intelectual
Resumen Antecedentes
Streptococcus mutans (Streptococcus mutans y S. sobrinus
) son considerados como los principales agentes etiológicos de la caries dental. El uso de un método de reacción en cadena de la polimerasa, se detectó esas bacterias de 145 pacientes ambulatorios (6-30 años) con discapacidad intelectual (DI) y su presencia se comparó con la incidencia de la caries dental.
Métodos
se recogieron muestras de placa de todos los sitios erupción de los dientes en los sujetos con un cepillo de dientes estéril. Un examen dental se realizó para determinar el número de dientes cariados y rellenos (puntuación DFT) en la dentición permanente utilizando la OMS criterios de diagnóstico de caries. Se utilizó una prueba U de Mann-Whitney para comparar las puntuaciones de caries entre las combinaciones de las bacterias, y con una prueba de rangos de Wilcoxon se utiliza para comparar las puntuaciones de caries entre la línea de base y después de 1 año.
Resultados Estar entre todos los sujetos, S. mutans y S. sobrinus
estaban poseídos por el 78,7 y el 83,5%, respectivamente, mientras que el 13,1% fueron positivos para S. mutans
solo, 17,9% para S. sobrinus
solo, y 65.6 % para ambos organismos, con el 3,4% fueron negativos para ambos. La puntuación media de la DFT de los sujetos positivos para S. mutans y S. sobrinus
al cabo de 1 año fue significativamente mayor que la de los positivos para S. mutans
solo (P Hotel & lt; 0,01 ). El aumento en el incremento de caries también fue significativamente mayor en los sujetos con ambas bacterias detectadas (P
& lt; 0,001).
Conclusión
Nuestros resultados indican que los pacientes con el ID albergar ambos S. mutans y S.
sobrinus
tener una incidencia significativamente mayor de la caries dental que aquellos con S. mutans
solos.
Antecedentes
Streptococcus mutans (Streptococcus mutans y S. sobrinus
) se consideran principales agentes etiológicos de la caries dental en los seres humanos [1-3]. Estas bacterias son los patógenos más comunes putativos aislados de la placa dental humana y su prevalencia se ha reportado en estudios epidemiológicos [4-7]. Varios métodos han sido utilizados para la detección de patógenos putativos, incluyendo la microscopía directa, el cultivo, las pruebas de enzimas, los ensayos y específico de la especie sondas de ADN de inmunoabsorción ligados a enzimas. Varios investigadores han desarrollado también la reacción en cadena (PCR) de polimerasa y reportados a ser más sensible para la detección, en comparación con las técnicas de cultivo convencionales [8, 9], ya que han demostrado ser capaces de detectar un número bajo (5-100) de células bacterianas [9, 10], mientras que también son rápidos y relativamente simple de realizar. Por otra parte, los ensayos de PCR se han encontrado adecuados para la detección específica y la identificación de las bacterias cariogénicas humanos, incluyendo S. mutans Opiniones y S. sobrinus
[10, 11]. Hoteles en estudios transversales y longitudinales anteriores, se informó de que los niños en edad preescolar con dentición temporal que alberga tanto
S. mutans y S. sobrinus
tenido una incidencia significativamente mayor de la caries dental que aquellos con S. mutans
sola [6, 12]. Recientemente, también señaló que los escolares que albergan ambas S. mutans y S. sobrinus
tuvieron una mayor experiencia de caries dentales en los dos dientes primarios y permanentes, en comparación con aquellos con S. mutans
sola [13] . Así, la identificación y la determinación de la prevalencia de los patógenos son de importancia fundamental para la comprensión de la iniciación y el desarrollo de las caries dentales, y para determinar mejores formas de tratamiento y prevención. Sin embargo, [16] se han realizado pocos estudios longitudinales de la relación entre estas dos especies y actividades de caries en los niños [12, 14] o las personas con discapacidad intelectual (DI) [15] y el síndrome de Down.
Los individuos con ID que son cuidados en casa por miembros de la familia también pueden sufrir de una mala higiene bucal, ya que se encontraron recuentos bacterianos superiores en los sujetos con el ID en comparación con los que no tienen discapacidad [17]. Los métodos disponibles para tratar y prevenir la caries dental, y mejorar la higiene bucal personas con discapacidad severa son limitadas. Sin embargo, es importante que los médicos eligen de entre las diversas técnicas disponibles para la prevención de la caries dental en sus pacientes con el ID según el riesgo. En el presente estudio, se detectó S. mutans y S. sobrinus
Hoteles en pacientes japoneses con ID utilizando un método de PCR y, a continuación, en comparación con su presencia la incidencia de la caries dental en un período de 1 año.
