Resumen Antecedentes
Con el fin de predecir el pronóstico a largo plazo y definir las modalidades de tratamiento individuales para los pacientes con carcinoma oral de células escamosas (COCE), se necesitan biomarcadores tumorales sean más fiables durante el período de tratamiento previo estudio diagnóstico. El presente estudio tuvo como objetivo identificar marcadores de pronóstico de tumores inmunohistoquímico más fiables en las muestras de biopsia pretratamiento de los pacientes con COCE.
Métodos
Se seleccionaron 57 pacientes que fueron diagnosticados con COCE primaria a través del análisis histopatológico. las muestras de biopsia pretratamiento se analizaron mediante inmunohistoquímica para el factor de transcripción NANOG, madre del cáncer CD44 marcador de células, y la proteína tumoral mutante 53 (p53 mutante). Los patrones de inmunotinción fueron evaluados por su asociación con las características clínico-patológicas de CCCA y las tasas de supervivencia global.
Resultados
estadio tumoral tardío, el cuello metástasis en los ganglios positivos, y la diferenciación de alto grado se asociaron con tasas de supervivencia significativamente más pobres. mayor expresión de NANOG y la positividad de p53 mutante se asociaron significativamente con tumores clínicamente la fase tardía, positivo metástasis en los ganglios del cuello, histológicamente tumores de alto grado, y tasas de supervivencia general pobres. OSCCs con una fuerte co-detección de NANOG y p53 mutante estaban vinculados a las tasas de supervivencia significativamente más bajos que los que tienen tanto la expresión de NANOG débil y negatividad p53. El aumento de expresión de CD44 tenía una correlación limitada con las características clínico-patológicas desfavorables.
Conclusión
alta expresión de NANOG y la expresión positiva de p53 mutante en las muestras de biopsia pretratamiento de los pacientes con COCE fueron asociadas con bajas tasas de supervivencia y las características clinicopatológicas desfavorables. Estos resultados demuestran que NANOG, p53 mutante, y CD44 podrían ser utilizados como marcadores inmunohistoquímicos en las muestras de pretratamiento de CCCA. En particular, se debe hacer el análisis de alta disponibilidad para la co-expresión de NANOG y p53 mutante como una herramienta para el pronóstico y la selección de las modalidades de tratamiento individuales.
Palabras clave
Oral Los marcadores de tumores de carcinoma de células escamosas La inmunohistoquímica de p53 mutante NANOG Antecedentes
el carcinoma oral de células escamosas (COCE) es un tumor maligno común de la región de cabeza y cuello; Sin embargo, los pacientes con COCE tienen una tasa de supervivencia a 5 años inferior al 50%. Los sistemas de estadificación TNM y clasificación histopatológica tradicionales no permiten a los médicos predecir con exactitud la agresividad o seleccione modalidades de tratamiento de un tumor en una base individual [1]. Por lo tanto, la investigación ha estado en marcha para investigar marcadores de pronóstico tumorales sean más eficaces y definitivas para casos de CEI [2, 3]. A medida que el cáncer de células madre (CSC) hipótesis se ha convertido en una de las teorías predominantes que explican la capacidad iniciadoras del tumor y la heterogeneidad de las células tumorales, marcadores de células distintas madre han sido estudiados para determinar su correlación con las características del tumor clínico-patológicos y pronóstico a largo plazo [4 -8]. México la transcripción temprana factores de NANOG, Oct4, Sox2 y, que desempeñan un papel fundamental en el mantenimiento de la pluripotencia y capacidad de auto-renovación tanto en las células madre embrionarias y adultas, también han sido reportados como factores clave en la regulación Los CCC de carcinoma de cabeza y cuello de células escamosas (HNSCC) [7, 8]. Alta expresión de NANOG y Oct4 se ha correlacionado positivamente con carcinomas de alto grado histológicamente y clínicamente mal pronóstico [7-10]. CD44 fue el primer marcador de CSC se describe en un tumor maligno sólido [5], y una alta frecuencia de células CD44 positivas en HNSCC fuertemente se correlaciona con la recurrencia y la agresividad del tumor [11]. proteína Tumor 53 (p53) se considera un biomarcador tumor tradicional en el carcinoma de células escamosas (SCC); sin embargo, su utilidad como indicador de pronóstico sigue siendo poco clara [1]. proteína p53 de tipo salvaje es apenas detectable en los tejidos normales debido a su corta vida media de aproximadamente 20 min. [12] Sin embargo, el gen supresor p53 tumor está mutado en aproximadamente el 40-60% de los casos CCCA, y esto p53 mutante juega un papel importante en el desarrollo y progresión del tumor [12, 13]. Curiosamente, la proteína p53 mutante es generalmente detectable mediante inmunohistoquímica (IHC) [14, 15].
