Abstract
Antecedentes
La caries dental se desarrolla como resultado del metabolismo de hidratos de carbono por las bacterias cariogénicas presentes en una biopelícula compleja. El presente estudio tuvo como objetivo examinar si las bacterias en muestras de placa supragingival agrupados evalúa mediante una "hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" de paneles a base de bacterias de caries relacionadas, podría reflejar la experiencia de caries de una manera similar a las muestras de saliva se analizaron utilizando un método del lado de la silla en una investigación previa.
Métodos
un total de 86 madres y sus niños de 4-6 años y 12-16 años de edad participaron. La experiencia de caries (CPO-D /cpod; decaído, dientes perdidos y obturados para los dientes permanentes y primarios) se registró clínica y radiográficamente. La caries se registró en la categoría D
3 nivel (caries en dentina). El componente D /d se dividió en tres categorías. Una muestra de la placa supragingival agrupado por participante se obtuvo de los sitios proximales posteriores. Los análisis de 15 especies bacterianas se realizó mediante la técnica de tablero de ajedrez DNA-DNA hibridación.
: Resultados de la No se encontraron relaciones significativas entre las puntuaciones bacterianas y grupos CPO-D /CPOD ni d /D.
Conclusiones A diferencia de
las muestras de saliva y el método del lado de la silla, interproximales muestras de placa reunida analizaron mediante la "técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" no revelaron relaciones significativas entre los recuentos bacterianos y la experiencia de caries.
Anette Carlén, Campus Guglielmo y Peter Lingström contribuido igualmente a esta labor.
Antecedentes
la caries dental es una enfermedad multifactorial iniciada e influida por una serie de factores clave [1]. Además, la saliva desempeña un papel importante en el mantenimiento de la integridad dientes por tamponar los ácidos producidos por las bacterias cariogénicas y la protección de los dientes contra la caries. La saliva puede influir en la microflora oral mediante la adsorción a la superficie del diente que forma la película adquirida, que determina que los microorganismos son capaces de unir y colonizar [2]. La saliva se ha usado convencionalmente como una herramienta de diagnóstico para determinar la actividad de caries riesgo individual y [3, 4]. Esta evaluación incluye la grabación de la capacidad tampón de la saliva y los recuentos de bacterias cariogénicas principalmente estreptococos mutans y lactobacilos utilizando pruebas del lado de la silla.
Aunque el análisis de saliva puede proporcionar una visión general de la ecología oral, lo que refleja el riesgo de caries, caries dental es principalmente una biopelícula inducida por la enfermedad [5]. Para ver este biofilm (placa dental) como un ecosistema microbiano complejo ha mejorado la comprensión de su papel en el desarrollo y la progresión de la caries [6]. placas cariogénicos se presentan cuando la especie bacteriana acidogenic y acidúricas aumentan después de la exposición de hidratos de carbono de alta frecuencia. El metabolismo microbiano de tales hidratos de carbono dará como resultado la acidificación de la biopelícula, que a su vez puede conducir a la desmineralización inducida por el ácido de los tejidos dentales duros [6]. Una de las técnicas moleculares que han demostrado la composición microbiana diversa de la biopelícula dental es la "técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" [7, 8]. Sin embargo, todavía no se ha propuesto ningún panel de caries específicos. Por tanto, sería interesante utilizar la técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez con la caries panel específico para investigar la relación entre la experiencia de caries individual y los cargos de diferentes bacterias de la placa supragingival caries relacionados. México La presente estudio se llevó a cabo como parte de una serie de estudios sobre las madres de Arabia Saudita y sus hijos. Se encontró que una parte tiene como objetivo describir la experiencia de caries en relación con diversos factores relacionados con la caries y una clara asociación entre el sillón salival recuentos bacterianos y experiencia de caries [9]. Otra parte se diseñó para determinar si las muestras de placa interproximal agrupados analizaron mediante la "técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" podría reflejar la experiencia de caries. México La hipótesis de este estudio transversal es que la caries mayores experiencias se asocian con altos cargos de bacterias relacionadas con caries en la placa supragingival. El objetivo del presente estudio fue, por tanto, para examinar si las bacterias en las muestras de la placa supragingival agrupados cuantificarán mediante un "hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" panel basado de bacterias caries relacionadas, podría reflejar la experiencia de caries en una manera similar a las muestras de saliva se analizaron usando una método del lado de la silla en una investigación previa.
