rata
Resumen Antecedentes
rápida cicatrización de heridas de tejidos blandos orales pueden reducir la posibilidad de infección y el malestar de los pacientes. Estudios previos han demostrado que la mejora de la angiogénesis es una forma efectiva para acelerar la reparación de heridas. En este estudio, para mejorar la angiogénesis y la curación de las heridas palatinas, dimethyloxalylglycine (DMOG) se aplicó a un modelo de herida palatal rata. DMOG es conocida para inhibir la degradación dependiente de oxígeno de la hipoxia inducible factor 1 alfa (HIF-1α), que puede conducir a la regulación de los marcadores de la angiogénesis, lo que favorece la reparación de heridas. También se evaluaron los efectos de DMOG sobre la migración celular y la expresión de HIF-1α de las células de rata palatinas (RP). Además, el ARNm y la expresión de proteínas del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) se analizaron en células RP tratados con DMOG.
Métodos
cultivos primarios de células de rata palatal (RP) se obtuvieron de Sprague-Dawley (SD) ratas. Efectos de DMOG sobre la viabilidad celular y la migración de las células RP se evaluaron mediante el uso de un inserto de formazan y cultura, respectivamente. ARNm de VEGF se observó por PCR en tiempo real, y las proteínas VEGF y HIF-1a se detectaron por transferencia de Western. Para el estudio animal, heridas por escisión, 3 mm de diámetro, se hicieron en la parte central del paladar de ratas SD. DMOG con ungüento ácido hialurónico se aplicó por vía tópica tres veces durante 1 mes, y luego el cierre de la herida se cuantificaron fotográficamente e histológicamente.
Resultados
DMOG fue citotóxica para las células RP a concentraciones superiores a 2 mM y no afectaron a la migración celular concentraciones no citotóxicas. ARNm y proteínas expresión de VEGF se estimularon significativamente por el tratamiento DMOG. El nivel de proteína HIF-1α también se estabilizó en células RP por DMOG. En el estudio en animales, los grupos tratados con 1 mg /ml DMOG mostraron un aumento de las contracturas de la herida palatinas rata.
Conclusiones
DMOG mejorado la curación de heridas de la mucosa palatina rata, que era probablemente debido al efecto angiogénico del agente. Palabras clave
Dimethyloxalylglycine factor inducible por hipoxia 1 alfa de crecimiento endotelial vascular factor de mucosa palatina de la herida Antecedentes de curación
tejidos blandos orales son inevitablemente dañado durante el injerto autólogo gingival, cirugía periodontal o cirugía de implante dental. Recuperación de los tejidos blandos de las lesiones depende del tamaño de la herida, ubicación, estado de higiene oral, y el nivel de inmunidad. La administración oral o la aplicación tópica de antibióticos se recomienda como una opción del tratamiento de heridas oral para prevenir la infección bacteriana. En el caso de defectos de gran tamaño que pueden ser causadas por los injertos autógenos de encía, materiales de decoración se utilizan para proteger los sitios donantes dañadas y para ayudar al proceso de cicatrización de la herida. Destinado rápida curación de la herida también puede reducir la posibilidad de infección y el malestar de los pacientes. En un estudio anterior, la aceleración de la reparación de la mucosa palatina se logró con un andamio de colágeno-gelatina de retención del factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), un inductor de la angiogénesis potente [1]. Timosina β
4 (Tβ 4), un oligopéptido que pueden secuestrar monómeros G-actina, que también promueve la cicatrización de heridas de la mucosa de la rata [2]. Mejora de la migración celular y la angiogénesis es probable que participen en la cicatrización de heridas por Tβ 4. Umeki et al. han demostrado que la curación de heridas de la mucosa oral se acelera por la leptina, una hormona anti-obesidad de circulación, a través de la mejora de la angiogénesis [3]. Estos estudios implican que la mejora de la angiogénesis es una forma efectiva para acelerar la reparación de heridas oral.
