Resumen Antecedentes
Los pacientes con diabetes mellitus tipo 2 (DM2) se han incrementado gravedad de la periodontitis. Toll-like receptor (TLR) 4, sus co-receptores CD14 y MD-2, y MyD88 adaptadores jugar un papel fundamental en el lipopolisacárido (LPS) -Accionados inflamación de los tejidos y la periodontitis. Este estudio investigó los efectos de la diabetes tipo 2 y la periodontitis en TLR4, CD14, MD-2 y la expresión de ARNm de MyD88 en los tejidos periodontales extirpados quirúrgicamente.
Métodos
muestras de tejidos periodontales se obtuvieron de 14 pacientes sin periodontitis y la diabetes tipo 2 (Grupo 1) , 15 pacientes con periodontitis solo (grupo 2), y 7 pacientes con tanto periodontitis y DMT2 (Grupo 3). El mRNA de TLR4, CD14, MD-2 y MyD88 se cuantificó mediante PCR en tiempo real y se compara entre los grupos.
Resultados
El análisis estadístico mostró que la expresión de CD14 periodontal ARNm se redujo significativamente en todos los Grupos 1, 2 y 3 (p = 0,02
), mientras que la expresión de mRNA de TLR4, MD-2 y MyD88 no fue significativamente diferente entre los grupos. Además, cuando los pacientes en los Grupos 1 y 2 se combinaron (n = 22), la expresión CD14 mRNA fue significativamente menor que en los pacientes del Grupo 1 (p
= 0,04).
Conclusiones
expresión CD14 mRNA fue downregulated en todos los pacientes con periodontitis ni tampoco DM2, los pacientes con periodontitis solos y los pacientes con ambas enfermedades, lo que sugiere que la expresión de CD14 mRNA se asocia con una respuesta del huésped favorable o sometida a una regulación por retroalimentación negativa.
Palabras clave
periodontitis CD14 TLR4 Diabetes la expresión de genes de fondo
bacterias Gram-negativas son los principales agentes patógenos que participan en la periodontitis, que se caracteriza por la destrucción del tejido inflamatorio de las estructuras de soporte del diente [1]. Los estudios han establecido que anfitrión respuesta inmune inflamatoria a Gram-negativas lipopolisacárido de bacterias derivadas (LPS) juega un papel fundamental en la iniciación y progresión de la periodontitis [2]. Como un gran avance en la investigación periodontal, Beutler y sus colaboradores descubrieron en 1998 que los receptores tipo Toll (TLR) 4 es receptor de LPS y media LPS-desencadenó la transducción de señales [3]. LPS-desencadenó la activación TLR4 conduce a un aumento de la secreción de citocinas proinflamatorias, mediadores y metaloproteinasas de la matriz (MMPs) a partir de una variedad de células incluyendo monocitos, macrófagos, neutrófilos, linfocitos y fibroblastos gingivales que contribuyen a la destrucción periodontal inflamación y el tejido [4]. Además de TLR4, los estudios han documentado bien que TLR4 co-receptores CD14 y MD-2, así como proteínas adaptadoras TLR4 tales como gen de respuesta mieloide diferenciación primaria 88 (MyD88) también están involucrados vital en LPS-activan la señalización inflamatoria [5-8 ].
ha sido bien establecido que la periodontitis es más frecuente y grave en pacientes con mal control de la diabetes mellitus tipo 2 (DM2) que los individuos no diabéticos [9-11]. Los resultados de los estudios mecanísticos indican que la diabetes tipo 2 mal controlada conduce a una respuesta del huésped a hiperinflamatoria microbiota periodontal y también deteriora resolución de la inflamación y la reparación, lo que lleva a la destrucción periodontal acelerada [10]. En línea con estas nociones, el aumento de expresión periodontal de interleuquina (IL) -6 y MMP-8 en todos los pacientes con periodontitis ni tampoco DM2, los pacientes con periodontitis solos y los pacientes con ambas enfermedades se informó por nuestro grupo [12-14]. Además, también hemos demostrado a través de nuestros vitro
estudios en que la glucosa alta potencia la expresión LPS-triggered de genes proinflamatorios en macrófagos y fibroblastos gingivales [15-19], lo que indica que los factores asociados-DM2 como la hiperglucemia mejoran la inflamación y el tejido periodontal destrucción y por lo tanto exacerbar periodontitis.