Métodos sujetos
Francia el estudio recibió la aprobación ética por la Facultad de Odontología de la Universidad rey Abdulaziz en Jeddah, Reino de Arabia Saudita. Los registros dentales en los sanitarios y de emergencia Clínicas Dentales en la Facultad de Odontología se escrutaron para identificar candidatos adecuados familia. En el estudio participaron 86 familias voluntarias. De cada familia, la madre (edad media de 37,0 ± 4,5 años) y dos de sus hijos, con edades de 4-6 años de edad (edad media 5,0 ± 0,9 años) y 12-16 años de edad (edad media de 13,0 ± 1,4 años) ofrecido. La información verbal sobre el estudio fue dado a los padres y se obtuvo el consentimiento informado por escrito. Todas las investigaciones se llevaron a cabo por uno de los autores (AM).
Registro caries Francia El estado de la dentición se expresa utilizando el índice CPO-D (dientes cariados, dientes perdidos y obturados) para los dientes permanentes y cpod para los dientes primarios. Se excluyeron los terceros molares. La caries se registró clínica y radiográficamente en la categoría D 3 nivel [10]. Se tomaron radiografías de mordida para cada participante con el fin de registrar la caries proximales. Todas las superficies proximales en la dentición de la superficie mesial de los primeros premolares /molares primarios a la superficie distal de los segundos molares se incluyen /molares primarios.
Muestras de placa bacteriana
placa supragingival agrupado se tomaron muestras de los sitios proximales entre los dientes 16/15, 25/26, 35/36 y 46/45 en las madres y los niños mayores y los dientes 55/54, 64/65, 74/75 y 85/84 en los niños más pequeños que utilizan curetas Gracey estériles. Si uno de los dientes en el sitio proximal faltaba, se utilizó un sitio adyacente. Cada muestra de placa se colocó en un tubo Eppendorf que contiene 150 μ
l de tampón TE estéril (10 mM Tris-HCl, EDTA 1 mM, pH 7,6). A continuación, 100 μ
l de NaOH 0,5 M se añadió al sedimento de la placa y la suspensión bacteriana se almacenó a -20 ° C en espera de procesamiento adicional [11].
Checkerboard hibridación DNA-DNA
El análisis de bacterias especies se realizó utilizando el método de hibridación DNA-DNA de tablero de ajedrez [12]. sondas genómicas enteras se prepararon a partir de las 15 cepas bacterianas que se sabe están relacionados con la caries como se muestra en la Tabla 1. Una evaluación del número de bacterias en las muestras se realizó mediante la comparación de las señales obtenidas con los generados por las muestras estándar combinadas que contienen un recuento de 10 6 y 10 5 de cada especie bacteriana, respectivamente. Las señales fueron codificadas en una escala de 0 a 5 como sigue: 0 = sin señal; 1 = a la densidad de señal más débil que la del bajo nivel (& lt; 10 5 bacterias); 2 = una densidad de señal igual a la del bajo nivel (= 10 5 bacterias); 3 = una densidad de señal superior a la de la baja calidad pero más baja que la del alto nivel (& gt; 10 5 pero & lt; 10 6 bacterias); 4 = una señal de densidad igual a la del alto nivel (= 10 6 bacterias) y 5 = una densidad de señal más alta que la del alto nivel (& gt; 10 6 bacterias). Más detalles acerca de la técnica se encuentran en Mannaa et al. [13]. Todas las evaluaciones se llevaron a cabo por un examinador (AM) .Tabla 1 Las 15 cepas bacterianas caries relacionados utilizados para la preparación de sondas de ADN y más en comparación con los datos clínicos de caries
nomenclatura bacteriana
Descripción Strain & amp; fuente
Streptococcus mutans
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus sobrinus
CCUG-27507
Los no estreptococos mutans
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
lactobacilos
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
OMGs -3182
Actinomyces
Actinomyces Odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
Veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
OMGs-1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
análisis de los datos
Todos los datos fueron analizados utilizando el IBM ® SPSS ® paquete estadístico (SPSS versión 18.0, IBM ®, Chicago, Ill ., ESTADOS UNIDOS). El componente D /d se clasificó en baja: ≤ 1, medio: 2-5 y alta: & gt; 5 para las madres y los niños de más edad, y baja: ≤ 3, media: 4-9 y altas: ≥ 10 para los niños más pequeños. Kappa de Cohen para la determinación de la fiabilidad intra-examinador del registro caries se calculó. La estadística descriptiva, incluyendo las medias y las desviaciones estándar se calcularon por separado para los tres grupos. En cuanto a las puntuaciones de tablero de ajedrez, sólo unos pocos de señal "0" se han registrado datos y por lo tanto combina con datos de la señal "1" en "≤1". Utilizó un modelo lineal se utilizó para comparar las diferencias de medias en la experiencia de caries en relación con las puntuaciones bacterianas. Se utilizó la prueba exacta de Fisher para asociar los grupos /D D con las puntuaciones bacterianas. El nivel de significación estadística se fijó en 5%.