La angiogénesis puede ser estimulada por varios factores de crecimiento tales como el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) [4], factor de crecimiento endotelial vascular (VEFG) [5] , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) [6, 7], y factor de crecimiento transformante β (TGF-β) [8, 9]. Varios péptidos también se han reportado para promover la angiogénesis [10 a 12]. Considerando la importancia de la angiogénesis en la curación de heridas, se espera que la aplicación de proteínas y péptidos angiogénicos a heridas para acelerar la reparación de daños en los tejidos orales si las moléculas están adecuadamente entregados a los sitios de la herida. Sin embargo, la estabilidad y la actividad de las proteínas y péptidos no se puede asegurar en el ambiente oral donde la temperatura y el pH son variables debido a la comida y la bebida. En cambio, las pequeñas moléculas angiogénicas que son químicamente estables pueden ser más apropiados para las duras condiciones de la cavidad oral.
Dimethyloxalylglycine (DMOG), con un peso molecular pequeño, es un inhibidor no específico de células permeables de prolil hidroxilasas (PHDs) [13 ]. En condiciones de normoxia, PHD2 se sabe que hidroxilar restos de prolina específicos en HIF-1α, que a su vez conduce a la degradación de HIF-1α por la vía de la ubiquitina-proteasoma [14-16]. Por lo tanto, la inhibición de PHD2 por DMOG puede prevenir la degradación de HIF-1α, creando un ambiente similar a la encontrada en las células hipóxicas. Por otra parte, varios genes relacionados con la reparación de los tejidos, tales como la angiogénesis son regulada al alza. Un estudio previo mostró que DMOG mejoró la producción de VEGF en células de fibroblastos periodontales [17]. Además, Botusan et al. demostró que DMOG estabiliza HIF-1α y mejora la cicatrización de la herida cutánea en ratones diabéticos [18]. En este estudio, el efecto de DMOG en la cicatrización de heridas orales se investigó en un modelo de herida palatal rata. También se evaluaron los efectos de DMOG sobre la migración celular y la expresión de HIF-1α de las células de rata palatinas (RP). Además, el ARNm y la expresión de proteínas del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) se analizaron en células RP tratados con DMOG.
Métodos
Reactivos químicos y materiales de cultivo de células
medio de cultivo celular y los antibióticos se adquirieron de WELGENE Inc. ( Daegu, Corea). suero bovino fetal (FBS) se adquirió de Lonza (Basel, Suiza), y otros reactivos experimentales se obtuvieron de Sigma-Aldrich Co. (Saint Louis, MO, EE.UU.), a menos que se especifique lo contrario. células RP
se aislaron de la tejidos palatinas de ratas de 5 semanas de edad macho Sprague-Dawley (SD). tejidos palatinas aisladas se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (pH 7,4), asépticamente picado en trozos, y después se sumergió en medio de Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) que contiene 10% de FBS y solución de antibióticos (100 U /ml de penicilina G y 100 g /ml de estreptomicina) a 37 ° C en un incubador humidificado (5% CO 2/95% de aire). Después de 20 días de cultivo con cambios de medio a intervalos de 3 días, se recogieron las células RP y sub-cultivaron en las mismas condiciones. Pasajes de tres a cinco años se utilizaron para este estudio. A pesar de que no identificó el tipo de células del paladar en el nivel molecular, las características morfológicas de las células aisladas bajo el microscopio indicaron distinta predominio de células similares a fibroblastos.
Citotoxicidad
células RP incuban hasta que se retiraron el 80% de confluencia y sub-cultivaron a 0,8 × 10 5 células por ml en placas de 96 pocillos y se incubaron a 37 ° C con 5% de CO 2 en aire durante 24 h, y a continuación, las células se trataron con DMOG a diversas concentraciones que van desde 0,1 a 10 mM. Después del tratamiento durante 24 h, las viabilidades de células se cuantificaron usando el Cell Counting Kit-8 (WST-8) (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japón). Se incubaron las células en 100 l de solución de WST-8 durante 1 hora a 37 ° C en una atmósfera humidificada (5% de CO 2/95% de aire). La absorbancia se midió a una longitud de onda de 450 nm utilizando un lector de placas (Sunrise, Tecan, Salzburgo, Austria). La densidad óptica de las células no tratadas fue designado como 100%, y la viabilidad celular de las células tratadas se expresó como el porcentaje de control negativo no tratada.