en los estudios para comprender cómo DM2 aumenta la capacidad de respuesta de acogida a LPS, se ha demostrado que la diabetes tipo 2 aumenta la expresión de TLR4 en células huésped tales como monocitos [20, 21]. Dado que TLR4 es el receptor de LPS, es plausible que la regulación positiva de la expresión de TLR4 en la superficie celular hace más sitios de unión para LPS y por lo tanto aumenta la respuesta celular a la exposición a LPS. Por lo tanto, es importante para determinar si DM2 aumenta la capacidad de respuesta de acogida a LPS mediante la mejora de la expresión de proteínas asociadas a TLR4 TLR4 y en el tejido periodontal. Sin embargo, el efecto de la DMT2 en la expresión de TLR4 periodontal y las proteínas TLR4-asociado en pacientes con periodontitis no ha sido bien establecida.
En este estudio, la hipótesis de que las moléculas tales como CD14, MD la expresión de TLR4 o TLR4-asociado -2 y MyD88 están regulados por la periodontitis y la diabetes tipo 2. Para probar nuestra hipótesis, se recogieron los tejidos periodontales de pacientes con o sin periodontitis y DMT2 en el momento de cirugías necesarias y se determinó la expresión de mRNA de TLR4, CD14, MD-2 y MyD88 usando la reacción cuantitativa en cadena de polimerasa en tiempo real (PCR). Métodos
los pacientes fueron seleccionados
Treinta y seis pacientes de una población referido al Programa de Periodoncia post-doctoral en la Facultad de Medicina Dental de la Universidad de Medicina de Carolina del Sur, Charleston, Carolina del Sur. Los pacientes reclutados incluyeron 14 individuos que no tenían periodontitis y la diabetes tipo 2 (grupo 1), 15 pacientes con periodontitis solamente (grupo 2), y 7 pacientes con ambas enfermedades (grupo 3). Los pacientes del grupo 1 que requirieron cirugías relacionadas con la enfermedad no periodontales, como alargamiento de la corona y extracciones sirvieron como controles. Todos los tejidos recogidos fueron tejidos periodontales tomadas como collares desde el margen gingival para incluir tanto el epitelio y el tejido conectivo
Los pacientes del grupo 2 y el grupo 3 se reunió con los siguientes criterios de diagnóstico para la periodontitis [12-14]:. Una profundidad de sondaje periodontal (PD) de ≥ 5 mm en dos o más dientes, o el nivel de inserción clínica (aL) de ≥ 5 mm en dos o más dientes. Los criterios de exclusión fueron los siguientes: Los pacientes que estaban embarazadas o no está seguro sobre el embarazo, la creatinina sérica ≥ 1,6 mg /dl, función hepática anormal, hemoglobinopatía (rasgo de células falciformes /anemia hemolítica) que interfieren con la hemoglobina A1c monitoreo (HbA1c), la periodontitis agresiva, plaquetaria y trastornos de la coagulación, y /o falta de voluntad para firmar el formulario de consentimiento informado o entrar en el estudio. Se llevó a cabo un examen oral incluyendo PD periodontal y AL clínica. Seis sitios (mesio-bucales, bucales, disto-bucal, distolingual, lingual y mesio-lingual) fueron examinados para cada diente, con exclusión de los terceros molares. profundidad de sondaje se define como la distancia desde el margen gingival libre a la parte inferior del surco, mientras que la recesión gingival se definió como la distancia desde la unión cemento-esmalte para el margen gingival libre. AL clínica se calcula como la suma de la DP y la recesión gingival. Los pacientes de los grupos 2 y 3 se sometieron a cirugía periodontal para el tratamiento de la periodontitis y su tejido periodontal, incluyendo epitelio y tejido conectivo, fueron retirados de los sitios sobre la base de la mayor PD y /o AL. El PD y AL reportados en este estudio estaban relacionados con los sitios de cirugía. La prueba de HbA1c se realizó en todos los pacientes para documentar su estado glucémico. DM2 fue diagnosticado previamente para todos los pacientes en el grupo 3. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado para la recogida de muestras. Las formas de protocolo y el consentimiento de estudio fueron aprobados por la Universidad de Medicina de la Junta de Revisión Institucional de Carolina del Sur (Número de autorización: Pro00010000).