Con el fin de predecir el pronóstico a largo plazo y definir las modalidades de tratamiento individuales para los pacientes con COCE, biomarcadores tumorales sean más confiables (incluyendo marcadores de pronóstico de inmunohistoquímica) son necesarios durante el período de tratamiento previo estudio diagnóstico. El presente estudio tuvo como objetivo investigar la expresión de diversos marcadores tumorales a través de IHC, incluyendo células madre y los biomarcadores relacionados con el tumor, para identificar marcadores pronósticos más confiables en muestras de biopsia CCCA recogidos antes del tratamiento del cáncer. En el presente estudio, se observó una correlación positiva entre las características clinicopatológicas de OSCCs y los patrones de expresión inmunohistoquímica de NANOG, p53 mutante humano y CD44. Además, las intensidades de inmunotinción de estas proteínas marcadoras (NANOG y p53 mutante) se correlacionaron positivamente con las tasas de supervivencia global de los pacientes con COCE.
Métodos Los pacientes
Entre 2004 y 2014, un total de 92 pacientes eran diagnosticado de CEI en el Departamento de Cirugía Oral y Maxilofacial del hospital de la Universidad Nacional de Gyeongsang (GNUH) basado en el análisis histopatológico de las muestras de biopsia recogidas antes del tratamiento del cáncer. Entre ellos, 57 pacientes con COCE primaria; fueron seleccionados para el presente estudio (con exclusión de los pacientes con cáncer metastásico y recurrentes 36 hombres y 21 mujeres). Los criterios de inclusión fueron pacientes que aceptaron participar en el estudio, completado por lo menos 3 meses de seguimiento después de someterse a una biopsia pretratamiento, y tenía suficiente volumen de tejido en la biopsia pretratamiento para realizar la tinción inmunohistoquímica. Las historias clínicas de los pacientes seleccionados fueron analizados retrospectivamente. El consentimiento informado para el uso de sus muestras de tejido se obtuvo de todos los pacientes, y este estudio fue aprobado por el Comité Ético de Investigación Clínica en GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002). IHC se realizó en las muestras de biopsia pretratamiento de los 57 pacientes, que se obtuvieron de la periferia de la margen del tumor con una longitud mínima de 5 mm y la anchura mínima y la profundidad 2 mm, para analizar la relación entre los patrones de expresión de proteínas y las características tumorales clinicopathological . La duración del seguimiento de los 57 pacientes varió de 3 a 127 meses, con una media de 35,9 meses. Los pacientes fueron evaluados clínicamente de acuerdo con el sistema TNM de clasificación desarrollado por el Comité Conjunto sobre el Cáncer (7
ª edición, 2010) para el estadio del tumor y la metástasis en los ganglios del cuello, y las tasas de supervivencia global también fueron determinados. Las muestras de biopsia se calificaron histopatológicamente, y los tumores se clasificaron así, moderadamente o pobremente diferenciados según la clasificación de la OMS de los tumores [16].