La migración de la célula de ensayo
Para el vitro
ensayo de migración de células en un cultivo insertar (ibidi GmbH, Martinsried, Alemania) se utilizó para crear una herida en cultivo celular. El inserto de cultivo se colocó en una placa de cultivo, y 70 l de suspensión de células RP (5 × 10 5 células /ml) se añadió en dos pocillos de la inserción. Las células RP se incubaron a 37 ° C durante 48 h y luego expuestos a DMOG (0, 0,1, 0,5, 1, 2 mM) en medios de cultivo que contiene 2% de FBS para el análisis la migración celular. Se observó el cierre de la herida y se registra a intervalos bajo un microscopio de contraste de fases (Olympus, Tokio, Japón). Para cuantificar la migración celular, la zona descubierta donde no hay células estaban presentes se midió mediante el uso de programa ImageJ, y la relación de área descubierta entre el control no tratado y grupos tratados se obtuvo.
Análisis de la expresión de mRNA por PCR en tiempo real sobre The efecto de DMOG en la expresión de ARNm de VEGF se investigó mediante un ensayo en tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Después del tratamiento con DMOG en 0, 0,1, 0,5, 1, y 2 mM durante 24 h, el ARN total se aisló usando reactivo de extracción de ARN (WelPrep total Aislamiento de ARN reactivo, WELGENE Inc.). Desde el ARN total, el ADNc se preparó usando un kit de síntesis de cDNA (Power cDNA Synthesis Kit, Intron Biotechnology, Sungnam, Corea), y RT-PCR se realizó en un ABI PRISM 7500 Thermal Cycler Sistema de Detección de Secuencia (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) con volúmenes de reacción de 20 l que contenía 10 l SYBR premezcla Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Japón), 0,4 l ROX referencia tinte II (Takara Bio), ADNc, y los cebadores. Los cebadores para la amplificación del gen fueron los siguientes: sentido VEGF, 5'-GAGTATATCTTCAAGCCGTCCTGT-3 '; antisentido VEGF, 5'-ATCTGCATAGTGACGTTGCTCTC-3 '; GAPDH (deshidrogenasa gliceraldehído-3-fosfato) sentido, 5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '; GAPDH antisentido, 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3 '. Las condiciones de PCR fueron 95 ° C durante 30 s, seguido de 40 ciclos de desnaturalización a 95 ° C durante 5 s y recocido a 63 ° C (34 s) para VEGF. Todas las reacciones se realizaron por triplicado. La expresión génica se evaluó sobre la base del ciclo de umbral (valor CT) y se normalizó a la expresión del gen GAPDH. Se realizó el análisis de transferencia Western
análisis de transferencia Western para examinar la expresión de la proteína de HIF-1α y VEGF en DMOG tratados con células palatinas. Después del tratamiento con DMOG a diversas concentraciones de 24 h, las células se lisaron en tampón de extracción que contiene 50 mM de Tris base de-HCl (pH 7,5), NaCl 150 mM, 0,5% de Triton-X 100, y un comprimido de cóctel de inhibidor de proteasa (1 comprimido /10 ml, Roche Ciencias Aplicadas, Mannheim, Alemania) durante 45 minutos en hielo. Los extractos que contienen cantidades iguales de proteína se realizaron en 10% de sodio dodecil sulfato de geles de poliacrilamida y se transfirieron a membranas de difluoruro de polivinilideno. Las transferencias se incubaron con anticuerpos policlonales de conejo contra VEGF, HIF-1α, o GAPDH en PBST (PBS que contiene 0,1% de Tween 20) durante 1,5 h, se lavó tres veces con PBST, y después se sondaron con anticuerpos secundarios de cabra anti-conejo conjugado con rábano picante peroxidasa. Las bandas de proteínas se visualizaron utilizando un kit de quimioluminiscencia (West-ZOL además de sistema de detección de Western Blot, Intron Biotecnología). La quimioluminiscencia se detectó usando el SGL 1000 Plus luminiscentes analizador de imágenes (Fuji Photo Film, Tokio, Japón). Todos los anticuerpos fueron adquiridos de Santa Cruz de Biotecnología (Santa Cruz, CA, EE.UU.).