Aislamiento de ARN y ARN de transcripción inversa (RT)
ARN total fue aislado de las muestras de tejidos periodontales utilizando el minikit RNeasy (Qiagen, Santa Clarita, CA). El ADN complementario de primera hebra (ADNc) se sintetizó con el kit de síntesis de ADNc iScript ™ (Bio-Rad, Hercules, CA) siguiendo las instrucciones proporcionadas por el fabricante. La reacción se cicla durante 5 min a 25 ° C, 30 min a 42 ° C y 5 min a 85 ° C utilizando un motor de ADN PTC-200 (MJ Research, Waltham, MA).
Cuantitativa en tiempo real PCR
La mezcla de reacción V a partir de los experimentos anteriores se sometió a amplificación por PCR en tiempo real. Se utilizó el software Beacon Designer (PREMIER Biosoft International, Palo Alto, CA) para el diseño de cebadores (Tabla 1). Los cebadores fueron sintetizados por Integrated DNA Technologies, Inc. (Coralville, IA). PCR se llevó a cabo por duplicado, utilizando una mezcla de reacción de 25 l que contenía 1,5 l mezcla de reacción RT, 0,2 M de ambos cebadores y 12,5 l de iQ ™ SYBR Green Supermix (Bio-Rad). La reacción de PCR se realizó con el Sistema de Detección en Tiempo Real iCycler ™ (Bio-Rad). se llevaron a cabo cuarenta ciclos que consisten en desnaturalización (95 ° C durante 10 s) y recocido /extensión (56 ° C durante 45 s). Se realizó un experimento de fusión curva posteriormente (55 ° C durante 1 min y después la temperatura se incrementa en 0,5 ° C cada 10 s) para detectar los dímeros de cebadores. Los datos se analizaron con el software SmartCycler II. El ciclo umbral medio (Ct
) de unidades fluorescentes se utilizó para el análisis. La cuantificación se calcula utilizando el Ct
de la señal objetivo con respecto al de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) de la señal en los mismos ARN sample.Table 1 Las secuencias de los cebadores para PCR a tiempo real
Genes
de búsqueda: 'secuencia del cebador
3' 5 cartilla sequence
CD14
CCGCTGCCTCTGGAAG
GGCGAGTGTGCTTGGG
TLR4
GTCCTCAGTGTGCTTGTAG
ATCCTGGCTTGAGTAGATAAC
MD-2
CACCATGAATCTTCCAAAGC
CTTGAAGGAGAATGATATTGTTG
MyD88
CGGATGGTGGTGGTTGTCTC
CGCTTCTGATGGGCACCT
GAPDH
CTGAGTACGTCGTGGAGTC
AAATGAGCCCCAGCCTTC
El análisis estadístico
La edad, el género y la raza de los participantes del estudio se presentan como recuentos y las variables continuas se presentan como medianas. El software GraphPad Instat 3 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) se utilizó para el análisis estadístico. No paramétrico de análisis de las pruebas de las posibles diferencias en las variables continuas entre los grupos de más de dos se llevaron a cabo mediante el procedimiento de Kruskal-Wallis. las pruebas de análisis no paramétrico para cualquier diferencia en las variables entre los dos grupos se realizó mediante el procedimiento de Mann-Whitney. Un valor de p Hotel & lt; 0,05 fue considerado significativo. El análisis de correlación sobre la relación entre la expresión de CD14 mRNA y PD, AL o HbA1c se evaluó por el método de Pearson. Nuestros estudios previos han indicado que el tamaño de la muestra de 7 o superior proporcionado suficiente poder para detectar la diferencia de expresión de ARNm periodontal de la IL-6 y MMP-8 en todos los individuos de control que no tenían periodontitis y la diabetes tipo 2, los pacientes con periodontitis solos y en pacientes con tanto la periodontitis y la diabetes [13, 14].