El análisis inmunohistoquímico de las muestras de biopsia
muestras de biopsias fueron fijadas en 10% formalina tamponada neutra durante 24 h, incrustado en un bloque de parafina, cortadas en secciones de 4 micras y montados en portaobjetos de microscopio SuperfrostPlus (Fisher Scientific, Rochester, NY, EE.UU.). Las secciones se mantuvieron a temperatura ambiente durante 12 h. Después de la hidratación, IHC para NANOG, CD44 y p53 mutante se realizó utilizando un sistema automatizado immunostainer (XT referencia, Ventana Medical System Inc., Tucson, AZ, EE.UU.), y la visualización se llevó a cabo utilizando el kit Ultraview DAB (Ventana Medical System Inc. ) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Para la inmunotinción de las tres proteínas marcadoras, hemos utilizado anticuerpos monoclonales de conejo (Abcam ™, Cambridge, UK). Los números de tarificación de dilución y de lote de los anticuerpos primarios se resumen en la Tabla 1. En pocas palabras, las secciones se deparaffinized utilizando la solución EZ Prep; entonces estándar CC1 (tampón pH 8,4 contenía Tris /borato /EDTA) se aplicó para la recuperación de antígeno durante 60 minutos a 100 ° C. Los portaobjetos se incubaron a 37 ° C durante 4 min con un inhibidor de DAB (H 2O 2 3%) para bloquear la actividad peroxidasa endógena. A continuación, los portaobjetos se incubaron con el anticuerpo primario a 37 ° C durante 32 min, seguido de incubación con el anticuerpo secundario (Universal HRP multímero) durante 8 minutos a 37 ° C. Los portaobjetos se trataron con DAB + H 2O 2 sustrato para 8 min seguido de hematoxilina II y el reactivo de azulado a 37 ° C para la contratinción nuclear. Para los controles negativos, se realizó sólo la incubación con el anticuerpo secundario, omitiendo cualquier incubación con un anticuerpo primario, en las secciones de las mismas muestras en las mismas condiciones. Además, los tejidos de la vejiga y carcinoma de piel urinarios de embriones humanos se utilizaron como controles positivos para NANOG, CD44, y p53 mutante, respectivamente, de acuerdo con el fabricante de anticuerpo recommendations.Table 1 Resumen de las características clinicopatológicas de OSCCs y IHC patrones de expresión de NANOG, CD44 y p53 mutante
NANOG
CD44
p53 mutante
total No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. de cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor sitios
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Mejilla
4
0
3
1
2
2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Lengua
9
0
2
7
2
5
2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor etapa
I + II
24
6
4
14
10
página 9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck nodo
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo grado
Bueno
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
El grado de dilución
1: 250
1: 100
1: 200
Fuente (Lote No.)
Abcam ™ (ab109250) guía empresas Abcam ™ (ab51037) guía empresas Abcam ™ (ab32049)
Abreviaturas: FOM
piso de boca, N0
nudo del cuello negativa, N +
nodo positivo cuello, Bueno
bien diferenciado COCE, Mod + Pobre
moderadamente y OSCC
cortes de tejido pobremente diferenciados fueron semi-cuantitativamente analizadas para anticuerpos la deposición de los componentes celulares por dos patólogos que desconocían la información del estudio. Sobre la base de un método previamente reportado con modificación [10], la inmunotinción positiva de NANOG y CD44 fue marcado por la combinación de intensidad (0, tinción negativa; 1, tinción débil; 2, tinción moderada, y 3, fuerte tinción) y el porcentaje células de tinción positiva tumorales en campos de gran aumento (0, 1, negativos; & lt; 25%; 2, 25-50%; 3, 51-75%; y 4, & gt; 75%). La suma de la intensidad de la tinción y el porcentaje de las puntuaciones de células tumorales positivas se calificó como sigue: +++ (fuerte, 6-7); ++ (Moderada, 4-5); + (Débil, 2-3); y - (negativo, 0-1). El patrón de expresión de p53 mutante también se obtuvo utilizando la combinación de intensidad de la tinción y el porcentaje de células tumorales positivas y simplemente calificado como + para el positivo (suma de la puntuación excede 3) y - para el negativo (2 o menos; expresión negativa o débil expresión en menos de 25% de las células), de acuerdo con informes anteriores [10, 17, 18]. Al menos tres campos diferentes con gran aumento (x400) por portaobjetos se analizaron para la inmunotinción intensidad. Un resumen de los resultados de la tinción inmunohistoquímica se puede encontrar en la Tabla 1.