Resultados y discusión
valores kappa de Cohen para el registro de caries para las madres, los niños más pequeños y los niños mayores fueron 0,88, 0,90 y 0,82, respectivamente. La tabla 2 resume los recuentos bacterianos para cada especie. Las experiencias de caries (CPO-D /CPO) de las madres, niños pequeños y mayores se resumen en la Tabla 2 Puntuación 3.Table la distribución de las 15 cepas bacterianas obtenidas por la técnica de tablero de ajedrez de ADN-ADN Hibridación en las madres, de 4 a 6 años -old (C4-6) y de 12 a 16 años de edad (12-16 C) niños
cepas bacterianas
puntajes de tablero de ajedrez
madres
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86 n =
86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. Odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 Estado de dentición (CPO-D /cpod) y la experiencia de caries (D /d) en las madres, los niños de 4 a 6 años de edad (C4-6) y de 12 a 16 años de edad (12-16 C)
variable
madres
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
CPO-D /diestro (media ± DE) guía empresas 12,4 ± 5,3
9,0 ± 5,0
5.8 ± 4.1
D /d (media ± DE)
5,5 ± 3,9
8,0 ± 5,1
4,5 ± 3,7
CPO-D /diestro = 0 (n [%])
3 [3,5]
8 [9.3]
10 [11,6]
D /d = 0 (n [%])
10 [11,6]
9 [10.5]
12 [14,0]
bajo
17 [19,8]
23 [26,7]
23 [26,7]
Medio
31 [36,0]
25 [29,1]
32 [37,2]
alta
38 [44,2]
38 [44,2]
31 [36,0]
Hubo una distribución no-igualdad de los sujetos dentro de las puntuaciones en la escala de tablero de ajedrez, con la mayoría de los recuentos bacterianos en los rangos inferiores de la escala. El análisis mostró ninguna relación entre las puntuaciones bacterianas y la experiencia caries para cualquiera de las bacterias de caries relacionados. Además, no se detectaron asociaciones significativas entre las puntuaciones bacterianas y las categorías /D D en las madres o de sus hijos menores de edad o más a excepción de una tendencia observada en relación con Streptococcus mutans
como se muestra en la Tabla 4 Distribución 4.Table de D /d en relación con S. mutans puntuaciones en las madres, de 4 a 6 años de edad (C4-6) y de 12 a 16 años de edad (12-16 C) los niños
S. mutans recuento
D /d
madres
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The mayoría de los estudios que utilizan la técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez se han centrado en el estudio de la ecología de la placa bacteriana en relación con la enfermedad periodontal [14-17]. Estos estudios revelaron una relación directamente proporcional entre el recuento de bacterias y profundidad de la bolsa periodontal. El presente estudio no pudo demostrar una relación entre los niveles de las bacterias supragingival y la experiencia de caries (CPO-D /cpod). Una relación entre la caries y la experiencia de los recuentos bacterianos salivales caries relacionadas (estreptococos mutans y lactobacilos) evaluó a través de bacterias CRT ® se encuentran en la misma muestra de estudio [9]. En el presente estudio, no se encontró relación entre las bacterias cuantificadas en las muestras de placa reunida y la experiencia de caries. Esto se corresponde bien con un estudio anterior, donde se encontró una fuerte asociación entre la caries dental y organismos cariogénicos analizados por la técnica de cultivo en comparación con el método de tablero de ajedrez [18]. Un número de factores relacionados con las características de la placa dental, el proceso de la enfermedad caries y la elección del método de muestreo, puede explicar el hallazgo actual. La interacción de bacterias en la placa dental podría hacer una mayor contribución al desarrollo de caries que la cuenta específica de ciertas especies cariogénicos. Además, la comunidad placa microbiana difiere en diferentes etapas de la maduración de la placa (a principios de la placa frente a
placa madura). Además, la ubicación de los sitios de muestreo y el número de sitios seleccionados pueden influir en la relación. El recuento de bacterias de la placa también podría verse afectada por una serie de factores relacionados con la caries distintas de las caries experiencia real como la ubicación /profundidad (esmalte frente
dentina), etapa (incipiente frente
cavitadas), nivel ( agudo, crónico o detenido), y la actividad de la lesión de caries (activo versus
inactivo). Por otra parte, la técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez tiene un alto límite de interrupción para la cuantificación bacteriana hacer la detección de bacterias en un recuento bajo de problemáticas, que puede complicarse aún más por las reacciones cruzadas [19]. Por último, la desigual distribución de los sujetos dentro de los puntajes de tablero de ajedrez con la mayoría de los bajos recuentos bacterianos en el presente estudio podría explicar la falta de resultados significativos.
