RESUMEN
El propósito de este estudio fue utilizar un inmunoensayo enzimático para determinar si la difusión de la tetraciclina se produce a través de la dentina radicular de dientes humanos extraídos. Veintiún raíces eran mecánicamente preparado y luego se divide en tres grupos: experimental (G1; n = 15; tetraciclina impregnado gutta-percha (TGP) con sellador MCS); control negativo (G2; n = 3; gutapercha llano con sellador MCS) y el control de MCS (G4; n = 3; TGP sin sellador). Todas las raíces se coronalmente sellados y después se sumergen en solución salina. Tres muestras adicionales fueron utilizados como el control positivo (G3; n = 3; uno libre TGP cono n solución salina). Los resultados mostraron significativamente más difusión tetraciclina entre el Grupo 3 y todos los demás grupos. No hubo diferencias significativas entre los grupos 1, 2 y 4. difusión máxima se observó a las 24 horas, sin embargo, la velocidad de difusión se redujo significativamente. Los dientes obturados con TGP y el sellador MCS no mostraron ninguna difusión de tetraciclina por encima de un promedio de 0,006 g /ml dentro de los marcos de tiempo probado.
Vías de transmisión de la enfermedad entre el periodonto y el sistema de conductos radiculares puede ocurrir a través de la patente canales laterales y accesorios, túbulos de la dentina o formamina.1 apical Simon et al. (1972) propusieron una clasificación de las lesiones de endodoncia-periodoncia y sugirió que el tratamiento de estos dientes requieren tanto terapia2 endodoncia y periodoncia Como tratamiento de endodoncia es muy eficaz cuando se realiza correctamente, el pronóstico generalmente dependerá de la cantidad de soporte óseo perdido del periodontitis y la capacidad de tratamiento periodontal para resolver la terapia periodontal defect.3 residual puede incluir el desbridamiento minucioso de la raíz, la administración sistémica o local de antibióticos y antisépticos, resección de la raíz, la terapia regenerativa o erupción forzada de acompañamiento.
sistémica y localmente tetraciclina entregado ha sido ampliamente utilizado en el tratamiento de diversos tipos de enfermedades periodontales que se refractory.4 tiene un amplio espectro de actividad contra muchas bacterias gram-positivas y gram-negativas. El suministro sistémico de tetraciclina tiende a concentrarse en los huesos y los dientes, debido a su capacidad para unirse a matrices mineralizadas dentinarios y su liberación lenta de la dentina hace su efecto antimicrobiano sustancial. se han encontrado dosis repetidas de tetracylcine oral, para alcanzar los niveles de fluido crevicular gingival que son dos a cuatro veces la de los niveles sanguíneos, creando así un depósito encima de la concentración inhibitoria mínima para la mayoría de las bacterias patógenas que se encuentran en la vía oral cavity.4-6
además, tetraciclina, a diferencia de la mayoría de los antimicrobianos alcalinas, es estable en ambientes ácidos y sigue siendo eficaz en tissue.7 perirradicular inflamado tetraciclina también se ha encontrado para inhibir la actividad de la colagenasa y de este modo la resorción ósea.