El análisis estadístico y el análisis de supervivencia global
La relación entre las intensidades de expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 en muestras CCCA se evaluó estadísticamente utilizando el chi al cuadrado de prueba. Del mismo modo, la correlación entre los patrones de expresión de proteínas y las características clinicopatológicas de COCE, incluyendo el estadio tumoral, metástasis en los ganglios del cuello, y el grado histológico, también se analizó mediante la prueba de chi-cuadrado. El análisis de supervivencia global se llevó a cabo utilizando el método de Kaplan-Meier, y los datos se compararon mediante una prueba de log-rank para las 57 muestras CCCA. En primer lugar, el análisis de supervivencia global se llevó a cabo en términos de la modalidad de tratamiento, así como características clinicopatológicas tumorales, incluyendo la etapa del tumor, el cuello metástasis en los ganglios, y grado histológico (Fig. 5a-d). En el presente estudio, los pacientes se dividieron de acuerdo con las modalidades de tratamiento en tres grupos: sólo la cirugía (Surg), la cirugía combinada con radioterapia adyuvante (Surg + RT, incluyendo quimiorradioterapia concurrente), y la radioterapia solamente (RT). La mayoría de los pacientes en el grupo de RT se sometieron a radioterapia paliativa porque se negaron a someterse a una cirugía o sus tumores eran inoperables. En segundo lugar, el análisis de supervivencia se realizó en términos de la intensidad de la inmunotinción de NANOG, p53 mutante, y CD44 en las muestras de biopsia pretratamiento (Fig. 5e-h). la supervivencia univariante y multivariante análisis se realizaron utilizando un modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Todos los análisis se realizaron utilizando el software SPSS Statistics IBM (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Los casos fueron censurados en la fecha de la muerte, ya sea del paciente o el último seguimiento. Los resultados se consideraron significativos valores de p Hotel & lt; 0.05, y estas diferencias fueron indicados por un asterisco o diferentes letras.
Resultados
información de los pacientes seleccionados
Un total de 57 pacientes con COCE que consta de 36 hombres y 21 mujeres fueron incluidos en este estudio. La edad osciló 17-90 años (media, 65,4 ± 13,9 años). El sitio de la CCCA en los pacientes incluidos la encía (27 casos), el paladar (10 casos), lengua (9 casos), piso de la boca (7 casos), y la mejilla (4 casos) (Tabla 1). Los pacientes se dividieron de acuerdo con la modalidad de tratamiento como sigue: 15 pacientes en el grupo de Surg, 22 pacientes en el grupo Surg + RT, y 20 pacientes en el grupo RT. El período medio de seguimiento de todos los pacientes fue de 35,9 meses; Mientras tanto, 24 pacientes (19, 4, y 1 paciente en el RT, Surg + RT, y grupos Surg, respectivamente) murieron después de una media de 18,4 meses, y 33 pacientes sobrevivieron durante un seguimiento medio de 48,7 meses. En todos los casos de la cirugía, los márgenes de resección de tumores se establecieron como al menos 2 cm, y el campo de la resección se confirmó que era el uso de biopsia secciones congeladas libres de tumor.