resultados
población de estudio
Los datos clínicos para la edad del paciente, el sexo, la raza, el tabaquismo, la HbA1c, PD periodontal, y AL se presenta en la Tabla 2.Table 2 pacientes y la enfermedad periodontal en tres grupos
Grupo 1: pacientes sin diabetes y la periodontitis
Grupo 2: pacientes con periodontitis solos
la Grupo 3: Los pacientes con ambos periodontitis y la diabetes
paciente número 14
15
7
Edad
58 ± 11
56 ± 11 63 ±
6
género (hombre /mujer) guía empresas 11/3
10 /5
7/0
raza y la etnia
caucásicos /afroamericanos (No Hispanos)
6.0 (12/2) guía empresas 2.8 (11/4) guía empresas 0,17 (1/6) *
condición de fumar (fumadores /no fumadores )
0,4 (4/10) +
1,5 (9/6)
2,5 (5/2)
HbA1c (% )
5,81 ± 0,55 5,60 ±
0,56
8,19 ± 1,24 *
PD (mm) 2,45 ±
0,86 +
4,20 ± 2,00 4,80 ±
2,32
AL (mm)
2,48 ± 0,89 + 5,03
± 2,48 5,24 ±
2,39
Los datos son la media ± SD. * P Hotel & lt; 0,05 vs grupo 1 o grupo 2; + P Hotel & lt; 0,05 frente al grupo 2 o grupo 3. PD
profundidad de sondaje, nivel de inserción AL
Edad - Las edades de los sujetos en los grupos 1, 2 y 3 oscilaron entre 42 y a 79, 40 a 79, y 52 a 71 con un ± desviación estándar media de 58 ± 11, 56 ± 11 y 63 ± 6, respectivamente. No se encontraron diferencias significativas entre los grupos
Género -. Las relaciones de género masculino /femenino en los grupos 1, 2 y 3 fueron 3,7 (11/3), 2 (10/5), y 7 (7/0) , respectivamente. No se encontraron diferencias significativas entre los grupos
Race -. Las proporciones de los caucásicos frente a los afroamericanos en los grupos 1, 2 y 3 fueron 6,0 (12/2), 2.8 (11/4), y y 0,17 (1 /6), respectivamente. El análisis estadístico indicó que los afroamericanos en el grupo 3 fueron significativamente más que los del grupo 1 o grupo 2, lo cual es consistente con los informes anteriores de que los afroamericanos tienen un alto riesgo de desarrollar diabetes tipo 2 y la periodontitis [22, 23].
fumar status - Las relaciones de fumador /no fumaban de los grupos 1, 2 y 3 fueron 0,4 (4/10), 1,5 (9/6), y 2,5 (5/2), respectivamente. El análisis estadístico indicó que los fumadores en los grupos 2 y 3 fueron significativamente más que los del grupo 1, lo cual es consistente con los informes anteriores de que el tabaquismo se asocia con un alto riesgo de periodontitis [24] La periodontitis
-. El PD en grupos 1, 2 y 3 fue de 2,45 ± 0,86, 4,20 ± 2,00 y 4,80 ± 2,32 mm, respectivamente. El AL en los grupos 1, 2 y 3 fue de 2.48 ± 0.89, 5.03 ± 2.48 y 5.24 ± 2.39 mm, respectivamente. Se encontró una diferencia significativa de la EP y AL entre el grupo 1 y el grupo 2 o grupo 3, pero no hubo diferencia significativa de la EP y AL se encontró entre los grupos 2 y 3.
