de placa dental. Si TFDa podría utilizarse como un nuevo método para controlar la formación de la placa dental, los pacientes pueden ser capaces de recibir el cuidado oral eficiente sin las tensiones desagradables que acompañan a la limpieza dental mecánica convencional, tal como hemorragia o dolor.
Consiguiente, que tuvo como objetivo investigar los efectos inhibitorios de TFDa en la cavidad oral de voluntarios sanos como un estudio piloto, antes de la prueba clínica con pacientes reales. Nos centramos en azul de toluidina O (TBO), que es un fotosensibilizador clásico de sal fenotiazinio, porque sus efectos bactericidas ya se aclararon en anteriores in vitro
estudios en [8, 21 a 23], así como en el tratamiento de periodontitis [4]. Además, los efectos bactericidas de TFDa mediada por TBO que utilizan diodos emisores de luz roja de alta potencia (LED) de dos bacterias típicas periodontopáticas, Porphyromonas gingivalis y
Aggregatibacter actinomycetemcomitans
, también se han demostrado in vitro
[ ,,,0],3].
Antes de que el estudio piloto en voluntarios sanos, los efectos antimicrobianos de TFDa en Streptococcus oralis (S. oralis), Francia una de las típicas bacteria anaerobia facultativa en la placa dental humana, y el efecto citotóxico de TFDa en fibroblastos, se examinaron in vitro
. Además, la caracterización de ROS generados durante el tratamiento TFDa se investigó por resonancia de spin electrónico (ESR): perfil Métodos
Experimento 1. Evaluación in vitro Red de efectos bactericidas de TFDa de Streptococcus oralis
Preparación de la suspensión bacteriana planctónica
S. oralis
OMZ 607 se mantuvo en placas de agar sangre (E-MP23; Eiken Chemical Co. Ltd., Tochigi, Japón) a 37 ° C en condiciones aerobias. Un asa de siembra de cada cepa se inoculó en 9 ml de infusión de cerebro y corazón caldo (BHI), y se cultivó anaeróbicamente a 37 ° C durante 16 h. Posteriormente, a 500 l de la suspensión de células bacterianas se transfirieron en 5 ml de caldo BHI fresco, y se incubaron adicionalmente anaeróbicamente a 37 ° C durante aproximadamente 5 h. Por último, una suspensión bacteriana de 10 8 células /ml se preparó utilizando una cámara de recuento, y almacenadas en hielo hasta su uso.
Fotosensibilizante y fuente de luz
Azul de toluidina O en polvo (TBO) (absorción máxima = 626 nm, Sigma, St. Louis, MO) se disolvió en concentraciones de 100, 500, y 1000 mg /ml en solución salina estéril. Un rojo prototipo de dispositivo de alta potencia (elementos activos = AlInGaP, longitud de onda = 600-700 nm, longitud de onda máxima = 660 nm, la densidad de potencia LED = 1,1 W /cm 2, el tamaño del punto = 9 mm en el extremo del dispositivo; modificada de PenCure ™ con una banda de 660 nm LED de color rojo oscuro [LZ1-00R205; LedEngin, Inc., Santa Clara, CA]. de J Morita Mfg Kioto, Japón) se utilizó como fuente de luz. El tiempo de irradiación de LED se fijó en 20 s, de acuerdo con los resultados de nuestro anterior vitro
estudio en [3], lo que demuestra la eliminación bacteriana eficaz usando el procedimiento TFDa mediada por TBO con 20 s de irradiación.
Fotosensibilización Lethal
una alícuota de 30-l de suspensión bacteriana se mezcló con solución salina o un volumen igual de solución de TBO a las diversas concentraciones (100, 500, y 1000 g /ml) en los pocillos de una placa de fondo plano estéril de 96 pocillos (Falcon, Becton Dickinson Co., Nueva Jersey). Las concentraciones finales de TBO en la solución mezclada fueron de 50, 250, y 500 g /ml, respectivamente. Después de la incubación a temperatura ambiente durante 20 s, la irradiación LED se realizó durante 20 s. El extremo emisor de luz (diámetro = 8 mm) del LED se coloca en correspondencia con la abertura del pozo (diámetro = 7 mm) durante la irradiación. La distancia entre la superficie superior de la suspensión bacteriana mezclada y el extremo emisor de luz fue de 7 mm, y la profundidad de la solución mixta fue de 3 mm. La potencia real en la superficie suspensión bacteriana fue 310 mW, y la densidad de potencia se calculó en 0,94 W /cm 2 (energía total 6,2 J para 20-s irradiación). Cada suspensión bacteriana fue expuesto de forma individual a la irradiación del LED después de la preparación de la suspensión en cada pocillo. Un total de 7 grupos experimentales y un grupo control sin tratar fueron preparados para cada uno así (exposición a 100, la irradiación a 500, 1000 g /ml TBO, combinación de TBO y 20 s LED, y 20 s de irradiación única LED).