Patrones de expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 en COCE biopsia pretratamiento especímenes
NANOG se detectó principalmente en los núcleos de las células CCCA, pero no se detectó expresión alguna NANOG en el citoplasma de las células cancerosas. p53 mutante se localiza en los núcleos de las células de cáncer, mientras que CD44 se detectó en la membrana celular de las células CCCA (Fig. 1). El número de células positivas y las intensidades de expresión eran por lo general mayor en OSCCs de alto grado (moderada o pobremente diferenciados) que en los tumores de bajo grado (bien diferenciado) (. Las figuras 1 y 2). De las 57 muestras CCCA, la expresión de NANOG era fuerte en 21 especímenes, moderada en 18 muestras, y débil o negativo en 18 especímenes. Se observó una expresión moderada, débil y negativo de CD44 en 28, 21 y 8 muestras CCCA, respectivamente. Además, 34 muestras fueron positivas para p53 mutante, mientras que 23 especímenes fueron negativos (Tabla 1). Higo. 1 tinción inmunohistoquímica de NANOG, p53 mutante, y CD44 en OSCCs. unas secciones seriadas de las muestras CCCA moderadamente diferenciados muestran una expresión moderada de NANOG y CD44, y la expresión positiva de p53 mutante. b En los campos de mayor aumento de secciones en serie, NANOG se detecta principalmente en los núcleos pero también se expresa en el citoplasma de algunas células tumorales. p53 mutante se detectó en los núcleos de las células tumorales, mientras que CD44 se localiza en las membranas de las células cancerosas. Las flechas indican los sitios de co-expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 en OSCCs. Barra de escala = 50 micras
Fig. 2 La inmunotinción de bien (a & amp; b) y (c) pobremente diferenciados OSCCs. En una serie de secciones, la expresión negativa de NANOG, p53 mutante, y CD44 se detecta en una muestra de CCCA bien diferenciado (* indica que el tejido canceroso). b En otro caso de OSCC bien diferenciado, NANOG y p53 mutantes son casi negativa, visto en menos de 25% de células positivas, mientras que CD44 se detecta débilmente en la membrana de células de cáncer (flechas). c En una muestra de CCCA pobremente diferenciado, una mayor expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 se detecta. Las flechas indican la co-localización de las tres proteínas marcadoras. Barra de escala = 50 micras
se observaron relaciones directas entre las intensidades de expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 (Fig. 3a). Los tumores con una fuerte expresión de NANOG también con frecuencia exhiben expresión positiva mutante p53 (p = 0,002
) y la expresión CD44 mejorado (p
& lt; 0,001). De manera similar, los tumores con expresión de p53 mutante positivo visualizan una mayor expresión de CD44 (p
& lt; 0,001) (Fig. 3a). En algunos casos, se detectó la co-expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 en las secciones seriadas de las mismas muestras CCCA, lo que indica que algunas células cancerosas exhiben co-expresión de estas tres proteínas marcadoras. Curiosamente, la co-expresión de las tres proteínas se observó con mayor frecuencia en moderadamente o mal OSCCs diferenciados (Figs. 1b y 2c). Higo. 3 Correlación de los patrones de expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44 y el grado histológico de OSCCs. Los tumores con un aumento de la expresión de NANOG muestran una mayor frecuencia de positividad mutante p53 (p = 0,002
) y la expresión CD44 mejorado (p
& lt; 0,001). Del mismo modo, OSCCs con expresión positiva de p53 mutante muestran una mayor expresión de CD44 (p
& lt; 0,001). b Expresión fuerte o moderada de NANOG está significativamente relacionado con histopatológicamente OSCCs de alto grado (p Restaurant & lt; 0,001); Sin embargo, la expresión débil o negativo de NANOG se correlaciona con el carcinoma bien diferenciado (p = 0,018
). Por otra parte, la expresión de p53 mutante positiva se asoció significativamente con el carcinoma de alto grado (p Hotel & lt; 0,001). Del mismo modo, la expresión de CD44 mayor se asocia con tumores de alto grado, pero no se observó significación estadística (p = 0,058