Rata palatina cicatrización de heridas ensayo
Después de confirmar el efecto de la angiogénesis en células DMOG RP, el efecto de DMOG sobre la cicatrización del tejido del paladar era realizado en un modelo de herida palatina rata. Todas las ratas fueron alojados en condiciones libres de patógenos específicos (SPF) en el Centro Experimental de los animales de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional de Seúl. Dieciocho 13 semanas de edad, las ratas macho SD (seis ratas para cada grupo), con un peso de 300-350 g, fueron utilizados en el presente estudio. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de animales Cuidado y Uso (SNU-130123-8-1) de la Universidad Nacional de Seúl (Seúl, Corea). Bajo anestesia general, las heridas de perforación se realizaron en una zona céntrica de paladar duro con una desechable de 3 mm de diámetro punzón de biopsia (Kai Industries Ltd., Gifu, Japón), dejando al descubierto un área circular de hueso desnudo. ácido (HA) ungüento hialurónico (20 mg /ml) que contenía 0, 0,5, o 1 mg /ml (5,7 mM) DMOG se aplicó a la zona de la herida. Después de la cirugía, los animales fueron alimentados con una dieta estándar de pellets y agua con enrofloxacina. Los agentes se volvieron a aplicar en los días 2 y 4 bajo anestesia para reducir el estrés, y las ratas se sacrificaron el día 7. El paladar duro se separó, y la zona de la herida se observó con un microscopio estereoscópico (Nikon, Tokio, Japón) y por análisis histológico. El área de la herida en las imágenes microscópicas se calculó utilizando el software CellSense Dimensión 1.6 (Olympus, Tokio, Japón). Se tomaron muestras para la evaluación del paladar histomorfométrico y las muestras fueron teñidas con hematoxilina y eosina (H & amp; E) tinción. Se prepararon más de diez diapositivas para cada muestra, y se seleccionaron una sección que exhibe el diámetro más ancho de la herida para el análisis histológico. Las secciones se examinaron bajo un microscopio de luz (Olympus), y se midió la distancia de márgenes de la herida en cada sección con un micrómetro ocular calibrado.