Diabetes - Todos los pacientes del grupo 3 reportaron tener diabetes tipo 2. La HbA1c media en los Grupos 3 varió de 7,0% a 10,7% con una media ± desviación estándar de 8,19 ± 1,24% que es significativamente mayor que 5,81 ± 0,55% y 5,60 ± 0,56%, respectivamente, en el Grupo 1 y el Grupo 2. Cuatro de los siete pacientes se les prescribió la metformina sola o en combinación con Glucotrol (glipizida, Pfizer) o insulina NPH (Humulin, Eli Lily and Company). Uno de los pacientes fue de insulina prescrita glargina (Lantus, Sanofi-Aventis) a la insulina, un paciente se le prescribió aspart (NovoLog, Novo Nordisk), y un paciente no informó de tomar cualquier medicamento para la diabetes.
Expresión de CD14 periodontal, TLR4, MD -2 y MyD88 en tres grupos en La expresión de CD14, TLR4, MD-2, y MyD88 en los tejidos periodontales extirpados quirúrgicamente con éxito se cuantificarán mediante PCR en tiempo real. Como se muestra en la Tabla 3, la expresión de CD14 fue más alta entre cuatro genes en pacientes sin periodontitis y DMT2 (Grupo 1). Nuestro análisis estadístico mediante el test no paramétrico de Kruskal-Wallis mostró que la expresión de TLR4 periodontal, MD-2 y MyD88 no tenía ninguna diferencia significativa entre los 3 grupos. Curiosamente, se encontró que la expresión de CD14 ser downregulated significativamente a través de los Grupos 1, 2 y 3 (p = 0,020
). También comparó la expresión de CD14 entre los dos grupos. Los resultados mostraron que aunque la expresión CD14 en el Grupo 2 (pacientes con periodontitis solo) es más baja que en el Grupo 1 (pacientes sin periodontitis ambos y DM2), la diferencia no es estadísticamente significativa. Sin embargo, cuando los pacientes del Grupo 2 se combinaron con el Grupo 3 (pacientes con ambos periodontitis y DM2), la expresión de CD14 fue significativamente menor que en el Grupo 1 (p = 0,04
) (Tabla 4). Además, hemos encontrado que la expresión de CD14 en el Grupo 3 es significativamente más bajo que en el Grupo 1 (p = 0,003
), lo que indica que la expresión de CD14 periodontal en pacientes con ambas periodontitis y DMT2 es significativamente menor que en los pacientes sin periodontitis y DM2 .table 3 de expresión de CD14 periodontal, TLR4, MD-2 y MyD88 en tres grupos
Grupo 1 (n = 14
) guía empresas Grupo 2 (n = 15
)
Grupo 3 (n = 7
)
análisis no paramétricos (prueba de Kruskal-Wallis) para cualquier diferencia en los grupos
Online Sin ambos periodontitis y la diabetes
Con la periodontitis, que no tienen diabetes
Con ambos periodontitis y la diabetes
estadístico de prueba
P
-value
CD14
1.92
1.39
0.68
7.81
0.02
(0.78, 11.88) gratis (0.30, 17.80) gratis (0,17, 1,66)
TLR4
0,74
0,58
0,74
0,97
0,62
(0,28, 5,25) gratis (0.15, 18.31) guía empresas (0,14, 1,25)
MD-2
0,46
0,35
0,50
1.49
0,48
(0,21, 2,96) gratis (0,04, 5,76) gratis (0,19, 1,66)
MyD88
0,81
0,61
0,71
3,32
0,19
(0,50, 1,21)
gratis (0,22, 2,19) gratis (0,45, 1,01)
datos presentados son medianas (mínimo, máximo) guía Tabla 4 La diferencia de la expresión de CD14 entre los pacientes en Grupo 1 y combinados pacientes del Grupo 2 y Grupo 3
Grupo 1 (pacientes sin periodontitis)
combinación del grupo 2 (pacientes con periodontitis solo) y Grupo 3 (pacientes con ambos periodontitis y la diabetes ) guía empresas de dos colas
P
valor
paciente número 14
22
0,04
La mediana (mínimo, máximo)