). Los datos representan el número de casos con expresión positiva de cada proteína, y un asterisco (*) indica diferencias significativas (p
& lt; 0,05). [Abreviaturas: NANOG (++ /+++), la expresión fuerte o moderada de NANOG; NANOG (+/-), la expresión débil o negativo de NANOG; p53 (+), expresión positiva de p53 mutante; p53 (-), la expresión negativa de p53 mutante; CD44 (++), más de una expresión moderada de CD44; CD44 (+), débil expresión de CD44; CD44 (-), la expresión negativa de CD44; Bueno, OSCCs bien diferenciados; Mod + pobre, moderadamente y pobremente diferenciado OSCCs]
Asociación entre las características tumorales clínico-patológicos y los patrones de expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44
Fuerte expresión de NANOG se correlacionó significativamente con OSCCs histológicamente de grado alto (p
& lt; 0,001), mientras que la expresión débil o negativo de NANOG se produjo predominantemente carcinomas en bien diferenciados (p = 0,018
). Del mismo modo, la expresión de p53 mutante positiva se asoció significativamente con carcinomas de alto grado (p Restaurant & lt; 0,001) (Fig. 3b). Los tumores de alto grado mostraron una mayor expresión de CD44, pero este resultado no fue estadísticamente significativa (Fig. 3b). En la evaluación de la relación entre la expresión de la proteína y el estadio tumoral, fuerte y moderada expresión de NANOG mostrado asociaciones directas con tumores en etapa tardía (etapa III y IV; p Restaurant & lt; 0,05), mientras débil expresión de NANOG se asoció directamente con tumores en etapa temprana (etapa I y II; p = 0,018)
(figura 4a.). la expresión de p53 mutante positivo se observa con frecuencia en los tumores en etapa tardía (p = 0,049
). Del mismo modo, el aumento de expresión de CD44 se observó con frecuencia en tumores en etapa tardía, pero la diferencia no fue estadísticamente significativa (Fig. 4a). En el análisis de metástasis en los ganglios del cuello, la expresión débil o negativo de NANOG se relacionó significativamente con metástasis en los ganglios negativos cuello en OSCCs (p = 0,005
) (Fig. 4b). Del mismo modo, la expresión de p53 mutante negativo (p = 0,007
) y débil expresión de CD44 (p = 0,049
) se relacionaron significativamente con una mayor frecuencia de metástasis en los ganglios negativos cuello (Fig. 4b). Higo. 4 Correlación del estadio tumoral o metástasis en los ganglios del cuello y los patrones de inmunotinción de NANOG, p53 mutante, y CD44. una expresión fuerte o moderada de NANOG está directamente asociado con tumores en etapa tardía, mientras que la expresión débil o negativo de NANOG está directamente relacionado con el carcinoma en etapa temprana (p Hotel & lt; 0,05). la expresión positiva de p53 mutante también se asocia significativamente con tumores en etapa tardía (p = 0,039
). De la expresión de CD44 se asocia frecuentemente con tumores en etapa tardía, pero no se observó significación estadística (p Hotel & gt; 0,05). b Los tumores con expresión débil o negativa de NANOG (p
= 0,004), la expresión negativa de p53 mutante (p = 0,006
), y débil expresión de CD44 (p = 0,049
) muestran una frecuencia significativamente mayor de metástasis en los ganglios negativos cuello. Más altos niveles de expresión de las tres proteínas no están asociados con metástasis en los ganglios cuello (p
& gt; 0,05). Los datos representan el número de casos con expresión positiva de cada proteína, y un asterisco (*) indica una diferencia significativa (p
& lt; 0,05). [Abreviaturas: I + II, estadio tumoral I & amp; II; III + IV, el estadio tumoral III & amp; IV; N0, negativo metástasis en los ganglios del cuello; N +, positivo cuello nodo metástasis]
El análisis de supervivencia Francia El análisis de las tasas de supervivencia general de los pacientes en términos de características clínico-patológicas de tumores reveló algunos resultados significativos (Figs. 5a-d). Los pacientes con la fase final del CCCA (estadio III y IV) tuvieron una tasa de supervivencia estadísticamente significativa más baja que aquellos con tumores en etapa temprana (etapa I y II) (p Restaurant & lt; 0,05, la figura 5a.). Los pacientes con OSCC y positivo metástasis en los ganglios cuello muestran una tasa de supervivencia significativamente más pobre que aquellos con metástasis en los ganglios negativos cuello (p