Métodos
ciento cuarenta y cinco pacientes ambulatorios con el ID (un cociente de inteligencia (IQ) ≤ 70) años de edad de 6 a 30 años, y cada uno con dentición mixta o permanente, que visitó el hospital de la Universidad de Hiroshima, la ciudad de Hiroshima fueron estudiados. Los datos demográficos de los pacientes ambulatorios y los datos que participan en sus estado de discapacidad, IQ, enfermedades sistémicas y la historia de los medicamentos regulares (si los hay) se obtuvieron de los registros médicos. Los sujetos fueron compuestas por 135 con ID y 10 con síndrome de Down, y un total de 106 (73,1%) hombres y 39 (26,9%) mujeres fueron examinadas (Tabla 1). El consentimiento para la participación se obtuvo a partir de al menos uno de sus padres antes de iniciar el estudio conforme a las directrices éticas de la Declaración de Helsinki (1975) y la aprobación ética se obtuvo del Comité Ético de la Universidad de Hiroshima (.-Epidemiología n ° 34). Cada sujeto fue sometido a un examen dental realizado en la Clínica Dental Care especial por un solo dentista bien entrenado (MO) mientras se está sentado en una silla dental en una posición supina, usando la OMS caries criterios diagnósticos para determinar los dientes con caries y rellenos (DFT) índice [18]. Los que habían recibido antibióticos en los 3 meses anteriores o con enfermedades sistémicas fueron excluded.Table población Estudio 1 por edad y sexo
Age
Male
Female
Total
(years)
No.
%
No.
%
6–10
12
92.3
1
7.7
13
11–15
19
86.4
3
13.6
22
16–20
21
77.8
6
22.2
27
21–25
32
69.6
14
30.4
46
26–30
24
64.9
13
35.1
37
La placa dental se recogió de todos estallaron dientes con el cepillo con un cepillo de dientes estéril durante 1 min utilizando un método descrito previamente [19]. Durante el cepillado dental, la placa se adhiere al cepillo de dientes se eliminó lavando varias veces en un tubo de agua destilada estéril. Las muestras de placa en el tubo se transportaron inmediatamente a nuestro laboratorio de investigación y se almacenaron a -20 ° C, antes de la extracción de ADN genómico.
Streptococcus mutans
JCM5175 y S. sobrinus
ATCC27607 se utilizaron como control de especies . la detección por PCR de las especies objetivo se realizó usando los cebadores descritos por Igarashi et al. [8, 10]. Oligonucleótidos fueron diseñados para la dex
secuencia de ADN de S. mutans
(GenBank adhesión no. D49430) y
S. sobrinus (GenBank adhesión no. M96978). Para S. mutans
, el cebador directo, 5 'TAT GCT GCT ATT GGA GGT TC 3', es complementario a la secuencia de 973 a 992, y el cebador invertido, 5 'AAG GTT GAG CAA TTG AAT CG 3', es complementaria a la secuencia de 2225 a 2244. Para S. sobrinus
, el cebador directo, 5 'TGC TAT CTT TCC CTA GCA TG 3', es complementario a la secuencia de 134 a 153, y el cebador invertido, 5 'GGT ATT CGG TTT GAC TGC 3', que es complementaria a la secuencia 1726-1743. Empresas el cebadores para la secuencia de 16S ARN ribosomal eubacterias (número de acceso GenBank M75035) se utilizaron para confirmar la presencia de bacterias en muestras de placa como control positivo [20]. El cebador directo, 5 'TAG CAG GAT ATA CCC TGG TAG TCC ACG C 3', es complementario a la secuencia de 783 a 810, y el cebador invertido, 5 'GAC GGG CGG TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG 3', es complementario a la secuencia de 1378 a 1407. El tamaño del producto de PCR esperado era de 625 pb.