Después del tratamiento, una alícuota de 10 l de cada pocillo se diluyó en serie 10 2-10 5 veces con solución salina y 10 l de las muestras diluidas se sembraron por triplicado en placas de agar sangre. Todos los procedimientos que incluyen preparación de la solución, la irradiación, y las muestras de chapado se realizaron para cada bien individualmente (es decir, uno por uno). Las placas de 96 pocillos se incubaron aeróbicamente a 37 ° C durante 48 h, y se determinaron los números de unidades formadoras de colonias (UFC). El experimento se repitió cinco veces de forma independiente
Experimento 2. TFDa efecto citotóxico de los fibroblastos en cultivo celular
línea celular de fibroblastos de ratón L929 (Riken, Saitama, Japón) se cultivó en 75 cm 3 de tejidos frascos de cultivo en 20 ml de medio RPMI 1640 (Nacalai Tesque, Kyoto, Japón) que contiene 100 U /ml de penicilina, 100 U /ml de estreptomicina, y suplementado con 2,5 mmol /l de L-glutamina y suero de ternera fetal inactivado por calor al 5% (Gibco ®) célula de tratamiento
1 × 10 4 células fueron sembradas en cada pocillo de placas de 96 pocillos negras de ensayo (parte inferior plana clara;. Costar®; Corning, NY), y se incubaron a 37 ° C en un incubador humidificado con 5% de CO 2 para 48 h hasta que la monocapa de células se hizo confluente.
para los grupos experimentales, después de la eliminación del medio, TBO 100-l (100, 500, o 1.000 mg /ml) se añadió a cada pocillo. Las células se incubaron durante 20 s, y después la solución TBO se aspiró de todos los pocillos. Después las células se lavaron dos veces con 100 l de PBS, se añadió medio de 100 l al pozo, y de inmediato la célula se expone a la luz LED de la parte superior de la placa a 0,94 W /cm 2 durante 20 s ( energía total = 6,2 J). Los controles se dejaron sin tratar o tratados con TBO (100, 500, y 1000 mg /ml) solamente, y se lavaron dos veces con PBS.
El grupo de las células tratadas con 1,000 g TBO /ml y el LED se comparó con una grupo de células tratadas con 2,5 a 3% H 2O 2 (Oxydol; Yoshida Pharmaceutical Co. Ltd., Saitama, Japón), o cloruro de benzalconio 0,025% (OSVAN®; Nihon Pharmaceutical Co. Ltd., Tokyo , Japón), que son los antisépticos estándar para la mucosa oral. Las células se expusieron a H 2O 2 y cloruro de benzalconio durante 20 s, y se lavaron dos veces con PBS. Todos los experimentos se realizaron por triplicado y se repitieron cinco veces. Ensayo de citotoxicidad
un ensayo colorimétrico que contiene el compuesto de tetrazolio 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) 2H-tetrazolio, sal interna; MTS (CellTiter 96® Aqueous One Solution Ensayo de proliferación celular; Promega, WI), se utilizó para determinar la viabilidad celular [21]. Sobre se añadieron 100-l alícuotas de medio de crecimiento y 20 l de reactivo MTS a cada pocillo. Después de la incubación durante 2 horas a 37 ° C en un 5% de CO 2 incubadora, la absorbancia de cada pocillo se midió a 490 nm usando un lector de microplaca, y se calculó la viabilidad celular
Experimento 3:. Análisis de ROSs generado durante TFDa
espectroscopía ESR se utilizó para la evaluación cualitativa y cuantitativa de ROS generado durante TFDa. La trampa de giro reactivos 2,2,6,6-tetrametil-4-piperidinol (4-OH-TEMP; 98% de pureza; Sigma), y 5,5-dimetil-1-pirrolina-N-óxido