& lt; 0,01, Fig. 5b). Además, los pacientes con estudio histopatológico de alto grado CCCA tenían un peor pronóstico que aquellos con tumores bien diferenciados (p Restaurant & lt; 0,01, la figura 5c.). En términos de la modalidad de tratamiento, el grupo RT mostró una tasa de supervivencia significativamente peor que los grupos Surg y Surg + RT (p
& lt; 0,01, Fig 5d.). Higo. 5 La tasa de supervivencia global de los pacientes CCCA de acuerdo a las características clínico-patológicas de tumores, modalidad de tratamiento, y los patrones de inmunotinción de NANOG, p53 mutante, y CD44. a Los pacientes con tumores en etapa tardía (estadio III y IV; amp) muestran tasas significativamente más bajas de supervivencia (p Restaurant & lt; 0,05). b-d una asociación positiva entre la tasa de supervivencia global de los pacientes CCCA y el grado tumoral histopatológico, metástasis en los ganglios del cuello, y se observa modalidad de tratamiento. El grupo bien diferenciado COCE, un grupo de ganglios del cuello negativo y muestra colectiva tratamiento quirúrgico significativamente mejores tasas de supervivencia a largo plazo que los grupos opuestos correspondientes (p Restaurant & lt; 0,01). e Aumento de expresión de NANOG se asocia con una tasa de supervivencia de los pobres; en particular, los pacientes con expresión fuerte o moderada de NANOG muestran significativamente menores tasas de supervivencia que aquellos con la expresión de NANOG débil o negativa (p
& lt; 0,01). f Los pacientes con p53 mutante (+) - tumores que expresan muestran una tasa de supervivencia menor que aquellos con tumores negativos para p53 mutante (-) (p Hotel & lt; 0,01). g expresión CD44 mejorada tiende a correlacionarse con tasas de supervivencia pobres, pero no se encontró una significación estadística (p
& gt; 0,05). h OSCCs con la co-expresión de NANOG mejorada y p53 mutante [NANOG (++) /p53 (+)] se correlaciona con una supervivencia global significativamente menor que aquellos con NANOG débil y negatividad p53 [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p = 0,014
). En particular, no hubo muertes en los 12 casos de NANOG (+/-) /p53 (-) durante el período de seguimiento. Las diferentes letras indican diferencias estadísticamente significativas entre los grupos (p Restaurant & lt; 0,05)
Por otra parte, el análisis de supervivencia en función de los patrones de inmunotinción de NANOG, p53 mutante, y CD44 reveló diferencias estadísticamente significativas (figuras 5e-h.). La intensidad de la expresión de NANOG se asocia directamente con la tasa de supervivencia global; pacientes con tumores sólidos que expresan NANOG [NANOG (+++)] tenían índices de supervivencia que aquellos con tumores que expresan NANOG débiles o negativos [NANOG (+/-)] (p
. & lt; 0,01, figura 5e) . Del mismo modo, se observó una asociación positiva entre la expresión de p53 mutante y la tasa de supervivencia global; específicamente, los pacientes con OSCC p53-positivos tenían menores tasas de supervivencia que aquellos con p53-negativos OSCC (p
. & lt; 0,01, Fig 5f). expresión CD44 mejorada se asoció con tasas de supervivencia pobres, pero este resultado no fue estadísticamente significativa (p
& gt; 0,05, Fig 5 g.). Curiosamente, los pacientes con co-expresión de NANOG mejorado (expresión moderada o fuerte) y p53 positividad [NANOG (++) /p53 (+)] tenían tasas de supervivencia significativamente más corta que los pacientes con NANOG débil y la expresión de p53 negativa [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, Fig 5h).. De importancia, entre los 28 pacientes con NANOG (++) /p53 (+) tumores, 17 pacientes murieron, mientras que no hubo muertes en los 12 pacientes con NANOG (+/-) /p53 (-) lesiones durante el seguimiento hasta período (Fig. 5h). Univariado de Cox análisis de regresión de riesgos proporcionales reveló que metástasis en los ganglios del cuello, histológicamente tumor de alto grado, y la etapa tardía del tumor se asociaron con un pronóstico significativamente peor. Por otra parte, una mayor expresión de NANOG y p53 mutante, especialmente co-detección de estas dos proteínas, en las muestras de biopsia pretratamiento CCCA se asoció directamente con menores tasas de supervivencia (Tabla 2). Del mismo modo, el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox multivariado que ilustra metástasis en los ganglios del cuello, el grado histológico, y el patrón de expresión inmunohistoquímica de NANOG estaban directamente relacionados con la tasa de supervivencia global de los pacientes con COCE (Tabla 3) .Tabla 2 univariante de Cox análisis de regresión de riesgos proporcionales de relación con la supervivencia global de los 57 pacientes CCCA