Muestras de placa se sometieron primero a centrifugación a 1600 × g durante 20 min
. A continuación, el sobrenadante se descartó y los sedimentos celulares individuales se almacenaron a -20 ° C hasta que el aislamiento de ADN, para la cual se volvieron a suspender los gránulos en 180 l de tampón de lisis enzimática (20 mM Tris-HCl, pH 8,0; EDTA 2 mM; 1,2% Triton X-100, 20 mg /ml de lisozima). Se obtuvo una preparación de ADN genómico de cada muestra de placa usando un Blood DNeasy® y Tissue Kit (Qiagen, Austin, TX, EE.UU.) para la extracción de ADN de las bacterias Gram-positivas, a la que añade una RNasa tratamiento [21]. las concentraciones de ADN en las muestras de placa dental se determinaron midiendo Un
260, mientras que la calidad se estimó mediante el
A 260 /A 280
relación [22].
polimerasa amplificación por reacción en cadena se realizó en una mezcla de reacción (25 l) que consiste en perlas de PCR (GE Healthcare UK Limited, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) que contenían una enzima (dos unidades de Taq ADN polimerasa
) y la necesaria reactivos, así como 25 pmol de cada cebador, y de 20 a 50 ng de la solución de ADN molde en un ciclador térmico (DNA Engine PTC-220 dyad TM, MJ Research, Hatoboro, PA, EE.UU.). Cada conjunto de PCR análisis incluyeron un control negativo (blanco agua), además de la del control positivo. La mezcla de reacción se desnaturalizó a 95 ° C durante 3 min, seguido de 26 ciclos de desnaturalización a 95 ° C durante 1 min, hibridación a 55 ° C durante 1 min, y extensión a 72 ° C durante 1 min, con un ciclo final de 94 ° C durante 1 min, 55 ° C durante 1 min, y 72 ° C durante 5 min [8]. Después de la amplificación, 15 l de los productos de PCR se analizaron por electroforesis en un gel de agarosa al 1,0% y, después de la tinción con bromuro de etidio, los fragmentos de ADN recién sintetizadas se visualizaron bajo luz ultravioleta a 302 nm. Los tamaños de los productos de PCR se estimaron a partir de la migración electroforética de los productos con respecto a un marcador de escalera 100-base (Amersham Pharmacia Biotech, AB, Uppsala, Suecia). La sensibilidad del método de PCR se puso a prueba mediante el uso de cantidades conocidas de S. mutans purificados
JCM5175 y S. sobrinus
ATCC27607 como plantilla. Diluido en serie de ADN también se utilizó como plantilla, y el límite de detección fue de 1 pg de DNA de S. mutans
(12 células) y 100 fg de ADN plantilla para S. sobrinus
(9 células) (datos no se muestra). de las estadísticas descriptivas y análisis estadísticos se realizaron utilizando un paquete estadístico (SPSS 14.0, Inc., Chicago, IL, EE.UU.). Se empleó una prueba U de Mann-Whitney para comparar las puntuaciones de caries entre los sujetos que poseen las diversas combinaciones de bacterias, y una prueba de rangos de Wilcoxon para comparar las puntuaciones entre la línea de base y el 1 año después de la caries.
Resultados
Tabla 2 muestra la prevalencia de caries en los sujetos con el ID poseer S. mutans
solo o en combinación con S. sobrinus
al inicio del estudio y después de 1 año. S. mutans y S. sobrinus
se encontraron en el 78,7 y el 83,5%, respectivamente, de los sujetos con el ID. Además, el 13,1% fueron positivos para S. mutans
solo, 17,9% para S. sobrinus
solo, y el 65,6% para ambos, mientras que el 3,4% fueron negativos para ambas S. mutans y S. sobrinus
. La puntuación DFT en los positivos para ambos organismos después de 1 año fue significativamente mayor que la de los positivos para S. mutans
solo (P
& lt; 0,01). Además, que la puntuación en sujetos positivos para ambos después de 1 año fue significativamente mayor que en la línea base (P
& lt; 0,001) y el aumento de la puntuación de DFT en los positivos para ambos fue significativamente mayor que en los sujetos positivos para S. mutans
solo (P Hotel & lt; 0,01)
la Tabla 3 muestra los sujetos con experiencia de caries anteriores al inicio del estudio y la caries aumentos incrementales después de 1 año, junto con la combinación de estreptococos mutans detectado.. Diecisiete (89,5%) con S. mutans
solo, y 86 (90,5%) con ambas S. mutans y S. sobrinus
tenido caries experiencias pasadas. Cuatro (21,1%) de los sujetos con S. mutans
solo, 9 (34,6%) con S. sobrinus