a ampliamente utilizado localmente fibra periodontal entregado impregnado con tetraciclina es Actisite (Alza Corp., Palo Alto, CA). Estas fibras se insertan subgingival en bolsas periodontales para aumentar aún más las concentraciones en el fluido crevicular gingival y pueden sostener las concentraciones en exceso de 1.300 g /ml rango durante 10 días, 5 una concentración que es mucho más allá de la concentración inhibitoria mínima (MIC) de 0.016- 2,000 g /ml necesaria para inhibir el crecimiento de 90 por ciento de periodontales y endodónticos patógenos en Estudios vitro.8 mostrar que la terapia combinada de raspado y alisado radicular fibras más tetraciclina resultados en mucho menos sitios de progresión de la enfermedad después de un año de la monitorización en comparación con la ampliación y alisado radicular alone.9 por otra parte, la administración local de tetraciclina minimiza el potencial para el desarrollo de drogas resistance.10
Desde el punto de vista de endodoncia, que contiene yodoformo-gutapercha, MGP (Lone Star Technologies, Westport, CT) y más recientemente, tetraciclina impregnado gutta percha (TGP), (Medidenta International Inc., Woodside, NY) han sido patentados por el Dr. Howard Martin con el fin de prevenir la contaminación bacteriana después de treatment7 de endodoncia (Fig. 1). Por otra parte, el Dr. Martin recomienda el uso de su TGP en combinación con su patentado de zinc sellador que contiene óxido de yodoformo-eugenol, MCS, (tecnologías de la estrella solitaria, Westport, CT) cuando la obturación de dientes con larga data infections.11
Los estudios tienen muestran que muchas técnicas de aplicación de sellador sólo logran para cubrir 25% a 75% de Canal walls.12 Además, los selladores se han demostrado para reabsorber con la exposición prolongada a los tejidos fluid.13 lo tanto, es probable que los portales de salida permanecen patente a través del cual periodontal y los tejidos periapicales pueden entrar en contacto directo con TGP. Esta fuente de humedad sería teóricamente activar TGP y causar la liberación de tetraciclina. La tetraciclina entonces difundirse a través de y se une a los canales laterales o túbulos dentinarios para actuar como un reservorio de tetracycline.7 sustantivo
capacidad de tetraciclina administrada a difundirse a través y se unen a la dentina, 7 TGP puede tener el potencial para ser utilizado como un nuevo sistema de administración local de fármacos en situaciones clínicas que requieren tanto la terapia endodóntica y periodontal
.
El propósito de este estudio fue utilizar un inmunoensayo enzimático para determinar si la difusión de la tetraciclina se produce a través de la dentina de la raíz de los dientes humanos extraídos con obturados TGP y MCS sellador
Materiales y métodos
Fase 1:. preparación de las muestras y la muestra de solución salina colección
se seleccionaron Veintiún dientes humanos extraídos recientemente para el estudio y se almacena en el agua del grifo. Los dientes variaron en el tipo de centrales a los segundos molares. Las coronas fueron retirados, todas las lesiones cariosas fueron eliminados y los dientes con múltiples raíces se seccionaron en las raíces individuales. No se hizo ningún intento de preservar el ligamento periodontal. Todas las raíces individuales fueron modificadas en la superficie coronal para crear muestras de raíces de 13 mm (figuras 2A y amp;. B). Todas las muestras se trataron en autoclave durante 30 minutos a 250ºF a 15 PSI antes de la limpieza y dar forma. Un operador prepara cada espécimen utilizando asépticamente instrumentación rotatoria con 0,6 cónico serie de Perfiles 29 (Dentsply Tulsa Dental, EE.UU.). El foramen apical se amplió a 0,35 mm. Se utilizaron cinco ml de hipoclorito de sodio 6,0% durante todo el procedimiento de limpieza y conformación. El diecisiete por ciento de EDTA se dejó en remojo durante un minuto en todos los canales preparados para eliminar la capa residual. Todos los canales se secaron con puntas de papel y se dividieron aleatoriamente en grupos experimentales y de control. Todas las muestras fueron obturados mediante condensación lateral en frío.
El grupo experimental (G1) consistió en 15 muestras que fueron obturados con sellador tetraciclina impregnado de gutapercha (TGP) y MCS. El segundo grupo (G2) fue el control negativo y que consta de tres especímenes que fueron obturados mediante gutapercha no medicado y el sellador MCS. Grupo 3 (G3) fue el control positivo y se componía de tres conos TGP independientes. En el grupo de cuatro (G4), tres especímenes fueron obturados usando TGP sin sellador. El coronal de todas las muestras de raíces se acondicionaron con gel de ácido fosfórico al 37% (Gel Grabador, Kerr, Orange, CA) durante 15 segundos, a fondo rinced durante cinco segundos y ligeramente secas por soplado de aire suave. sistema de unión Optibond Solo (Kerr, Orange, CA) se aplica de acuerdo a las instrucciones del fabricante y la luz curados durante 20 segundos. Carisma material restaurador (Heraeus Kulzer-, Hanau, Alemania), A3 sombra, a continuación, se aplica por etapas a la superficie unida y fotocurado durante 40 segundos después de cada incremento.