Además de los problemas mencionados anteriormente, existen dos limitaciones del método de muestreo utilizado en el presente estudio. A diferencia con la saliva, es difícil de estandarizar la cantidad de bacterias en una muestra de placa. Normalización se puede conseguir fácilmente con la saliva mediante la expresión de la cantidad de bacterias en una muestra de 1 ml. Por otra parte, la puesta en común de la placa supragingival en un tubo de ensayo puede crear dificultades en la lisis de todas las células bacterianas presentes en una suspensión bacteriana muy denso [20]. Por esta razón, el muestreo mucha placa se redujo al mínimo en el presente estudio, tomando sólo una cantidad suficientemente visible de la placa supragingival. Sin embargo, la cuestión de si se recogió muy poca placa no se puede descartar.
Contrariamente al presente estudio, Aas y col. mostraron que un mayor número de especies de bacterias específicas se asociaron con la salud, caries iniciación y progresión de la caries mediante el uso de un ensayo de captura inversa [21]. Por otra parte, el presente estudio se analizaron muestras de placa reunida en comparación con muestras de diferentes sitios susceptibles de caries en la cavidad oral. Además, el índice /cpod CPOD podría ser considerado como un método crudo para describir la experiencia de caries individual y no transmite ninguna información sobre la actividad de caries. puede haber sido obtenidos Una relación entre los recuentos de bacterias de la placa y la experiencia de caries si la investigación se había realizado en un nivel específico del sitio y si los parámetros de caries relacionadas tales como la profundidad, el estadio y la actividad había sido tomada en consideración.
Conclusiones
A diferencia de las muestras de saliva y el método del lado de la silla
, interproximales muestras de placa reunida analizaron mediante la "técnica de hibridación ADN-ADN de tablero de ajedrez" no revelaron relaciones significativas entre los recuentos bacterianos y la experiencia de caries. Notas
Anette Carlén, Guglielmo Campus y Peter Lingström contribuido igualmente a esta labor.
Declaraciones
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a Ann-Britt Lundberg (Departamento de Cariología, Universidad de Gotemburgo) y Susanne Blomqvist (Departamento de Microbiología Oral e Inmunología, Universidad de Gotemburgo) por su apoyo técnico. Un agradecimiento especial a la Dra Nadia Al-Hazmi, jefe de registros dentales y presentación, el Dr. Sahar Bukhary, jefe de la División de Biología Oral, y el Dr. Motaz Ghulman, Vice Decano de asuntos estudiantiles en la Facultad de Odontología de la UAE, Reino de Arabia Saudita. El estudio fue apoyado por el Ministerio de Educación Superior de Arabia.
Conflicto de intereses
Los autores informan de ningún conflicto de intereses.
Contribuciones de los autores Fráncfort participó en el diseño del estudio, llevado a cabo la recopilación de datos y toma de muestras , corrió el análisis "tablero de ajedrez ADN-ADN hibridación", realizó el análisis estadístico y fue responsable de la escritura manuscrita. AC participó en el diseño del estudio y supervisó el texto manuscrito. GC asistida en el análisis estadístico y ayudó a redactar el manuscrito. PL participó en el diseño del estudio y supervisó el texto manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