solo, y 54 (55,7%) con ambos tenían aumentos en el incremento de caries, mientras que ninguno de los sujetos poseer ni organismo mostró un aumento en incremento. Además, aproximadamente el 60% de los sujetos con ambos tenían un aumento en el incremento de caries durante el período de estudio de 1 año, mientras que aproximadamente el 20% de los pacientes con S. mutans
sola demostró una prevalencia de caries tales increase.Table 2 en pacientes con S. mutans
solo o en combinación con S. sobrinus
al inicio del estudio y después de 1 año
Oraganism presente
media (dE) DFT
Aumento de la DFT
Rango
S. mutans
S. sobrinus
No. de los sujetos (%) guía empresas de referencia
Después de 1 año
Media (DE)
+
- Opiniones de viajeros 19 (13,1)
6,47 (4,64)
6,95 (4,61) *
0,47 (1,22) *
0 -5
Perfil - +
26 (17,9)
5,96 (5,03)
6,42 (5,33)
0,46 (0,71) guía empresas 0-2
+
+
95 (65,6)
8,65 (7,60) †
10,31 (8,13) * †
1,65 (2,04) *
0-9
-
Perfil - 5 (3,4)
0,60 (1,34)
0,60 (1,34)
0.00 (0.00)
0
La significación estadística entre los grupos: * P Hotel & lt; 0,01, Mann-Whitney U-test; † P
. & Lt; 0,001, prueba de rangos de Wilcoxon
de datos para las puntuaciones de DFT se presentan como media (SD) sobre Table 3 pacientes con experiencia previa de caries al inicio del estudio y después de los aumentos graduales 1 año, y la combinación de estreptococos mutans detecta
Organismo presente
caries experiencia anterior del
caries aumento incremental
S. mutans
S. sobrinus
No.
%
No.
%
+
-
17
89.5
4
21.1
-
+
22
84.6
9
34.6
+
+
86
90.5
54
55.7
-
-
1
20.0
0
0.0
El análisis por PCR con cebadores 16S rRNA confirmó la presencia de ADN bacteriano en todas las muestras de placa (datos no mostrados).
Discusión
Las personas con discapacidades intelectuales y cuidados en casa por miembros de la familia a menudo sufren de una mala higiene bucal, como que se ha informado que tienen recuentos bacterianos superiores en comparación con las personas sin discapacidad [17]. Los métodos disponibles para tratar y prevenir la caries dental, y también mejorar la higiene oral para pacientes con discapacidades graves son limitados, aunque es importante que los médicos optan por una técnica adecuada para la prevención de la caries dental basado en el riesgo de su desarrollo en sus pacientes con ID.
Se realizó el presente estudio longitudinal para comparar la presencia de estreptococos mutans con la incidencia de la caries dental en pacientes japoneses con el ID durante un período de 1 año, utilizando un método de PCR. La concentración media de ADN recuperado de cepillado muestras de placa fue de aproximadamente 700 mg /ml, lo que se consideró suficiente para la realización de este estudio basado en la PCR. Para asegurar la presencia de una muestra bacteriana representante en todos los casos y en ausencia de sustancias inhibidoras de la PCR, se realizó un amplio intervalo ensayos de PCR se aplican cebadores basados-rRNA 16S de eubacterias y someter todas las muestras obtenidas por el método de cepillado de los dientes. Esto confirmó la presencia de bacterias y ADN bacteriano en todas las muestras de placa (datos no mostrados). Este método ha demostrado ser un medio más sensibles de detección de microorganismos cariogénicos en comparación con las técnicas de cultivo convencionales [8-11].
Los presentes resultados del estudio indican que la prevalencia de estreptococos mutans en pacientes con ID edad 6-30 años de edad es de 96,6%, lo que está de acuerdo con estudios similares realizados con niños en edad escolar en otras partes del mundo [23-26], mientras que la prevalencia de estreptococos mutans en adultos se ha notificado a ser mayor que el 60% [27] y 82,7% en sujetos con síndrome de Down de edad de 1-48 años de edad [16]. La prevalencia de S. sobrinus
solo en el presente estudio fue mayor que en esos estudios. Sin embargo, esos estudios emplearon métodos de cultivo y los resultados previos han demostrado que la bacitracina agar mitis salivarius-inhibe el crecimiento de S. sobrinus
en un grado mayor que el de S. mutans
[28, 29]. Por lo tanto, los resultados contrastantes pueden haber sido debido al método de aislamiento y detección más sensible utilizado para S. sobrinus
en nuestro estudio, en comparación con las empleadas en el pasado, así como las diferencias en el tipo y la etapa de lesiones de caries en la asignaturas. Sin embargo, puesto que la presente cohorte era limitado, se requieren estudios adicionales.