Después de obturación, G1, G2 y G4 muestras fueron inmediatamente almacenados en el 100% de humedad durante 24 horas y después se transfirió a tubos de ensayo de plástico de 15 ml etiquetados individualmente, sellados y esterilizados llenos con 10 ml de solución salina estéril al 0,9%. En este momento, G3 conos TGP independientes se colocaron en sus tubos de ensayo individuales llenos con 10 ml de solución salina estéril al 0,9%. Todos los tubos de ensayo se envolvieron en papel de aluminio para minimizar la exposición a la luz. Los tubos se colocaron a continuación en una incubadora a 37ºC durante intervalos de tiempo específicos:. 24 hr, 48 hr, 96 hr, 1 semana y 4 semanas
Al final de cada intervalo de tiempo se retiraron ambos especímenes de prueba y control de sus tubos que contienen la solución salina y los tubos se envolvió en aluminio y almacenada en el congelador. Todas las muestras se colocaron entonces en nuevos tubos de ensayo de plástico de 15 ml etiquetados individualmente sellados y esterilizados llenos con 10 ml de fresco, solución salina estéril al 0,9%. El aluminio se utilizó de nuevo para envolver cada tubo. Todos los nuevos tubos se colocaron de nuevo en la incubadora hasta el siguiente intervalo de tiempo en estudio en cuyo momento se repite este proceso ..
Fase 2: Ridascreen tetraciclina competitivo ELISA (R-Biopharm Inc, South Marshall , MI) guía empresas
un estudio piloto fue completado por primera vez con el fin de determinar qué dilución de cada prueba y controlar muestra de solución salina fue requerida para producir una concentración en el intervalo entre 0,15 y 1,35 g /kg o partes por mil millones (ppb). Este intervalo de concentración corresponde a la porción lineal de la curva de calibración se muestra en el Gráfico 1. Una serie de concentrados de tetraciclina estándar de 0, 0,05, 0,15, 0,45, 1,35 y se utilizan de 4,05 ppb en una solución tampón (proporcionado en el kit Ridacreen tetraciclina) para producir la curva de calibración. Los concentrados estándar se ejecutan a lo largo de toda la samples.14
Cada kit contiene Ridascreen 96 pocillos de microtitulación con una muestra por pocillo. Cada muestra se ensayó por duplicado. Cuatro equipos de Ridascreen se utilizaron en total y los pocillos se disponen en los titulares de microtitulación previstas. Cincuenta l de estándar, se añadieron las muestras experimentales y de control a cada pocillo. A continuación se añadió cincuenta l de solución de anticuerpo anti-tetraciclina a cada pocillo y las soluciones se mezclaron suavemente y se deja reposar durante una hora a temperatura ambiente. Después de una hora, las soluciones se vierten fuera de cada pocillo y todo el líquido residual se retiró tocando los titulares de pocillos en posición invertida sobre una toalla de papel. Los pocillos se lavaron con tampón PBS con Tween. Después, se añadió un centenar de litros de conjugado enzimático y se mezcló suavemente. Esta solución se dejó en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, las soluciones se derramaron de nuevo, y todo el líquido residual se retiró tocando los titulares de pocillos en posición invertida sobre una toalla de papel. Los pocillos se lavaron de nuevo con tampón PBS con Tween y se añadieron 50 l de cromógeno a cada pocillo. Los pocillos se mezcló suavemente y se dejaron reposar por 15 minutos en la oscuridad. Después se añadieron 15 minutos, 100 l de reactivo de parada 1 N de ácido sulfúrico y se mezcla suavemente. La absorbancia se midió a 450 nm usando un espectrofotómetro de placa de microtitulación y es inversamente proporcional a la concentración de tetraciclina en los estándares o muestras. Un blanco de aire fue utilizado para la comparación. La absorbancia se leyó dentro de los 60 minutos de la adición del reactivo de parada. A continuación, la concentración de tetraciclina en g /kg en cada muestra se lee de la curva de calibración utilizando los valores medios de absorbancia obtenidos. La concentración real de tetraciclina en cada muestra se multiplica además por un factor de dilución correspondiente y se convierte en g /ml.14
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Los datos fueron recogidos y almacenados en un programa de hoja de cálculo y codificado análisis estadístico. Cálculo de los datos se preformados utilizando SYSTAT v11 para Windows (Systat Software, Inc, Point Richmond, CA). Ambos estadística descriptiva y ANOVA de dos factores se llevaron a cabo.