1,92 (0,78, 11,88)
1,22 (0,17, 17,80)
Tarjetas telefónicas Los datos presentados son medianas (mínimo, máximo)
La relación entre la expresión de CD14 mRNA y PD, AL o HbA1c comentario El relación entre la expresión de CD14 mRNA y PD, AL o HbA1c fueron analizados estadísticamente y correlaciones significativas fueron encontrados entre la expresión de CD14 mRNA y estos parámetros clínicos (Tabla 5) .table 5 La relación entre la expresión de CD14 mRNA y PD, AL o HbA1c
PD
AL
HbA1c
CD14 mRNA expression
n
36
36
36
r
-0.1271
-0.1862
-0.1967
p
0,4602
0,2770 0,2500
PD
profundidad de sondaje, nivel de inserción AL
discusión
Nuestro estudio demostró que el nivel de ARNm de CD14 se redujo significativamente en los pacientes con periodontitis ni tampoco DM2, los pacientes con periodontitis solo, y los pacientes con DM2 y ambos periodontitis, lo que sugiere que la periodontitis y la diabetes tipo 2 regula negativamente la expresión del gen CD14 en el tejido periodontal. Nuestros resultados son consistentes con los de Jin et al., Que informaron de que el nivel de la proteína CD14 en los tejidos de biopsia gingival de pacientes con periodontitis fue significativamente menor que la de los sujetos sin periodontitis [25]. También informaron que el nivel de CD14 secretada en el fluido crevicular gingival (GCF) fue menor en los pacientes con bolsillos más profundos que en los pacientes con mucho dinero menos [26]. Desde sus estudios se centran en el nivel de proteína CD14 en el tejido periodontal, no queda claro si la disminución del nivel de la proteína CD14 es el resultado de la regulación a la baja de la expresión de CD14 mRNA que pueden sugerir la participación de la regulación transcripcional de la expresión de CD14. Nuestro estudio ha proporcionado la nueva información sobre los mecanismos implicados en la regulación de la expresión de CD14.
En el presente estudio, hemos empleado en tiempo real técnica de PCR para cuantificar el nivel de expresión de mRNA de TLR4, CD14, MD-2 y MyD88 en el tejido periodontal. Es bien sabido que la regulación de la expresión de citoquinas en el ARNm a través del factor nuclear kappa B (NFkB) mediada por la activación transcripcional desempeña un papel crucial en la periodontitis [27]. Por lo tanto, los estudios que investigan la expresión de genes en los niveles de mRNA son importantes para la comprensión de los mecanismos moleculares implicados en la patogénesis de la periodontitis. Además, puesto PCR en tiempo real es un método totalmente cuantitativa y bien controlada por la normalización para la limpieza de genes, los datos son valiosos para la evaluación de la expresión génica. Además de PCR en tiempo real cuantificación de la expresión génica a nivel de ARNm, inmunohistoquímica e inmunofluorescencia también se emplean comúnmente en los estudios de la expresión génica a nivel de proteína. Si bien estos métodos tienen ventajas en la caracterización de tejido o expresión de genes específicos de células a nivel de proteínas, también tienen desventajas como un enfoque semi-cuantitativa [28] que puede conducir a la variabilidad inter-estudio. Por ejemplo, mediante el uso de inmunohistoquímica, un estudio mostró que disminuyeron periodontitis TLR4 [29], pero otro estudio demostraron que periodontitis mayor nivel TLR4 en el epitelio gingival [30].