La puntuación DFT en los positivos para ambos organismos en después de 1 año fue significativamente mayor que la de los positivos para S. mutans
solo. Además, que la puntuación en sujetos positivos para ambos después de 1 año fue significativamente mayor que al inicio del estudio y el incremento de la puntuación de DFT en los positivos para ambos fue significativamente mayor que en los sujetos positivos para S. mutans
solo. El aumento incremental caries para los sujetos que poseen ambos organismos fue de 3,5 veces mayor que para aquellos con S. mutans
solo, lo que indica que los individuos con el ID poseer ambos tienen actividades de caries más altos que los que sólo S. mutans.
En nuestro estudio anterior, el aumento en la puntuación de espesor de película seca para los dientes primarios en los niños en edad preescolar que poseen tanto era cuatro veces mayor que para aquellos que poseen S. mutans
sola [12]. Los presentes resultados de PCR mostraron que los sujetos con el ID que poseen ambos S. mutans y S. sobrinus
tenido un aumento significativamente mayor incremento de la incidencia de caries y en comparación con los que sólo S. mutans Restaurant at después de 1 año, que también está de acuerdo con los resultados de estudios previos de los escolares de 11-12 años de edad [30, 31], así como los estudios de preescolares de 3-5 años [6, 12, 32]. En contraste, no hubo diferencias significativas en la puntuación de la línea de base para DFT entre los sujetos positivos para ambos S. mutans y S. sobrinus
y aquellos con S. mutans
solo, aunque la puntuación DFT de los positivos para tanto
S. mutans y S. sobrinus
mostraron una tendencia a ser más alta que la de aquellos con S. mutans
solos.
Los temas de actualidad estaban siendo tratados como pacientes ambulatorios y se remitieron a partir dental local clínicas debido a su cooperación dental deficiente y ya tenía los dientes cariados sin tratar. Todos los dientes cariados fueron tratados inmediatamente en la Clínica Dental de Cuidados Especiales, por lo tanto, las caries aumento incremental en sujetos positivos con ambos S. mutans y S. sobrinus
fue significativamente mayor que en los pacientes con S. mutans
solos . En estudios anteriores, los sujetos que poseían ambas bacterias tenían aumentos en el incremento de caries durante un período de 1 año [14, 33]. Los resultados de ese estudio anterior sugieren que la prevalencia de S. sobrinus
estaba más estrechamente asociado con la actividad futuras caries, especialmente con un aumento de la caries de superficie lisa de la subasta, que la prevalencia de S. mutans
. Sin embargo, la población de sujetos en el presente estudio se limita, por tanto, se necesitan más estudios. Además, aún no se sabe cómo la colonización mixta aumenta la cariogenicity de bacterias, mientras que se requieren estudios cuantitativos utilizando una PCR en tiempo real cuantitativa para comprender los mecanismos de aumento en el riesgo de caries para futuros estudios.
Diecisiete (89,5%) con S. mutans
solo, y 86 (90,5%) con ambas S. mutans y S. sobrinus
tenido caries experiencias pasadas. Cuatro (21,1%) de los sujetos con S. mutans
solo, 9 (34,6%) con S. sobrinus
solo, y 54 (55,7%) con ambos tenían aumentos en el incremento de caries, mientras que ninguno de los sujetos poseer ni organismo mostró un aumento en incremento. Además, aproximadamente el 60% de los sujetos con ambos tenían un aumento incremental de caries durante el período de estudio de 1 año, mientras que aproximadamente el 20% de los pacientes con S. mutans
solo demostró un aumento de este tipo.
Conclusiones En
conclusión, los resultados del presente estudio longitudinales indican que los individuos con el ID albergar ambos S. mutans y S. sobrinus
tener una incidencia significativamente mayor de caries dentales que los positivos para S. mutans
solo.
declaraciones de
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de la competencia. los intereses
autores declaran que no tienen intereses en competencia.
contribuciones de los autores YO, FH y MO desighned el estudio. MO realiza el examen dental. YO y MO recogieron muestras de placa. YO y FH realizó el ensayo de PCR convencional. YO y MO fueron responsables de análisis de datos. Todos los autores participaron en la elaboración del manuscrito y aprobó la versión final.