(DMPO dojin; Chemicals, Kumamoto, Japón) fueron utilizados para la detección de oxígeno singlete y radicales hidroxilo, respectivamente. Se utilizó una mezcla de 800-l de PBS, 100-l 1,000 g /ml TBO, y 100-l 4-OH-TEMP para medir el oxígeno singlete. se usó una mezcla de 400-l de PBS, DMPO 50-l 50 mM, y 50-l de 1,000 g /ml TBO para medir radicales hidroxilo. Las mediciones se obtuvieron después de la transferencia de las mezclas a una cubeta de cuarzo plana y la exposición a la luz LED de color rojo durante 20 s. La medición se realizó a través de ESR (JES-RE 3X, JEOL, Tokio, Japón) conectado a un WIN-RAD ESR Analizador de datos (Investigación Radical, Tokio, Japón) a los siguientes ajustes del instrumento: microondas potencia = 8 mW, el campo magnético = 335,8 mT, modulación de ancho = 0.079 mT, tiempo de barrido = 1 min, y la constante de tiempo = 0.03 s. Todos los experimentos se realizaron por triplicado a temperatura ambiente
Experimento 4:. TFDa efecto de inhibición de la formación de la placa dental
un ensayo simple ciego aleatorizado abierto clínica con diseño de boca dividida (cada sujeto recibió tratamientos de prueba y control, cada uno a un lado separado de la boca) se realizó para investigar el efecto inhibidor de TFDa en la formación de la placa dental (Figura 1). Figura 1 Diagrama de flujo Consort del ensayo clínico de la eficacia de TFDa para la inhibición de la placa dental. Los sujetos
Este ensayo clínico fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Odontología de Tokio Universidad de Medicina y Odontología (TMDU) (Nº 836), y se realizó de conformidad con la Declaración de Helsinki. Este ensayo se ha registrado en el Hospital Universitario de la Red de Información Médica Registros de Ensayos Clínicos (número UMIN000012504) y se llevó a cabo siguiendo las guías CONSORT para ensayos clínicos archivo adicional 1. El reclutamiento de sujetos y experimento se llevó a cabo a partir de enero 2013 a febrero 2013 en el Departamento de Periodoncia , hospital Dental de TMDU.
Once dentistas voluntarios fueron reclutados para este estudio, y se obtuvo el consentimiento de todos los participantes. Los sujetos incluidos siete hombres y cuatro mujeres, con edades entre 26-33 años (media = 28,0 ± 2,3 años). Los criterios de inclusión para la inscripción sujetos incluidos buen estado de salud, sin ingesta de antibióticos en los últimos tres meses, la presencia de al menos 20 dientes, la erupción normal de todos los premolares inferiores, la ausencia de inflamación o enrojecimiento de la encía, y la ausencia de sitios con la profundidad de sondaje ≥ 4 mm
. cálculo del tamaño muestral Francia El tamaño de la muestra se calculó utilizando una potencia del 80%, error tipo I del 5%, y una diferencia asumida de 10% y SD de 10% con los valores de la zona de deposición de la placa. Sobre la base de estos datos, se calculó el número de sujetos necesarios para llevar a cabo este estudio como 10. Sin embargo, teniendo en cuenta la posibilidad de tener un tema de deserción, se planeó la inscripción de 11 participantes. México La TFDa procedimiento
se evaluaron los primeros y segundos premolares en los lados izquierdo y derecho de la mandíbula. La selección de los dientes se basa en la ubicación, y la idoneidad para la irradiación del LED, fotografiar, y la recogida de muestras, así como la placa de acumulación dado las condiciones del estudio. El ensayo clínico se llevó a cabo durante cuatro días, comenzando y terminando en la noche (Figura 1). En el primer día, la placa dental depositada en las superficies bucal y lingual de los premolares inferiores de ambos lados se tiñó de color rojo con una solución indicadoras de placa (PROSPEC®; GC, Tokio, Japón). A continuación, la placa supra y sub-gingival se eliminó a fondo por una limpieza dental profesional (PTC) utilizando un escalador ultrasónico, así como una copa de goma y un cepillo de forma de cono montado en una pieza de mano micromotor.