Estadístico El análisis
Para el análisis estadístico, cada experimento se realizó por triplicado a menos que se especifique lo contrario . Los datos se expresan como la media ± desviación estándar. Los análisis estadísticos se determinaron por ANOVA de una vía para el estudio in vivo y el ensayo de migración celular. de la t de Student para datos independientes
-test fue utilizado para el otro in vitro
resultados. Un P-valor
& lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
viabilidad celular y la migración de las células de ratas tratadas con palatinas DMOG
Para investigar los efectos de DMOG sobre la viabilidad celular, las células se expusieron a ratas palatinas DMOG durante 24 h. La citotoxicidad de DMOG se demostró en concentraciones más altas de 2 mM. La viabilidad celular se redujo a 60% a 4 mM, y se veía afectada principalmente a 8 mM (Fig. 1). Se observó la migración de células en medios de cultivo que contienen 2% de FBS para atenuar la motilidad celular. En ausencia de FBS, las células del paladar no tratados no mostraron ningún movimiento durante 48 h (datos no mostrados). En medio FBS 2%, un ligero movimiento de las células se muestra en 12 h, y alrededor de un medio de la zona de vacío se llenó con células penetraron en 48 h. La migración celular durante 48 h no se vio afectada por DMOG a concentraciones no citotóxicas (0-2 mM) (Fig. 2). Fig 1 Efecto de DMOG sobre la viabilidad de las células RP. células RP fueron tratados con DMOG en concentraciones que van de 0 a 10 mM durante 24 h. Datos y las barras de error indican la media ± SD de tres experimentos independientes. * Demuestra un (Hotel & P lt; 0,05) diferencia estadísticamente significativa entre el control y células tratadas
la figura 2 de migración celular de las células tratadas con RP DMOG. (A) fotomicrografías representativas de un ensayo de migración celular. células RP fueron tratados con DMOG a diferentes concentraciones en medio de cultivo que contiene 2% de FBS para el ensayo de migración de células con un aumento de 40X. (B) Análisis cuantitativo de la migración celular. La migración celular se cuantificó mediante el cálculo de la relación entre un área libre de células y ocupado por células en el interior del espacio de la herida. No aparecieron diferencias estadísticamente significativas entre todos los grupos en el mismo punto de tiempo (P Hotel & lt; 0,05)
ARNm y la expresión de la proteína del gen VEGF y los niveles de proteína HIF-1a en células tratadas con DMOG
ARNm y proteínas expresión de VEGF se cuantificó para investigar los efectos de DMOG sobre la angiogénesis en el nivel molecular. Como se muestra en la Fig. 3A, DMOG aumento de la expresión génica de forma dosis-dependiente de VEGF en células RP. El tratamiento con DMOG a 0,5 mM mostró un aumento en la cantidad de ARNm de VEGF que fue significativamente mayor que la del grupo de control, y mM DMOG 2 causó un aumento de 2,3 veces en los niveles de ARNm (Fig. 3A). La expresión de la proteína de VEGF fue también hasta reguladas por DMOG a concentraciones superiores a 0,5 mM. A diferencia del patrón dependiente de la dosis de la expresión de ARNm en las células tratadas con DMOG, un nivel 3,4 veces más alta de proteína se mantuvo a concentraciones DMOG entre 0,5 y 2 mM (Fig. 3B). expresión Fig 3 mRNA de la expresión génica de VEGF y de la proteína de VEGF y HIF-1α en las células tratadas con DMOG. células RP fueron tratados con DMOG en concentraciones que van de 0 a 2 mM durante 24 h. Datos y las barras de error indican la media ± SD de tres experimentos independientes. * Demuestra de ARNm (A) y la proteína de expresión (B) los niveles que son significativamente diferentes de los de las células de control no tratados (P
& lt; 0,05): perfil La estabilidad de la proteína HIF-1α en células RP también se vio afectada por DMOG . Se detectaron cantidades mayores de proteína HIF-1α en células tratadas con DMOG incluso a 0,1 mM que no causan un cambio en el nivel de proteína de VEGF (Fig. 3B). Un aumento de 2,6 veces en los niveles de proteína HIF-1α se demostró en las células que fueron tratadas con DMOG 0,5 mM. No existen más aumento significativo en los niveles de proteína se demostró en concentraciones más altas, lo que indica que 0,5 mM de DMOG es suficiente para estabilizar la cantidad total de proteína HIF-1α en las células.