DISCUSIÓN El suministro local de tetraciclina y sus derivados han sido utilizados como terapia adyuvante en el tratamiento de diversos tipos de periodontitis. La periodontitis associatied con lesiones de endodoncia presenta una situación única en el que el sistema de canal de la raíz se puede utilizar para administrar localmente un agente antimicrobiano eficaz para el periodonto a través de diversas vías de patentes tales como túbulos dentinales o canales laterales. Tanto la colocación de un medicamento dentro de la cita o la obturación final son oportunidades para proporcionar el suministro local de un fármaco. El presente estudio fue el primero en utilizar un inmunoensayo enzimático, Ridacreen tetraciclina (R-Biopharm Inc.), para investigar si la difusión tetraciclina produce a través de la dentina radicular de dientes humanos extraídos cuando obturado con TGP, sellador de MCS y coronal sellada. En el pasado, autores como Wikesjo et al15 y Ciarlone et al16 utilizan tetraciclina radiactiva y recuento de centelleo líquido para cuantificar la cantidad de tetraciclina liberada de la dentina. Los inmunoensayos enzimáticos se usan frecuentemente en la investigación dental para cuantificar diversas moléculas tales cytokines17 como pro-inflamatoria o endógeno beta-endorphin.18 Ridacreen tetraciclina es un inmunoensayo enzimático comercialmente disponible. Se utiliza comúnmente para detectar residuos de tetraciclina en muestras de carne, leche, miel y agua como este antibiótico, entre otros, se utiliza como un suplemento en la alimentación animal para acelerar el crecimiento de livestock.19 acuerdo con el fabricante la producción de alimentos, esta enzima inmunoensayo puede detectar concentraciones de tetraciclina tan bajas como 0,5 x 10-5 g /ml.14 tetraciclina también se sabe que presentan photodegradation.20 para minimizar su descomposición molecular, la tetraciclina difusa en todas las muestras de solución salina se protegió de posible fuentes de luz de envolver individualmente cada tubo de muestra con papel de aluminio. tetraciclina es también conocido para romper cuando se disuelve en varios liquids.10 Así, la concentración de tetraciclina detectado en el experimental y el control de las soluciones salinas puede haber sido biológico inactivo Los restos de moléculas tetraciclyine padres. En un intento de evitar o al menos retrasar esta ocurrencia, los expertos de R-Biopharm Inc. recomienda que todas las muestras se congelaron inmediatamente. Aparte de la difusión real de las moléculas completas o parciales de tetraciclina en solución, la eficacia antimicrobiana de la tetraciclina difusa no se puede acertained basa en los resultados de este estudio. se requiere investigación adicional para confirmar el efecto antibacteriano de la tetraciclina difusa. TGP y MGP percha brazo guta con un amplio espectro de eficacia antibacteriana. Esto es pertinente en situaciones en que la filtración coronal tras la obturación, que conducen a la contaminación bacteriana y la reinfección. Alternativamente, TGP y MGP, podrían ofrecer resistencia contra las bacterias residuales que quedan en el sistema de conductos radiculares que de otra manera producir contaminación disease.17 humedad persistente se pretende para activar la tetraciclina y yodo de TGP y MGP respectively.21,7 Melker et al (2006) TGP ha encontrado que es superior tanto al pop y gutapercha regular contra las bacterias que se encuentran comúnmente en su defecto tratamientos de conductos, incluyendo E.faecalis.22 por otra parte, el Dr. Martin sugiere el uso de un producto combinado yodoformo /tetraciclina impregnados o TGP con sellador de MCS en el tratamiento de dientes con larga data infections.11 la última recomendación se ha tenido en cuenta en el diseño del estudio. A pesar de los efectos beneficiosos