Posteriormente, la derecha o premolares lado izquierdo fueron asignados al azar para el tratamiento (con TFDa) o como controles no tratados (sin TFDa) utilizando el método del sobre, en el que los participantes seleccionados al azar un sobre opaco que contiene una nota la asignación de la banda de tratamiento (derecha o izquierda). TBO (1 mg /ml) se aplicó suavemente a las superficies bucal y lingual de los dientes grupo de prueba utilizando una pequeña bolita de algodón. Después de 10 s, TBO fue arrastrada por el enjuague de la boca. Después del lavado, LED se centró en un ángulo de 90 ° en cada superficie bucal y lingual de cada diente durante 20 s, lo que resulta en un tiempo de irradiación total de 80 s sobre las cuatro superficies de dos premolares en cada sesión de tratamiento (Figura 2). En total, se aplicó TFDa seis veces (dos veces al día, una por la mañana y otra por la tarde) a los dientes grupo de prueba durante cuatro días. Durante el período de prueba, los participantes se les prohíbe a cepillarse los premolares y los dientes adyacentes, y el uso de enjuague bucal. En el cuarto día, el estudio concluyó y se realizaron análisis. Figura 2 fotografías que muestran el procedimiento clínico TFDa. (A) Antes de TFDa. (B) Después de la eliminación inicial de la placa dental (antes de la primera procedimiento TFDa). (C) Durante la aplicación de TBO. (D) Después de la aplicación de TBO y la boca enjuague. (E) Durante la irradiación LED. (F) Después de la irradiación LED.
Determinación de la zona de la placa dental deposición
Después de que las superficies de los dientes se tiñeron con una solución de placa de revelar, la bucal y lingual de los primeros y segundos premolares en el tratamiento y control grupos fueron fotografiados en un ángulo de 90 ° a la superficie del diente. Las fotografías fueron tomadas lingual con un espejo diseñado especialmente para mandibular lingual fotografía (ST fotográfico Espejo para lingual 13262, YDM Corp., Tokio, Japón). El área de color rojo-manchada de la deposición de la placa dental, así como el área de toda la superficie de los dientes en los lados bucal y lingual, se determinó en las fotografías utilizando un programa de software (Photoshop CS5 Extended, Adobe Systems Inc., CA). Para reducir la variabilidad entre observadores, la determinación de las zonas de forma independiente para cada sitio por dos examinadores ciego a los grupos experimentales (A. A. y Y. T.), y el promedio de las dos mediciones se utilizó como el valor de área representativa de cada sitio. Se calculó el porcentaje de la zona de deposición de la placa respecto a la superficie total del diente.
Determinación del número de bacterias en la placa dental recogidos de la superficie lingual de los segundos premolares
la superficie lingual de los segundos premolares fue seleccionado como el sitio representativo para la recogida de la placa, ya que la superficie lingual por lo general tiene la acumulación de placa más constante que la superficie bucal, y el segundo premolar tiene una superficie lingual más grande que la primera premolar. muestras de placa supragingival se recogieron con una cureta Gracey de la superficie lingual del segundo premolar antes del tratamiento (línea de base), y 4 días después de la finalización del ensayo clínico por examinadores ciego (A. A. Y. o T). Se midió el número de bacterias usando un contador bacteriana disponibles en el lado de la silla (aparato de detección de las bacterias orales rápido; Panasonic Healthcare, Tokio, Japón) que era adecuado para contar rápidamente un gran número de bacterias. El dispositivo contador emplea el método de medición de la impedancia dielectroforética, que se ha informado para demostrar una buena correlación con el método de cultivo convencional [24]. El análisis estadístico
de datos desde el primer experimento se evaluaron mediante análisis de varianza (ANOVA) , seguido por el test de Dunnett. La influencia de TBO y la irradiación LED en los fibroblastos se analizó utilizando dos vías ANOVA, seguido por el test de Tukey. La comparación de la aplicación combinada de 1,000 g /ml TBO y la irradiación LED con los dos antisépticos conocidos se realizó con ANOVA, mientras que la cantidad de ROS generado durante TFDa se analizó utilizando un t-test