Los efectos de DMOG en palatal la cicatrización de heridas en ratas
en un modelo de herida palatal rata, DMOG se aplicó a dos concentraciones: 0,5 y 1 mg /ml. El grupo tratado con DMOG no mostró ningún síntoma de anormalidad fisiológica durante el período experimental. Como se muestra en la Fig. 4A, el área de la herida no fue completamente epithelized en la semana 1, y se distingue fácilmente del tejido intacto en buen estado que era de color rosado pálido. La superficie media de la superficie de la herida en el grupo control fue de 2,4 mm 2. En el grupo de ensayo tratado con DMOG a 1 mg /ml, el área de la herida se redujo a 1,8 mm 2, que es modesta, pero todavía una disminución estadísticamente significativa. A 0,5 mg /ml, DMOG no afectó cierre de la herida. Fig 4 Efectos de DMOG en la cicatrización de las heridas palatinas. (A) Imágenes microscopio estereoscópico de heridas palatinas 1 semana después de la cirugía. DMOG se aplicó por vía tópica a los grupos de ensayo (b1
-B6
: 1 mg /ml: 0,5 mg /ml, c1
C6
) se aplicó, y el vehículo (20 mg /ml HA) a los grupos control (a1
-a6
) (barra de escala: 1 mm). (B) La zona de la herida calculada a partir de las imágenes de microscopio estereoscópico. * Indica una diferencia significativa en la zona del paladar de la herida en comparación con la de los grupos de control no tratados (P
& lt; 0,05)
Para confirmar los resultados mostrados en la Fig. 4A, la distancia máxima de la región unepithelized (distancia del margen de la herida) se midió en secciones histológicas de la zona de la herida. La distancia también se redujo en las ratas que fueron tratadas con 1 mg /ml DMOG, mientras que no hubo diferencia estadísticamente significativa en la distancia del borde de la herida entre el control y 0,5 mg /ml grupos tratados con DMOG (Fig. 5). Por lo tanto, DMOG claramente aceleró la cicatrización de heridas en ratas palatina a una cierta concentración. observación Fig 5 histológico. (A) y Representante hematoxilina eosina (H & amp; E) tinción fotografías (una
: estrato córneo, B Opiniones: epitelio, c
: tejido conectivo, d
: maxilares) (barra de escala: 500 m). (B) Los valores medios de la anchura máxima del paladar herida calculada a partir de las secciones teñidas con HE. * Indica una diferencia significativa en palatal anchura de la herida de los grupos tratados con DMOG comparación con la de los grupos de control no tratados (P
& lt; 0,05) Discusión
HIF inhibidores de prolil hidroxilasa se han investigado para encontrar un nuevo medicamento para el tratamiento de anemia, enfermedad renal, y la insuficiencia cardíaca [19, 20]. Promoción de la angiogénesis es un efecto terapéutico de los fármacos de reciente desarrollo dirigido, porque la angiogénesis es un paso necesario inevitablemente en la regeneración de tejidos o la cicatrización de heridas.
Se observó el efecto de DMOG, un inhibidor de la prolil hidroxilasa de HIF-1α, en la curación de heridas de rata mucosa palatina. Para vitro
estudios en, la citotoxicidad y la capacidad de regular VEGF y HIF-1α en células procedentes de tejidos de rata palatinas fueron investigados. La citotoxicidad de DMOG contra las células de ratas palatinas apareció a concentraciones relativamente altas (Fig. 1). La acumulación de la proteína HIF-1α no es probable una causa directa de la muerte celular debido a que el nivel intracelular de HIF-1α ya estaba saturado a 0,5 mM y no se alteró hasta 2,0 mM. Un estudio anterior informó de la detención del ciclo celular por inhibidores de PHD [21], lo que proporciona una posible explicación de los efectos tóxicos de DMOG. Desde la citotoxicidad, sin duda, puede perturbar la reparación de tejidos, las concentraciones DMOG para estudios in vivo deben ser elegidos cuidadosamente para obtener un efecto de curación de heridas. Marchbank et al. demostró que DMOG estimula la migración de estómago humano y células de carcinoma de colon [22]. Sin embargo, una disminución en la migración celular solo se ha observado en el estado de hipoxia de ciertas células de fibroblastos [23]. Por lo tanto, el efecto de la hipoxia o HIF-1α acumulación en la migración de células es de células de tipo específico. La motilidad de las células de rata palatinas en este estudio no fue promovida por DMOG (Fig. 2), lo que sugiere que la migración de las células del paladar similares a fibroblastos no fue un factor determinante en la cicatrización de heridas de las células tratadas con palatinas DMOG.