inmediatos de pop, un estudio reciente encontró que el pop no pudo mantener su antimicrobianos y antifúngicos efectos después de 48 y 72 hours.23 La tetraciclina ha sido ampliamente utilizado en el tratamiento de diversos tipos de enfermedades periodontales que son refractarios en la naturaleza y también se ha encontrado que es eficaz en matar Actinobacillus actinomycetemcomitans, por lo general asociada con agresivos investigadores periodontitis.4 como Rosenblatt (1986) cuestionan la eficacia antimicrobiana de tetraciclina frente a patógenos periodontales comunes, debido al desarrollo de diversos grados de la resistencia a organismos gram-positivos y anaerobes.24 a pesar de esta afirmación, Walker et al. (1979) encontró tetraciclina tener una eficacia antimicrobiana significativa frente a la mayoría de las bacterias aisladas de pockets.25 periodontal humana Entre éstos estaban Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobnacter oral, y especies de Streptococcus con concentraciones inhibitorias mínimas en los medios sólidos a 2m /ml. Más recientemente, Colombo et al (2003) llegó a la conclusión de que el uso tanto de tetraciclina sistémica y entregado localmente reduce significativamente el número de bacterias "complejo rojo" durante al menos seis meses después de treatment.26 capacidad de tetraciclina se difunda a través y se unen a la dentina era claramente evidente en varios especímenes de raíz en la terminación del estudio. Las figuras 2A & amp; B representan una muestra de G4 (control MCS) con la dentina claramente amarillo con relación a un espécimen de G2 (control negativo). Varios estudios han investigado la unión de la tetraciclina a la dentina. Las moléculas de marcador de la dimethychlortetracycline antibiótico de tetraciclina relacionados contenidos en Ledermix (Lederle Pharmaceuticals, Wolfratshausen, Alemania), se encontró que penetrar a través de la dentina de los dientes unirradiculares. Tanto la eliminación de la capa de frotis y el cemento, se encontraron para aumentar la difusión del trazador molecules.27 En consecuencia, la colocación inmediata de intracanal Ledermix en dientes replantado se ha demostrado que el resultado en estadística y significativamente más curación y menos reabsorción externa en comparación con el hidróxido de calcio. 28 en este estudio, la cantidad de tetraciclina difundido a través de los dientes obturados con TGP y MCS sellador fue estadísticamente insignificante en comparación con TGP independiente en solución salina (control positivo; G3). Dependiendo del estudio, la MIC para tetraciclina puede ser interpretado como que van desde 0,016 g /ml a 2,00 g /ml, según lo determinado por Kleinfelder (1999) o de 4 g /ml a 8 g /ml, según lo registrado por Walker et al (1981 ) .8,29 Basado en el rango informado por Kleinfelder (1999), los dientes obturados con TGP y sin sellador MCS (el control MCS; G4) y TGP independiente (control positivo; G3) tenían una difusión media de tetraciclina que cayó dentro o por encima del rango de MIC; respectivamente. Sin embargo, el rango más alto reportado por Walker et al (1980), significaría solamente autoportante TGP en solución salina (control positivo; G3) producido una concentración media de tetracylcine difusa que sería suficientemente antibacteriano. No obstante, la cantidad de difusión tetraciclina de los dientes obturados con TGP y el sellador MCS (el grupo experimental; G1) cayó muy por debajo de los dos rangos de CMI documentados para la tetraciclina La velocidad de difusión a través del tiempo tetraciclina disminuye exponencialmente desde las 0 horas. a 96 horas. Estos resultados son similares a los registrados por la velocidad de difusión a través de la dentina dimethychlortetracycline de Ledermix utiliza como un agente de recubrimiento pulpar