. Los datos de la cuarta experimento se analizaron mediante un emparejado t-test
. Todos los análisis se realizaron utilizando el programa de software estadístico JMP 8.0 (SAS Institute, Cary, NC), con la excepción de la de dos vías ANOVA factorial, que se realizó por PASW 18.0 (SPSS, IBM, Tokio, Japón). Un P Hotel & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo para todos los análisis
Resultados
Experimento 1. Bactericida efecto de TFDa en S. oralis in vitro
en los grupos tratados con LED o TBO solo, el número de UFC no difieren de los de los controles no tratados. A la inversa, los grupos que recibieron TBO + LED exhiben número de UFC que eran significativamente inferiores a 500 y 1.000 g /ml (P
& lt; 0,01 y P
& lt; 0,05, respectivamente), en comparación con el control. Se observó el menor número de CFU en el grupo tratado con 500 mg /ml TBO + LED (reducción de 1,42 log, la tasa de matar a 96,2%, la Figura 3). En la figura 3 los efectos de reducción de bacterias in vitro de TFDa con TBO y LED en S. oralis. Las barras azules muestran el efecto de TBO solamente, y barras rojas presentan el efecto de TBO con irradiación LED. Los datos representan la media ± desviación estándar (n = 5)
Experimento 2. TFDa efecto citotóxico de los fibroblastos en
TBO solo causó una disminución dependiente de la dosis en la viabilidad celular. De dos vías ANOVA reveló que el LED, TBO, y TBO + LED reducen significativamente la viabilidad celular (P Hotel & lt; 0,01). Además, la aplicación de LED para todas las concentraciones de TBO mejorada la reducción de la viabilidad celular (Figura 4A). Sin embargo, la viabilidad de las células tratadas con 1,000 g /ml TBO y la irradiación LED no fue significativamente diferente de la viabilidad de las células tratadas con 2,5 a 3% H 2O 2 o 0,025% de cloruro de benzalconio (Figura 4B). Figura 4 efectos citotóxicos de TFDa sobre los fibroblastos. (A) El efecto de la concentración TBO sobre la viabilidad celular. (B) Comparación de la viabilidad celular entre TFDa y antisépticos estándar. Los datos representan la media ± desviación estándar (n = 5)
Experimento 3:. El análisis de ROS generados durante TFDa
No existieron diferencias significativas en la producción de oxígeno singlete entre el PBS + LED y el TBO + grupos de LED (Figura 5A). Sin embargo, en comparación con el control, la producción de radical hidroxilo fue significativamente mayor en el grupo de LEDs TBO + (P
& lt; 0,01, Figura 5B). El aducto de espín DMPO-OH específico, lo que demuestra la producción de radical hidroxilo, se observó en el grupo de LEDs TBO + (Figura 6). Figura 5 ROSs detectado durante el procedimiento TFDa mediada por TBO. (A) singlete de oxígeno. (B) El radical hidroxilo.
Figura 6 típico espectro ESR durante el procedimiento TFDa mediada por TBO.
Experimento 4: Efecto de la inhibición de la TFDa sobre la formación de la placa dental
No se observaron complicaciones sistémicas o locales después de la aplicación TFDa durante el período experimental. La tinción con azul residual en la encía después de la aplicación de TBO no era visible macroscópicamente, y sólo se observó inmediatamente después de la aplicación. La tinción fue tanto mínima y temporal, y no causó problemas estéticos de los sujetos. México La formación de placa en los dientes grupo TFDa obviamente fue inhibida tras el cuarto día de TFDa, que era evidente en las fotografías intraorales representativos (Figura 7). Los porcentajes de áreas deposición de la placa a bucal total (Figura 8A) y lingual de los dientes (Figura 8B) se redujeron significativamente en el grupo TFDa (bucal = 14 ± 9,1% y lingual = 12 ± 5,4%, media ± SD, respectivamente), en comparación con el grupo de control (bucal = 25 ± 13% y lingual = 21 ± 7,0%, respectivamente; P
& lt; 0,01). Figura 7 Resultados de un ensayo clínico de la eficacia de TFDa para la inhibición de la placa dental. Las fotografías de los premolares mandibulares de tema # 6 después TFDa. Bucal (A) o lingual (C) la superficie de los dientes de grupo APDT, y bucal (B) o lingual (D) la superficie de los dientes de control.
Figura 8 La relación del área de la placa-depositado a la superficie total de bucal ( a) y lingual de los dientes (B) en la superficie de los premolares mandibulares.