Anteriormente, se ha demostrado que los inhibidores de PHD hasta de regular la expresión de VEGF en diversos tipos de células, incluyendo las células endoteliales [24], las células epiteliales [25], los fibroblastos gingivales y los ligamentos periodontales [17]. De acuerdo con los resultados de estos estudios, el presente estudio también confirmó la capacidad de DMOG hasta de regular la expresión de VEGF (Fig. 3) en células similares a fibroblastos de rata palatinas. DMOG también inducida por la estabilización de la proteína HIF-1α, y se solapó el rango de concentraciones eficaces a excepción de 0,1 mM a que sólo la proteína HIF-1α VEGF, pero no fue hasta reguladas. Esto indica que VEGF no puede ser inducida en ausencia de evidentes aumentos en la cantidad de HIF-1α. Además, la estabilización de HIF-1α también se sabe que inducen transportador-1 de la glucosa y de la fosfoglicerato quinasa-1, que puede mejorar la cicatrización de la herida mediante la mejora de la re-epitelización [26].
Debido a la condición húmeda de la cavidad bucal en el experimento con animales, se requiere emplear un vehículo para ampliar el período residual de un fármaco en el área de la herida. Como un vehículo para la entrega de DMOG a la mucosa oral en este estudio, se utilizó un hidrogel de ácido hialurónico, debido a su alta viscosidad y excelente biocompatibilidad; menos citotóxica y no tiene efectos inflamatorios o alérgicos. Sin embargo, el ambiente oral es extremadamente dinámico. Alimentos, la saliva y el agua potable pueden eliminar rápidamente hidrogeles aplicados tópicamente. En el presente estudio, la estructura porosa del hidrogel de ácido hialurónico no se observó en las secciones de HE teñidas, lo que indica que el ácido hialurónico y se incorporan DMOG habían lavado lejos de la zona de la herida antes del sacrificio en el día 7. Por lo tanto, no fue posible estimar una cantidad válida de DMOG para la cicatrización de heridas. En este estudio, DMOG se aplicó a 0,5 y 1 mg /ml. Una modesta pero estadísticamente significativa reducción en el área de la herida y la distancia se produjo sólo a 1 mg /ml (. Las figuras 4 y 5). Un vehículo más durable y aumento de la concentración de DMOG podrían acelerar aún más la cicatrización de la herida palatal. Sin embargo, los resultados de este estudio demostraron que HIF-1α es un potente objetivo de la curación de heridas en los tejidos orales.
Conclusiones
La expresión de ARNm de VEGF en las células RP fue reforzada por DMOG. VEGF y expresión de la proteína HIF-1α también se incrementaron significativamente por el tratamiento con DMOG. La aplicación tópica de DMOG 1 mg /ml con una pomada de ácido hialurónico acelera significativamente la curación de las heridas palatinas en ratas. Estos resultados demuestran la utilidad de DMOG para la promoción de la cicatrización de las heridas de los tejidos blandos de la boca
abreviaciones
DMEM:.
Medio de Eagle modificado por Dulbecco
DMOG:
Dimethyloxalylglycine
HA: El ácido hialurónico
HIF-1α:
factor inducible de hipoxia-1 alfa
PHDs:
prolil hidroxilasas
RP:
palatina Rata
TGF β:
factor de crecimiento transformante β
VEGF:
factor de crecimiento endotelial vascular
Declaraciones
Agradecimientos Este estudio fue
apoyado por una beca de la Tecnología de Corea R & amp Salud; D del proyecto, el Ministerio de Salud & amp; El bienestar, la República de Corea (HI12C0735).
Conflicto de intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en competencia.
Contribuciones de los autores
YHC contribuyeron a la planificación y el diseño del estudio. ZT realizó la mayor parte del trabajo de laboratorio y análisis de datos. APS y SKM participaron en el estudio animal. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.