CD14 se caracterizó como receptor LPS en 1990 [31], casi una década antes del descubrimiento de TLR4. Mientras TLR4 tiene un dominio transmembrana para la transducción de señal desencadenada por LPS, CD14 carece del dominio transmembrana y es incapaz de transmitir la señalización de LPS. CD14 está anclada con glicosilfosfatidilinositol (GPI) en la superficie celular y se expresa como una glicoproteína de 55 kDa [32]. Además de la forma unida a membrana (mCD14), CD14 se expresa también como una forma soluble (sCD14) por la secreción de CD14 sin acoplamiento al anclaje de GPI o derramamiento o escisión de mCD14 [33]. La función principal de CD14 es servir como un receptor inicial de LPS y facilitar la unión de LPS a TLR4 /MD-2 complejo [34]. Además, CD14 también reconoce otros patrones moleculares asociados a patógenos tales como el ácido lipoteicoico [35].
Estudios previos han demostrado que CD14 tiene un papel doble en respuesta a las bacterias Gram-negativas [36]. Para ejemplos, un estudio mostró que la neutralización de CD14 impedido inducida por LPS respuesta proinflamatoria no controlada y la posterior muerte de acogida [37], que revela un efecto proinflamatorio de CD14. Otro estudio, sin embargo, reportó que cuando CD14 fue bloqueado, los animales infectados con Shigella, un patógeno diarreicas, exhibieron un incremento de 50 veces en la invasión bacteriana y la lesión del tejido más grave en comparación con los animales sin CD14 de bloqueo [38], lo que indica un anti-inflamatorio efecto de CD14. Estos estudios sugieren que, si bien la regulación negativa de la expresión de CD14 periodontal reduce el efecto estimulador de LPS sobre la señalización proinflamatoria, sino que también puede afectar a la inmunidad innata contra los patógenos LPS-independientes y por lo tanto aumenta la inflamación del tejido.
Estudios previos han demostrado también la doble función de CD14 en DM2. Por un lado, se informó de que la expresión de CD14 se asoció significativamente con DM2 y se correlacionó con las concentraciones séricas de proteína C reactiva [39]; Por otra parte, se informó de que la inyección de CD14 soluble humana recombinante a ratones diabéticos aumentó acción de la insulina [40] y los ratones con CD14-deficiencia muestra significativa intolerancia a la glucosa [41], lo que sugiere un papel beneficioso de CD14 en la señalización de insulina y glucosa homeostatsis. Francia El hallazgo de que CD14 se downregulated en pacientes con periodontitis también puede revelar un mecanismo de retroalimentación negativa por la que el tejido periodontal de los pacientes con periodontitis prevenir más daños por ataques repetidos por LPS de bacterias derivadas. Curiosamente, Nemoto et al. informaron que la expresión de CD14 en los fibroblastos gingivales humanos (HGF) se redujo marcadamente por forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), activado por los leucocitos polimorfonucleares (PMN) en un sistema de cocultivo de HGF y PMNs [42]. Su mayor investigación mostró que, como resultado de la reducción de CD14, LPS inducida por la producción de citoquinas inflamatorias tales como IL-8 por HGF fue suprimida. Estos hallazgos sugieren que, si bien los PMN activados desempeñan un papel crucial en la inflamación del tejido, HGF tienen un potencial mecanismo de retroalimentación negativa para controlar la inflamación mediante la regulación a la baja de la expresión de CD14.