No se detectaron diferencias significativas en la línea base entre el grupo TFDa (6,17 ± 0,38 log) y el grupo control (6,29 ± 0,39 log; P = 0,49
) en el número total de bacterias en la placa dental recoge de la superficie lingual del segundo premolar. Sin embargo, el número total de bacterias en la placa dental fue significativamente inferior después de 4 días el ensayo clínico en el grupo de TFDa (6,17 ± 0,49 log) en comparación con el grupo control (6,68 ± 0,48 log; P
& lt; 0,01; figura 9). Figura 9 El número de bacterias en la placa dental recogido de la segunda premolar. Discusión
Para nuestro conocimiento, este es el primer ensayo clínico para demostrar la eficacia de TFDa en la inhibición de la formación de la placa dental en los dientes sin inducir efectos perjudiciales para los tejidos del huésped. Además, este estudio confirmó que TBO con LED rojo reduce eficazmente las bacterias S. oralis,
que se conoce como un colonizador inicial en la formación de placa dental, y se detecta a menudo en la sangre de pacientes que sufren de endocarditis infecciosa [25, 26]. El uso de TBO con un dispositivo LED de alta potencia y un 20 s tiempo de irradiación, condujo a una reducción significativa dependiente de la dosis en las UFC in vitro
. Sin embargo, la reducción fue menor cuando se utilizó 1000 TBO g /ml (concentración final de 500 mg /ml) que cuando se aplicó 500 g /ml (concentración final de 250 mg /ml). Una posible explicación es el hecho de que el /ml TBO solución bacteriana mixta de color azul 1,000 g fue demasiado oscuro para la luz roja para penetrar a través de la solución a la parte inferior de la placa de 96 pocillos, y de este modo la sensibilización de TBO mediante irradiación LED fue potencialmente bloqueado. No obstante, 1000 TBO g /ml se utilizó porque en situaciones clínicas, la dilución inmediata de TBO con saliva y su propagación superficial en la superficie del diente podría conducir a la sensibilización de luz más eficiente de TBO de testigo in vitro
. En el presente estudio, la atención se centró sólo en S. oralis
; Sin embargo, la formación de biofilm dental está compuesto por diferentes colonizadores primarios y las interacciones inter-microbianas complejas. Por lo tanto, varias otras bacterias formadoras de placas incluyendo Actinomyces viscosus
y Streptococcus sanguis
deben ser investigadas en estudios futuros. Vaya con respecto a la seguridad del procedimiento, TBO influenciada negativamente por sí solo la viabilidad de los fibroblastos en una concentración- de manera dependiente, y la aplicación de LED mejorado el efecto. Sin embargo, la reducción in vitro
de la viabilidad celular en las condiciones actuales APDT (1000 TBO g /ml con 20 s LED irradiación) no superó la observada con otros antisépticos, lo que indica que la citotoxicidad de TFDa estaba dentro de los niveles convencionales . Además, aunque los informes anteriores han indicado la resistencia de las bacterias a los antisépticos, tales como cloruro de benzalconio, que es un tensioactivo catiónico de amonio cuaternario que interrumpe la membrana lipídica de las células [27, 28], la falta de resistencia de las bacterias después de la aplicación de TFDa sería otro beneficiarse de la aplicación clínica [29]. En el presente estudio, sin embargo, sólo se observó citotoxicidad aguda a las 2 horas después de una sola aplicación de TFDa, y requiere por lo tanto más estudios para investigar la influencia a largo plazo de TFDa sobre la proliferación celular, así como la acción acumulativa después de aplicaciones repetidas. comentario el análisis de ROS generado durante mediada por TBO TFDa resultó en la novela hallazgo de que el radical hidroxilo era el producto primario. Aunque el mecanismo de TFDa [30] generalmente se piensa que llevará a cabo por una de tipo I proceso, lo que produce un radical hidroxilo por transferencia de electrones, o un proceso de tipo II, que produce oxígeno singlete mediante transferencia de energía, sin modalidad de la muerte celular por TBO mediada TFDa se ha aclarado. El oxígeno singlete es considerado como la principal especie perjudiciales en TFDa [31], y el azul de metileno fotosensibilizador común es un productor conocido de oxígeno singlete. En nuestro estudio piloto previo (datos no mostrados), que confirmó la producción de oxígeno singlete en TFDa azul de metileno mediada. Sin embargo, el análisis ESR reveló claramente que el radical hidroxilo fue el producto predominante de TFDa mediada por TBO. Además, las máquinas de tipo I se especuló que desempeñar un papel importante en este procedimiento TFDa.
Tras los resultados de los experimentos in vitro
, se intentó la aplicación clínica de TFDa para la inhibición de la formación de la placa dental, y se observó una supresión significativa de la deposición de la placa en los dientes tratados con TFDa. La duración aproximada de cuatro días del ensayo clínico fue corta, y por lo tanto una mayor duración era deseable. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