la supervivencia global
variable
P
valor
cociente de riesgos
95% CI nodo
cuello
& lt; 0,001 * 6,795
2,745 a 16,817
El grado histológico
0,003 *
12.271
2,336 a 64,465
tumor stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0,028 * 0,741
0,217-2,531
Abreviatura: CI
intervalo de confianza del
* Estadísticamente significativo ( p Hotel & lt; 0,05) sobre Table 3 multivariante de Cox análisis de regresión de riesgos proporcionales en relación con la supervivencia global de los 57 pacientes CCCA
la supervivencia global
variable
P
valor
cociente de riesgos
95% Cl
cuello nodo
0,004 *
6.549
1,800 a 23,822
grado histológico
0,012 *
3.598
1,330-9,937
tumor stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0.180
1.195
1. 713-5,754
Abreviatura: CI
intervalo de confianza del
* Estadísticamente significativa (p Hotel & lt; 0,05) Discusión
Desde la aparición de la hipótesis de que CSC una teoría clave para explicar la progresión del cáncer, los patrones de expresión de varios marcadores de células madre pluripotentes y factores de transcripción se han estudiado en varios tejidos de cáncer o líneas celulares para determinar su correlación con el pronóstico a largo plazo. En el presente estudio, la NANOG principios de factor de transcripción, el CD44 marcador de CSC, y p53 mutante humano se investigaron inmunohistoquímicamente en las muestras de biopsia pretratamiento de 57 pacientes con OSCC para identificar cualquier relación de sus patrones de expresión con las características tumorales clinicopatológicas y pronóstico del paciente. Los resultados de este estudio demostraron que los patrones de expresión inmunohistoquímica de NANOG y p53 mutante se asociaron directamente con tasas de supervivencia global, así como características clínico-patológicas, incluyendo el estadio tumoral, metástasis en los ganglios del cuello, y el grado histológico. Los pacientes con COCE cuyos tumores tenían una mayor expresión de NANOG y p53 mutante tenía características clinicopatológicas menos favorables y menores tasas de supervivencia. mayor expresión de CD44 también se asoció con un mal pronóstico y menores tasas de supervivencia, pero no se observó significación estadística. Recientemente, una modalidad común para predecir el pronóstico del cáncer ha sido la medición de intra-tumor heterogeneidad genética [19, 20]. La heterogeneidad indica que los tumores se componen de múltiples subpoblaciones clonales de células diferentes características, y por lo tanto, el examen histológico revela con frecuencia diferencias en la morfología celular y las propiedades, entre células en la misma muestra del cáncer [20]. heterogeneidad intra-tumoral mejorada se correlaciona directamente con el aumento de la mortalidad; en particular, la alta heterogeneidad y positividad mutación de p53 se asociaron con mayores tasas de mortalidad en un gran estudio de cohorte de cáncer de cabeza y cuello [19]. En el presente estudio, las secciones seriadas de las muestras de tumor con frecuencia revelaron la co-expresión de NANOG, p53 mutante, y CD44, que se asoció con peor pronóstico. El co-detección de estas diferentes proteínas marcadoras en la misma célula de cáncer o tumor misma región puede representar heterogeneidad tumoral alta.
NANOG es un factor de transcripción temprana y marcador pluripotente que mantiene la auto-renovación de células madre embrionarias y mesenquimales [8 ]. Estudios recientes revelaron que NANOG es muy detectada en carcinomas pobremente diferenciados y tumores en etapa tardía [8-10]. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