indirecto en un estudio hecho por Abbott et al (1989), donde la tasa pico de difusión fue a las 2 hours.29 El aumento observado en la concentración de tetraciclina a partir de 96 horas a dos semanas es probablemente debido a su acumulación en solución a partir de los intervalos de tiempo más largos escogidos para este estudio y no debido a la posible reactivación de los puntos medicado. Tal acumulación no sería probablemente in vivo, donde el fluido crevicular gingival está en un estado constante de flujo. Con base en los resultados de este estudio, la obturación in vitro de dientes con TGP y MCS sellador no hace permitir la difusión suficiente de tetraciclina, según lo determinado por el Ridacreen tetraciclina, que es consistente con las concentraciones mínimas inhibitorias conocidas. la investigación futura de este producto debe investigar si hay algún beneficio para el uso de los puntos pre-empapado activados TGP como medicamento dentro de la cita durante el tratamiento del conducto radicular contra ambos patógenos endodónticos y periodontales dentro del sistema de conductos radiculares y el periodonto circundante. Dr. María Dabuleanu es en la práctica privada se limita a la endodoncia en Toronto, ON. Gabriel J. Faubert es el responsable regional y gerente de ventas senior de R-Biopharm Inc. El Dr. John Molinari es el profesor y presidente del Departamento de Ciencias Biomédicas, Universidad de Detroit Mercy. El Dr. Frank E. Rosa fue anteriormente profesor de la odontología restauradora y la oficina decano asociado de Educación de Graduados e Investigación, presidente del Departamento de Odontología Restauradora y presidente de la Junta de Revisión Institucional de la Universidad de Detroit Mercy. En este momento está en la práctica privada en Manistique, MI. El Dr. Michael Hoen es el profesor asociado y director del Programa de Graduados, Departamento de Endodoncia, Universidad de Detroit Mercy. El Dr. W. Choong Foong es el profesor asociado del Departamento de Ciencias Biomédicas, Universidad de Detroit Mercy. Nos gustaría dar las gracias a R-Biopharm, Inc. por su apoyo técnico y Medidenta Internacional por su generosa donación de tetraciclina gutapercha (TGP) y MCS del canal de raíz sellador. Salud Oral da la bienvenida a este artículo original. 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Grupo Experimental 24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mes (g /ml) de N cases1515151515Minimum0.0000.0000.0000.0000.000Maximum0.0000.0000.0060.0080.087Mean0.0000.0000.0000.0020.026Standard Dev0.0000.0000.0010.0030.029 Tabla 2 G2: Control negativo 24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mes (g /ml) de N cases33333Minimum0.0000.0000.0000.0000.000Maximum0.0000.0000.0000.0000.000Mean0.0000.0000.0000.0000.000Standard Dev0.0000.0000.0000.0000.000 Tabla 3 G3: Control Positivo 24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mes (g /ml) de N cases33333Minimum58.40018.3507.46613.18021.831Maximum85.64024.08015.83914.54030.901Mean68.76022.00010.68413.87727.107Standard Dev14.7443.1714.5100.6814.713 Tabla 4 G4: Control de MCS 24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mes (g /ml) de N cases33333Minimum0.0000.0000.0060.0270.214Maximum0.0000.0110.0330.0570.408Mean0.0000.0040.0180.0450.308Standard Dev0.0000.0070.0140.0160.097 Tabla 5 Dep Var: g /ml N: 120 Múltiple R: 0,985 Squared R múltiple: 0.970 SourceSum-of-SquaresdfMean-SquareF-ratiop-valueGroup10639.09633546.365655.5800Time2056.3174514.07995.0330Group*Time5766.76912480.56488.8370Error540.9511005.410 Table 6 Los mínimos cuadrados GroupLS Media (g /ml) NPoint /sealer0.00675Point /no sealer0.07515Positive control28.48615Negative control0.00015 Tabla 7 tiempo periodLS media (g /ml) N24 hours17.1902448 hours5.5012496 hours2.676241 week3.481241 month6.86024