Además de CD14, nuestro estudio también examinó la expresión de TLR4 periodontal, MD-2 y MyD88. Los resultados mostraron que las expresiones de ARNm periodontales de TLR4, MD-2 y MyD88 tenían ninguna diferencia significativa entre los 3 grupos. Si bien nuestro estudio actual es el primero de ellos se centra en la expresión de mRNA TLR4, Promsudthi et al. y Rojo-Botello et al. han reportado el efecto de la diabetes tipo 2 y la periodontitis crónica en la expresión de la proteína TLR4 [29, 30]. Promsudthi et al. mostraron que los pacientes con periodontitis habían reducido proteína TLR4 en el epitelio gingival, pero los pacientes tanto con periodontitis y diabetes tenido porcentajes mayores estadísticamente significativos de células TLR4-positivas en comparación con los sujetos periodontalmente sanos [29]. Rojo-Botello et al. demostrado que los pacientes con periodontitis y diabetes tenían una proteína TLR4 superior en el epitelio gingival que los pacientes con periodontitis solo. Obviamente, estos estudios se centraron en la expresión de proteínas TLR4 periodontal, pero nuestro estudio apuntan a la expresión de mRNA TLR4.
Ha sido bien documentado que la expresión de CD14 es upregulated de LPS y citoquinas inflamatorias in vitro
[43-45] . Sin embargo, los mecanismos implicados en la regulación a la baja de la expresión de CD14 no han sido bien establecida. Además de la inhibición de la expresión de CD14 por los PMN tal como se describe anteriormente, Imai et al. han informado de que factor de crecimiento transformante beta (TGF) 1 es capaz de inhibir la expresión de CD14 estimulada por LPS en macrófagos mediante la reducción de factor de transcripción de la proteína activadora (AP) -1 [46]. Curiosamente, nuestro estudio reciente ha demostrado que la expresión TGFß1 periodontal aumenta en pacientes con periodontitis [47]. Por lo tanto, es probable que TGFß1 juega un papel en la regulación a la baja de la expresión de CD14 periodontal en pacientes con periodontitis. Sin embargo, no queda claro cómo la expresión de CD14 se regulados a la baja aún más por la diabetes tipo 2 y son necesarios para dilucidar los mecanismos por los que la expresión de CD14 periodontal se downregulated de la periodontitis y la diabetes tipo 2 más estudios.
Conclusiones
expresión de CD14 fue downregulated en todos los pacientes con periodontitis ni ni DM2, los pacientes con periodontitis solo, y los pacientes con periodontitis y tanto DM2. Este hallazgo indica que la expresión de CD14 se asocia con una respuesta del huésped favorable o sometida a una regulación por retroalimentación negativa
abreviaciones
TLR:.
Toll like receptor
LPS:
lipopolisacárido
MyD88:
mieloide diferenciación primaria gen de respuesta 88, MD-2, factor de diferenciación mieloide 2
PD:
la profundidad de sondaje
aL:
nivel de inserción
Declaraciones
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por National Instituto de Investigación Dental y Craneofacial (NIDCR) /Institutos nacionales de Salud (NIH) DE016353 subvención y el Departamento de Asuntos de Veteranos, la Administración de Veteranos de la Salud, Oficina de Investigación y Desarrollo, Biomédica Laboratorio de Investigación y Desarrollo conceder 5I01BX000854 (YH).
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de la competencia. intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en competencia contribuciones de los autores
DCH: Dra. Hedgpeth es un periodoncista que reclutó a los pacientes, recogidos tejidos periodontales después de cirugías y los datos clínicos proporcionados. XZ: Xiaoming es un especialista en la investigación que llevó a cabo el análisis de ARN del aislamiento y la expresión génica mediante PCR en tiempo real. JJ: Dr. Jin es un científico del personal que lleva a cabo el análisis de la expresión génica mediante PCR en tiempo real y análisis de datos. RSL: Dr. Leite es un periodoncista que reclutó a los pacientes, recogidos tejidos periodontales después de cirugías, proporcionaron datos clínicos, y contribuyó a la preparación de manuscritos. JWK: Dr. Krayer es un periodoncista que han contribuido a la preparación de manuscritos. YH: Dr. Huang es un investigador principal que supervisa el proyecto incluyendo la obtención de la aprobación ética, diseño experimental, análisis de datos y preparación de manuscritos. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
